Taurolidine 联合X射线对小鼠恶性黑色素瘤细胞周期进程的影响

目的：观察taurolidine联合X射线照射对小鼠恶性黑色素瘤（B16-4A5和B16-F10）细胞周期进程的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的发生机制。方法：选择B16-4A5和B16-F10细胞系按给药浓度随机分为4组,taurolidine剂量分别为0、25、50和100  μmol.L^-1,同时进行1、2和4 Gy X射线照射,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting分析cyclin B、cdc2和caspase-3的表达。结果：与25  μmol.L^-1 taurolidine组比较, 50和100  μmol?L-1 taurolidine组诱导B16-4A5和B16-F10细胞发生_G0/_G1期阻滞,细胞数分别升高54.9%、73.7%和36.8%、55.5%（P＜0.05）; 50  μmol.L^-1 taurolidine联合2和4 Gy X射线照射组,细胞G2/M期阻滞消除,细胞数分别降低52.1%、44.2%和59.3%、52.7%（P＜0.05）。与对照组、单纯taurolidine组及单纯照射组比较,联合4 Gy X射线照射组cyclin B和cdc2的表达降低,caspase-3的表达升高（P＜0.05）。结论：taurolidine联合X射线照射可去除G2/M期阻滞,可选择地抑制肿瘤细胞cyclin B和cdc2的表达、增强caspase-3的表达,共同诱导细胞凋亡。     

含金属硫蛋白蛋奶粉对小鼠肝细胞实体瘤的治疗作用

目的：观察含金属硫蛋白（MT）蛋奶粉对荷瘤小鼠肝癌有无治疗作用。方法：70只BALB/c小鼠随机分为正常对照组10只、荷瘤鼠组20只、低剂量和高剂量含MT蛋奶粉肿瘤治疗组各20只。除正常对照组小鼠外，在其余小鼠体内移植H-22小鼠肝癌细胞株形成移植性肝癌模型，连续用含MT蛋奶粉给荷瘤小鼠灌胃2周后，每组断头处死10只小鼠，取其脾脏，采用MTT法检测各组小鼠淋巴细胞转化功能和IL-2活性，及流式细胞术检测脾脏CD4⁺、CD8⁺和CD25⁺ T细胞百分率以及淋巴细胞周期进程和凋亡的变化，以及³H-TDR 掺入法检测CTL和NK细胞杀伤活性，并采用细胞病变抑制法检测小鼠IFN-γ活性以及L929 体外杀伤法检测 TNF-α 活性。并于开始灌胃MT蛋奶粉后的第21～31天观察小鼠肿瘤大小。结果：在BALB/c小鼠形成肝癌第27、29及31天，含低剂量和高剂量MT蛋奶粉组小鼠肿瘤体积均明显小于肿瘤对照组（P<0.05）；含低剂量和高剂量MT蛋奶粉肿瘤治疗组淋巴细胞刺激指数(SI)较肿瘤对照组均显著增加 （P<0.01），含高剂量MT蛋奶粉肿瘤治疗组小鼠脾脏CD4⁺细胞百分率及CD4⁺/CD8⁺比值较肿瘤对照组均显著增加（P<0.01，P<0.05），其CD25⁺ T细胞百分率较肿瘤对照组显著降低（P<0.01）；与肿瘤对照组比较，含高剂量MT蛋奶粉肿瘤治疗组小鼠淋巴细胞G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.05），G₂/M期细胞百分率显著增加（P<0.05）；同时，含高剂量MT蛋奶粉肿瘤治疗组小鼠淋巴细胞凋亡百分率较肿瘤对照组(荷瘤鼠组)显著降低（P<0.05）；荷瘤小鼠脾脏CTL细胞毒活性显著低于正常对照组（P<0.05），含高剂量MT组CTL细胞毒活性显著高于荷瘤小鼠（P<0.05）；荷瘤小鼠脾脏NK细胞毒活性明显低于正常对照组（P<0.05），而含MT肿瘤治疗组NK细胞毒活性明显高于荷瘤组小鼠，尤其以高剂量组为显著（P<0.01）。与肿瘤对照组比较，含高剂量MT蛋奶粉显著增加了荷瘤小鼠的IL-2和TNF-α活性（P<0.01），含低剂量MT蛋奶粉对荷瘤小鼠的TNF-α活性亦有明显提高作用（P<0.01），对IFN-γ活性并无显著影响。结论：含MT蛋奶粉对肿瘤的治疗性效应可能是通过增强荷瘤小鼠的免疫功能实现的。     

