基于SIRT1/TGF-β_1/Smad通路研究三七皂苷对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT的影响

[目的]研究三七皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对高糖诱导后肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的修复作用及其相关机制。[方法]培养肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞,分为正常对照组、高糖组、白藜芦醇(resveratrol,RSV)组、PNS组、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)抑制剂EX527组和EX527+PNS组。药物干预48h后收集细胞;采用免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)的蛋白表达;Real-time RT-PCR检测SIRT1、α-SMA、E-cad、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、Smad3、Smad4的基因表达,Western blot检测SIRT1、α-SMA、E-cad、TGF-β_1的蛋白表达。[结果]与正常对照组比较,高糖诱导后的NRK-52E细胞出现明显的EMT表现,即α-SMA蛋白表达增多(P0.05),E-cad蛋白表达减少(P0.01)。与高糖组比较,PNS组α-SMA蛋白表达减少(P0.05),E-cad和SIRT1蛋白表达增加(P0.01,P0.01),TGF-β_1、Smad3、Smad4基因表达降低(P0.01,P0.05)。EX527干预后,PNS作用受到抑制。[结论]PNS对肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过激活SIRT1抑制TGF-β_1/Smad通路,从而阻止高糖诱导的EMT的发生。     

益气养阴活血方对高糖诱导的NRK-52E细胞代谢记忆的影响

目的探讨益气养阴活血方通过转录共激活因子P300(P300)、沉默调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)代谢记忆的影响。方法将NRK-52E细胞按照低糖组、高糖组、短暂高糖组、高糖+中药血清治疗组、短暂高糖+中药血清治疗组进行分组干预后,免疫组化法检测细胞α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-Cadherin)表达,RT-PCR法检测P300、SIRT1 mRNA表达。结果 (1)高糖组NRK-52E细胞α-SMA表达显著升高,E-Cadherin随着高糖刺激时间增加表达逐渐降低。短暂高糖组α-SMA表达较正常组仍有明显升高,E-Cadherin表达较正常组略微减少。中药血清干预后α-SMA表达减弱,高糖刺激时间越短,干预效果越明显,中药血清干预后E-Cadherin表达明显增加。(2)高糖刺激后SIRT1 mRNA表达相对降低,P300mRNA表达相对增加,与低糖组比较差异均有统计学意义(P0.05)。高糖组与短暂高糖组比较,SIRT1 mRNA与P300 mRNA表达均未见明显差异(P0.05)。高糖+中药血清治疗组与高糖组比较,SIRT1 mRNA表达相对增加,P300 mRNA表达相对降低,差异均有统计学意义(P0.05)。短暂高糖+中药血清治疗组与短暂高糖组比较,SIRT1 mRNA表达相对增加,P300表达相对降低,差异均有统计学意义(P0.05)。高糖+中药血清治疗组与短暂高糖+中药血清治疗组比较,SIRT1与P300 mRNA表达均未见明显差异(P0.05)。结论益气养阴活血方可能抑制P300,同时刺激SIRT1表达,并通过组蛋白乙酰化修饰改变抑制炎症相关基因转录,减轻NRK-52E细胞凋亡及肾损伤,改善代谢记忆。     

2型糖尿病中医湿热困脾证的基因表达研究

[目的]从分子水平探讨2型糖尿病湿热困脾证的中医证候实质.[方法]抽取2型糖尿病气阴两虚证患者静脉血,检测血糖,血脂及电解质,分离血液中的白细胞,提取总RNA,化学发光方法检测基因芯片,用ScanAlyze软件采集图像,GEArray Ana-lyzer软件分析数据.对部分差异表达基因进行RT-PCR和Western-blotting方法验证.[结果]2型糖尿病湿热困脾证患者血糖,血脂,电解质与健康人有显著差异,基因芯片检测发现和健康人差异表达基因共38条,其中上调的基因有24条,下调的基因有14条.并发现湿热困脾证的特异性基因.通过RT-PCR和Western-blotting方法反向验证IRS-2和FOXC2基因,证实2型糖尿病湿热困脾证患者和健康人白细胞中存在IRS-2和FOXC2存在差异表达.[结论]应用基因芯片筛选2型糖尿病湿热困脾证的差异表达基因,为2型糖尿病辨证论治提供新思路.     

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达;同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平,并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低,且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌,从而发挥抗肾纤维化作用。     

从痰、瘀、毒论治糖尿病肾病

糖尿病肾病与痰湿、血瘀、邪毒密切相关。从痰瘀毒所致的糖尿病肾病的病因病机入手,探讨中医对糖尿病肾病的治疗方法。根据糖尿病肾病不同病理阶段所表现的痰湿、血瘀、邪毒的轻重不同进行辨证治疗,能取得较好的治疗效果。     

《辅行诀》和《伤寒杂病论》"方同名异"及其原因解玄

目的:研究<辅行诀>与<伤寒杂病论>的渊源关系及二者"方同名异"之特点.方法:通过<辅行诀>与<伤寒杂病论>中有关药方及服药方法来论证.结果:<辅行诀>与<伤寒杂病论>同出一源--<汤液经法>.结论:发现<辅行诀>与<伤寒杂病论>存在"方同名异"这一特点,并从仲景"避道家之称"、汉时医家方剂命名法等方面解玄"方同名异"之谜.     

运脾和络颗粒对糖尿病周围神经病变大鼠血浆β-内啡肽的影响

目的:探讨运脾和络颗粒对糖尿病周围神经病变大鼠血浆β-内啡肽的影响。方法:造模大鼠随机分成正常组、模型组、运脾和络颗粒高、中、低剂量组、甲钴胺组,用酶联免疫法检测运脾和络颗粒对糖尿病周围神经大鼠血浆β-内啡肽的影响。结果:运脾和络颗粒高、中剂量组能明显上调大鼠血浆β-内啡肽(P<0.05)。结论:运脾和络颗粒能上调糖尿病周围神经病变大鼠血浆β-内啡肽,可能是其改善糖尿病周围神经病变的机理之一。     

试论消法在糖尿病及其并发症治疗中的应用

糖尿病及其并发症属于中医学消渴及兼症范畴。从高血糖状态与中医病机"饮食积滞"的相关性,对糖尿病病因病机进行再认识,并将消法作为糖尿病及其并发症的基本治法。     

基于中医基本预防思维对妊娠期糖耐量受损的干预

随着生活水平的提高及现代人们饮食结构的变化，妊娠期糖耐量受损的患者不断增加，针对患者的特殊性体质，及此病发展的最终危害性，遵于“有故无损亦无损也”，应用“治未病”及“体质学理论”的中医基本预防思维对此期积极干预，具有可行性。