酿酒酵母中PiggyBac转座子筛选系统的构建

PiggyBac(PB)是来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的TTAA型转座子。PB转座子系统可作为一种插入型突变工具,应用于多种真核细胞中。本研究在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中构建了一个基于PB转座子的筛选系统。系统由插入ADE2基因编码框的PB转座子及由半乳糖启动子调控表达的PB转座酶(PBase)两部分组成。在PBase诱导下,PB转座子可以从原始位点无痕移除并随机插入新的基因位点。PB转座子在转座过程中保持单一拷贝数,在每个突变细胞中只有一个插入位点,并可快速检测突变基因。实验结果表明:所构建的PB转座子筛选系统可应用于酿酒酵母中的基因筛选。     

酿酒酵母孢子作为GLP-1载体的研究

胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)的口服给药研究已成为目前抗糖尿病研究领域的热点之一。本文通过对GLP-1进行基因改造和优化,并以酿酒酵母孢子作为保护和运输载体,将GLP-1表达到酿酒酵母孢子内,使GLP-1能在口服给药过程中抵抗胃肠道消化酶的降解以提高其生理活性。结果表明,GLP-1被成功表达到酿酒酵母孢子内,表达GLP-1的孢子经模拟肠胃液处理后与胰岛β细胞MIN6细胞共培养可显著提高MIN6细胞胰岛素分泌量。本研究利用酿酒酵母孢子作为载体,提高了GLP-1的抗酶解能力和促胰岛素活性,为进一步开发治疗糖尿病口服药物奠定了基础。     

osw2对酿酒酵母孢子固定化酶影响的分析

构建了α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转入酿酒酵母野生型AN120及osw2△突变株并进行固定化酶活性测定。实验分别选取蜜二糖、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)3种低聚寡糖作为Mel1p的底物,检测两种菌株孢子固定化酶对这3种底物的催化活性,结果表明野生型AN120酵母孢子壁的孔径最大只允许介于三糖和四糖之间的底物通过,四糖不能通过;而osw2△突变株酵母孢子壁的孔径可以允许四糖通过。通过孢子固定化酶保护性实验,发现孢子固定化酶可以完全抵抗2%SDS的处理,也可部分抵抗10%SDS的处理。通过8 mol/L尿素处理后,酶活检测发现野生型AN120酵母孢子可阻挡尿素对孢子固定化酶的影响,而osw2△孢子不能;蛋白免疫印迹分析进一步表明,尿素处理后野生型AN120酵母孢子固定化酶的含量几乎不变,而osw2△突变株孢子固定化酶的含量明显降低,说明尿素可进入osw2△突变株孢子内部溶解并降低固定化酶的含量,但对AN120酵母孢子无影响。本研究也在多种突变株孢子中表达Mel1p,并进行活性比较,发现osw2△,osw2△ydl186w△及osw2△ydr326c△突变株固定化酶均有很高的催化活性。     

隐身目标防御拦截关键技术研究

中隐身目标是水面舰艇面临的现实威胁,严重破坏了水面舰艇防空反导体系。从舰空导弹拦截隐身目标的主要挑战出发,分析主要反隐身技术的发展以及在国外的应用情况,提出了水面婉艇编队对隐身目标防御拦截的关键技术。     

高速公路施工中冲击碾压技术的应用分析

随着我国经济的发展和社会的进步,高速公路已经成为具有社会功能的基础工程。在高速公路的建设中,冲击碾压技术对于提高施工的质量有着重要的作用,特别是当前人们对高速公路的质量提出了更高的要求,因此需要恰当的使用冲击碾压技术。基于此,本文从冲击碾压技术的原理及优势入手,首先分析了冲击碾压技术在高速公路施工中的应用,然后研究了冲击碾压技术在告诉公里施工中的注意事项,希望可以借此来给高速公路质量完善的相关研究提供一定的借鉴。     

紫罗山水文站浮标系数实验测定与分析

浮标法测流的精度,主要取决于浮标的系数选用。在天然河道水力因素自然地理也各有别,而且与浮标系数均有直接的影响。文章对浮标系数在有条件的山区站紫罗山水文站进行实验研究,取得不同条件下浮标系数和中泓浮标系数,对今后更好的开展浮标法流量测验工作奠定了良好的基础。     

高硫柴油加氢处理生产低硫,低芳烃柴油的研究

利用中型试验装置对中东原油生产的高硫直馏柴油进行加氢处理生产低硫、低芳烃柴油的工艺研究。考察了反应温度、氢分区、空速、氢油比等工艺参数以及原料油性质和循环氢中Ｈ２Ｓ浓度等操作条件对深度脱硫、脱芳烃效果的影响。研究结果表明：利用ＲＮ－１加氢处理催化剂，对含硫量（质量分数）１．３％左右的高硫直馏柴油的加氢脱硫（ＨＤＳ），可以在缓和的条件（ＰＨ＝３．２ＭＰａ，ＬＨＳＶ＝３．０ｈ－１）下生产出硫含量低于０．０５％的低硫柴油；在中等压力（ＰＨ＝６．４ＭＰａ）和降低空速的条件下生产出低硫、低芳烃（Ｓ＜０．０５％、芳烃（体积分数）＜２０％或１０％）柴油。     

基于BP人工神经网络的碳纤维性能预测系统设计

针对碳纤维生产工艺的特点,利用MATLAB软件的神经网络工具箱和MATLAB GUI设计一套碳纤维性能预测系统.实验数据表明,该系统仿真误差小,预测结果满足实验规律.     

PAN基碳化纤维静电耗散材料的表面电阻率研究

制备了一种以氟碳树脂为基体,聚丙烯腈(PAN)基短切碳化纤维为导电填料的抗静电复合涂层。讨论了纤维的含量、长度、涂层厚度及外加电压对涂层表面电阻率的影响。结果表明表面电阻率和碳化纤维质量分数之间的关系符合逾渗理论,当纤维长度为4mm时,此体系的渗滤阈值为2.5‰(质量分数),其表面电阻率为106Ω,具有良好的抗静电性能;表面电阻率随纤维长度的增加而降低,但降低的程度愈来愈小;涂层厚度在不超过134μm的情况下,对表面电阻率的影响较小;涂层的表面电阻率在高外加电压下较低外加电压下小;碳化纤维/氟碳树脂复合涂层的导电机理是由导电通道、隧道效应和场致发射3种导电机理竞相作用的结果。     

人来源α-1,3/1,6甘露糖转移酶Alg2的

在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol。作者探究人来源的Alg2蛋白（hAlg2）在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并纯化后的体外活性。构建酿酒酵母w303a-GAL1pr-ALG2,并利用该菌株的生长被葡萄糖抑制的特点,发现过表达hALG2基因能够回补其生长缺陷,证实了hALG2和ScALG2的功能同源性。作者利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化了TrxA-hAlg2,并以Man1GlcNAc2-PP-Phy（PPGn2M1）代替hAlg2的天然底物,测定了其体外活性。结合液质联用的方法,检测发现TrxA-hAlg2具有催化PPGn2M1生成PPGn2M2和PPGn2M3的甘露糖基转移酶活性,为建立基于大肠杆菌表达纯化的hAlg2体外反应体系奠定了基础。