小鼠分泌型γ干扰素原核表达载体pFLAG—IFN-γ的构建

目的构建小鼠分泌型γ干扰素（IFN-γ）原核表达载体pFLAG-IFN-γ。方法利用分子生物学方法,从peD—NA3．1-Egr1-IFN-γ质粒上将IFN-γ切下,然后连接到原核表达载体pFLAG-shift12^TM上,构建成pFLAG-IFN-γ表达载体,进行PCR、酶切鉴定。结果经鉴定,所构建的质粒pFLAG-IFN-γ的鉴定结果与预期的一致。结论成功地构建了带有分泌信号的原核表达载体pFLAG-IFN-γ。     

骨髓间充质干细胞在电离辐射诱发的小鼠胸腺组织损伤中的作用

目的：观察骨髓间充质干细胞（MSCs）在电离辐射诱发的胸腺组织损伤中的迁徙、定居及修复作用。方法： 体外分离培养的C57BL/6小鼠MSCs,DAPI标记,经C57BL/6小鼠（n=6）尾静脉注入后,分别于1、5及10 d处死小鼠（每次2只）,取胸腺组织在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在小鼠胸腺组织中富集情况;另取18只C57BL/6小鼠行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周,制备电离辐射诱发的胸腺组织损伤动物模型。实验设正常对照组、照射组、照射+生理盐水组及照射+MSCs组,每组6只。3个月后取各组胸腺组织,采用流式细胞术测定胸腺细胞凋亡率,组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用。结果：　激光共聚焦显微镜下观察 MSCs经尾静脉注入1 d后即出现在胸腺组织内,5 d后开始弥散,10 d后广泛弥散。流式细胞术检测到照射组胸腺细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.05）,照射+MSCs组胸腺细胞凋亡率明显低于照射组（P<0.05）。病理观察结果,正常对照组小鼠胸腺组织皮、髓质结构清楚,皮质内有大量的淋巴细胞,髓质内存在少量淋巴细胞;照射组和照射+生理盐水组胸腺组织皮、髓质结构不清,淋巴细胞广泛凝固性坏死;照射+MSCs组胸腺组 织皮、髓质内可见残存或新生的淋巴组织,皮质结构仍存在。结论：MSCs可以迅速地富集在损伤胸腺组织中,促进损伤胸腺再生与修复。     

多次低剂量照射对雄性糖尿病大鼠脾细胞凋亡和免疫因子的影响

目的 观察多次低剂量辐射(LDR)对糖尿病(DM)大鼠脾细胞凋亡和免疫因子的影响。方法 大鼠随机分为对照组、DM组和DM+LDR组;剂量分别为25、50和75 mGy,共照射15次;照射后4周,采用流式细胞术检测脾细胞凋亡和TCRα β百分数的变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和脾细胞培养上清IL-2含量的变化。结果 与对照组相比,DM和DM + LDR两组大鼠体重均下降,尤以DM组明显。DM+LDR组大鼠血糖水平虽明显高于对照组(t₂₅=23.321、 t₅₀=18.329、 t₇₅=9.23,P<0.01),但显著低于DM组(t₂₅=3.574、 t₅₀=4.593、 t₇₅=5.577,P< 0.01)。同时发现:与对照组相比,DM+LDR各组脾细胞凋亡增加,其中DM+50 mGy组增加明显(t₅₀=4.102,P<0.01)。血清IL-2含量也增加,但是差异均无统计学意义。脾细胞培养上清IL-2含量明显下降(t₂₅=7.778、 t₅₀=7.411、 t₇₅=8.325,P<0.01)。与DM组相比,DM+LDR各组脾细胞凋亡和TCRα β百分数均明显降低(凋亡:t₂₅=4.772、 t₅₀=3.346、 t₇₅=6.778;TCRα β:t₂₅=3.381、 t₅₀=5.807、 t₇₅=2.356,P<0.05～P<0.01)。血清IL-2含量呈下降趋势;脾细胞培养上清IL-2含量均有升高趋势。结论 多次LDR能够削弱糖尿病造成的大鼠体重减轻和血糖升高,降低糖尿病所致的脾细胞凋亡,并能调节脾脏免疫因子,改善其失衡状态。     

