CBP棕榈酰化位点的突变对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生物学行为的影响

背景与目的：Src羧基末端激酶结合蛋白（Csk-binding protein，CBP）是新近发现的通过棕榈酰化位点锚定脂筏，参与多种肿瘤的发生、发展过程的抑制性跨膜接头蛋白。本研究旨在观察棕榈酰化位点异常的CBP对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其相关的分子机制。方法：构建CBP-增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）融合蛋白的慢病毒表达载体，采用反转录病毒转染的方法建立CBP棕榈酰化位点突变的A431细胞系以及CBP过表达的A431细胞系，实验分为4组：空白对照组（Parental组，未进行基因转染的A431细胞）、阴性对照组（Control，A431细胞转染仅含EGFP 阴性对照病毒载体）、阳性（过表达）对照组（WT-CBP，A431细胞转染WT PAG1-EGFP病毒载体）、实验组（Mutant-CBP，A431细胞转染棕榈酰化位点突变的CBP-EGFP病毒载体）。采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测转染率，并用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测转染后细胞中CBP mRNA表达和蛋白水平，验证转染是否成功。采用流式细胞术检测CBP棕榈酰化位点突变对细胞凋亡的影响；细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）细胞增殖实验、划痕、transwell迁移及侵袭实验检测CBP棕榈酰化位点突变对A431细胞生长、迁移和侵袭能力的影响；用Western blot检测Csk和Fyn两种下游信号转导分子蛋白水平的变化。结果：建立了稳定的CBP棕榈酰化位点突变A431细胞系和CBP过表达A431细胞系。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，结果显示，与Control组和Parental组比较WT-CBP组A431细胞的凋亡明显增多，差异有统计学意义（P<0.001）；但Mutant-CBP组A431细胞的凋亡与WT-CBP组相比明显减少，与Control组和Parental组比较差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验结果表明，与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞愈合率明显降低（P<0.001），而CBP棕榈酰化位点突变A431细胞愈合率没有明显变化（P＞0.05）。Transwell迁移和侵袭实验结果表明，与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞的迁移、侵袭能力明显降低（P<0.001），过表达CBP棕榈酰化位点突变A431细胞的迁移和侵袭能力与WT-CBP组相比明显增高，而与Control组和Parental组相比差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果表明：WT-CBP组Csk和Fyn蛋白与Parental组和Control组相比表达明显增加（P<0.001），而Mutant-CBP组Csk和Fyn蛋白的相对表达水平与Parental组和Control组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论： CBP上调可以抑制A431细胞的增殖，但棕榈酰化位点突变的CBP丧失了发挥抑制细胞增殖的功能。由此可见，棕榈酰化位点突变可影响CBP发挥其抑制细胞增殖的作用。     

儿童支原体肺炎58例临床诊疗分析

目的:探讨儿童支原体肺炎的临床症状特点及诊疗方法。方法:选择58例确诊为支原体肺炎的患者为研究对象,回顾分析其临床资料。58例支原体肺炎患儿中幼儿组、学龄前组及学龄组分别占27.59%、24.14%、48.28%。临床多表现为刺激性咳嗽、发热,婴幼儿影像学多见斑片状阴影,学龄儿童以节段性、大片状阴影常见。结果:经过1个月治疗后,治愈38例(65.52%),显效14例(24.14%),好转4例(6.90%),总有效率为96.55%。结论:可采用MP-IgM抗体测定确诊支原体肺炎肺炎,采用红霉素和阿奇霉素序贯疗法进行治疗,安全有效,具有可行性。     

颈内静脉插管在人工肝中的应用与护理

颈内静脉留置单针双腔管建立血液通路具有迅速、安全、穿刺成功率高、血流量大和不限制患者活动等优点,已作为人工肝治疗的首选血液通路.目前颈内静脉插管的护理问题成为人工肝治疗中护理工作的重点.现将本院在人工肝治疗前后颈内静脉插管的护理要点进行总结,与从事人工肝护理的同行探讨.     

行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区神经生长因子表达的影响

目的 研究行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区神经生长因子（NGF）表达的影响。方法 将102只SD大鼠随机分为训练3d、7d、14d、21d、28d、35d、42d、49d组；制动3d、7d、14d、21d、28d、35d、42d、49d组及正常对照组，每组6只。采用光化学法造成大鼠左侧海马区梗死，训练组于造模ld后开始给予水迷宫训练，制动组于造模1d后扦始给予制动，观察不同时间点各组大鼠海马齿状回区NGF的表达。结果 正常大鼠海马的齿状回区NGF有一定的表达，造模后，训练组及制动组齿状回区NGF的表达均有所增高，但训练组的表达要高于制动组。结论 行为学训练可增加NGF在海马齿状回区的表达，可能会促进大鼠海马梗死后脑自身的修复能力，促进神经功能的重建。     

一起肠炎沙门菌食物中毒的快速诊断与溯源

本研究采用改良分子信标-实时PCR快速检测方法和核酸脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术，成功地应用于深圳市一起细菌性食物中毒的快速诊断和准确溯源。     