低剂量辐射与糖尿病

低剂量辐射(LDR)诱导免疫兴奋效应及适应性反应的机制可能与LDR诱导的保护性蛋白和抗氧化物质有关,并在糖尿病(DM)及其他疾病中具有明显的治疗效果。主要综述LDR对DM发生发展及其并发症的作用和可能的机制,并讨论LDR应用于临床及DM并发症的前景。     

逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用

目的：检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA（small hairpin RNA,shRNA）对人胚胎肾细胞（HEK293）中p53基因的干扰作用。方法：将人H₁启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游,人CD₄基因替代匀霉素抗性基因,作为检测标志。针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H₁启动子的下游,构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH₁-p53,即RNAi表达载体;利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化。结果：成功构建LTRH₁-p53载体,该载体感染HEK293细胞后72 h,与感染空病毒载体LTRH₁组相比,P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH₁组的69％（P<0.01）。结论：LTRH₁-p53表达载体成功使p53基因沉默,shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具。     

含金属硫蛋白蛋奶粉对H-22小鼠肝癌的预防作用

目的：观察含金属硫蛋白（MT）蛋奶粉对BALB/c小鼠H-22肝癌的预防作用。方法：雌性BALB/c纯系小鼠70只随机分为正常对照组(10只)、荷瘤鼠对照组(20只)、含MT蛋奶粉预防肿瘤低剂量及高剂量组(各20只)。将MT低和高剂量蛋奶粉给小鼠灌胃2周后,皮下接种H-22细胞,建立小鼠移植肿瘤模型,观察MT蛋奶粉对肿瘤出现时间及肿瘤大小和生长的影响;观察1个月后处死小鼠,MTT法检测脾脏淋巴细胞转化功能,流式细胞术检测脾脏CD4⁺、CD8⁺和CD25⁺ T细胞百分率以及细胞周期进程和凋亡的变化,³H-TdR掺入法检测CTL和NK细胞杀伤活性。结果：与荷瘤对照组相比,含MT蛋奶粉组小鼠其肿瘤生长速率显著降低（P<0.05）,淋巴细胞增殖率显著增加 （P<0.01）,脾脏CD4⁺和CD8⁺ T细胞百分率及CD4⁺/CD8⁺比值显著升高（P<0.05或P<0.01）, CD25⁺ T细胞百分率和淋巴细胞凋亡百分率均显著降低（P<0.05或P<0.01）, NK细胞毒性显著提高 （P<0.05或P<0.01）,CTL细胞毒性亦显著增高（P<0.01）。结论：含MT蛋奶粉可明显增强荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠移植性肿瘤的生长起到一定程度的抑制作用。     

金属硫蛋白抗氧化损伤作用及其机制

电离辐射、高血糖和过氧化亚硝酸盐等因素通过诱导活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的形成,对机体产生损伤效应,而金属硫蛋白（MT）是正常存在于人体内的低分子蛋白质,其还原型半胱氨酸含量较高,具有较强的抗氧化作用。本文作者简要综述MT抗电离辐射、高血糖症和过氧化亚硝酸盐氧化损伤作用及其机制。