哮喘患者IL-13基因Intron3+1923位点C/T、β2-AR基因R16G单核苷酸多态性及HLA等位基因频率表达对外周血T淋巴细胞亚群和IgE的影响

目的探究白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)基因、β2肾上腺素能受体(β2 adrenergic receptor,β2-AR)基因、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因对哮喘患者外周血T淋巴细胞亚群和血清IgE的影响。方法收集2019年1月至2020年1月就诊的90例哮喘患者作为疾病组,另收集同期体检的90例健康志愿者作为健康人对照组,使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测2组IL-13基因Intron3+1923位点C/T多态性、β2-AR基因R16G单核苷酸多态性及HLA等位基因频率;采用流式细胞术测定2组T淋巴细胞亚群的表达水平,ELISA法检测血清IgE的表达水平。结果疾病组和健康人对照组IL-13基因Intron3+1923位点中TT(15.56%vs 0%,χ²=16.873,P=0.000)、TC(43.33%vs 27.78%,χ²=5.276,P=0.022)、CC(41.11%vs 72.22%,χ²=19.707,P=0.000)基因型频率的差异有统计学意义;此外,与健康人对照组比较,疾病组β2-AR基因R16G多态性中AA型频率(47.78%vs 21.11%,χ²=15.750,P=0.000),HLA 0401型(13.33%vs 0%,χ²=14.282,P=0.000)、0601型(12.22%vs 0%,χ²=13.015,P=0.000)频率均明显升高。IL-13基因Intron3+1923位点TT及TC型CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8+表达水平较CC型明显降低(P均<0.01),而IgE表达水平(P均<0.01)明显升高。β2-AR基因R16G位点AA型CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8+表达水平较GG、AG型明显降低(P均<0.01),而IgE表达水平明显升高(P均<0.01)。HLA基因0401及0601型较0101/0102、0103、0501型明显降低(P均<0.01),而IgE水平明显升高(P均<0.01)。结论IL-13基因Intron3+1923位点C/T、β2-AR基因R16G位点AA、HLA基因0401及0601型突变等位基因频率在哮喘患者中的表达水平存在显著差异,可能是哮喘发病的危险因素。     

空间-时间相关成像技术在胎儿心脏超声检查中的应用价值

目的：探讨应用空间-时间相关成像（STIC）技术进行胎儿心脏超声检查的可行性和临床价值。方法：应用STIC技术对30例孕龄20～34周正常胎儿进行数据采集及脱机分析和处理，对胎儿心脏各解剖结构进行显示和观察。结果：30例研究对象在获得容积数据后，通过正交三平面模式对图像进行切割平移或旋转，有26例成功获得了心脏各解剖结构，4例心脏结构未能完全显示。结论：STIC技术较传统超声心动图具有优势，具有广阔的临床应用前景。     

大黄对有机磷农药中毒并发胃肠功能衰竭的治疗作用

目的 :观察大黄对有机磷农药中毒并发胃肠功能衰竭的疗效。方法 :将 10 7例急性有机磷农药中毒患者随机分为治疗组 ( 5 4例 )、对照组 ( 5 3例 ) ,观察大黄对胃粘膜出血的止血疗效和恢复肠蠕动的疗效。结果 :治疗组与对照组间止血和预防再出血有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,缓解腹胀 ,恢复肠蠕动有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :大黄能有效防治有机磷农药中毒并发胃肠功能衰竭 ,促进胃肠蠕动恢复 ,保护胃肠粘膜屏障。     

阿奇霉素治疗支原体肺炎60例疗效观察

支原体（MP）是迄今已知能独立生活的最小微生物，其大小介于病毒和细菌之间。从人体分离到16种支原体，其中使人致病的有肺炎支原体、人型支原体和解脲支原体。由肺炎支原体感染引起的肺炎称为肺炎支原体肺炎。阿奇霉素与红霉素均为大环内酯类抗生素，它是由红霉素衍生而来的，主要针对革兰阴性菌的感染作用较强。阿奇霉素的毒副作用小，且易渗入组织，其组织浓度为同期血药浓度的10～100倍。现收集我院2003年3月～2008年1月收治的112例支原体肺炎病例，随机给予阿奇霉素及红霉素静点进行治疗，通过两组对照，从中体会到：阿奇霉素治疗支原体肺炎疗效显著、毒副作用小，值得临床推广，现报告如下。     

应用三维超声透明模式诊断胎儿脊柱裂

脊柱裂是胎儿神经管畸形病变 ,发病率较高 ,产前早期诊断非常重要。本研究旨在通过三维超声透明模式重建 ,探讨三维超声诊断胎儿脊柱裂的方法及临床应用的可行性。资料与方法一、研究对象9例脊柱裂胎儿 ,胎龄为 15～ 3 4周 ,孕妇年龄 2 2～ 3 7岁。胎儿同时合并无脑畸形 2例 ,脑积水 1例 ,内脏外翻 1例 ,羊水过多 6例 ,此 9例脊柱裂胎儿均经引产后证实。 8例 15～ 3 6周正常胎儿作为对照。二、仪器与方法应用Ｖｏｌｕｓｏｎ 5 3 0Ｄ三维超声显像仪 ,容积探头频率3 .5 /5 .0ＭＨｚ ,经阴道三维超声容积探头频率 6.5ＭＨｚ。采集中探头置于病…