腰椎间盘突出症与磷脂酶A_2关系的研究(摘要)

腰椎间盘突出所致腰腿疼的病因到目前尚不十分清楚．近年来生化因素方面的研究已引起了普遍关注．磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ＰＬＡ２）作为调控花生四烯酸链式反应的限速酶,在炎症中起重要作用．为了探讨腰椎间盘突出症与ＰＬＡ２活性、ｐＨ值以及皮质醇含量之间的关系,以进一步了解ＰＬＡ２在该症中的作用,以２０例腰椎间盘突出症患者作为实验组,以５例腰椎急性创伤性骨析患者作为对照组．用微量酸滴定法测定椎间盘、黄韧带、硬膜外脂肪以及静脉血中ＰＬＡ２活性;用荧光分光光度法测定血中皮质醇含量;用Ｂｅｃｋ…     

具强杀菌活性的兔Ⅱ型磷脂酶A2互补DNA克隆及其顺序确定的研究

目的:确定具强杀菌活性的兔Ⅱ型磷脂酶A2(PLA2)cDNA和蛋白质的一级结构,了解其杀菌功能与蛋白质一级结构的关系.方法:用PCR方法从兔骨髓cDNA库中克隆出Ⅱ型磷脂酶A2 cDNA并确定DNA顺序,推断出它的蛋白质一级结构;并与其它一些动物PLA2的结构进行比较.结果:成功获得了该磷脂酶A2的cDNA和蛋白质一级结构.它是目前上百种已知蛋白质一级结构的磷脂酶A2中碱性最强的蛋白,氨基酸组成中碱性氨基酸较丰富.其它具杀菌活性的哺乳动物Ⅱ型磷脂酶A2也都是碱性强的蛋白.结论:磷脂酶A2一级结构中富于碱性氨基酸是其具有杀菌功能的关键,而杀菌活性的强弱与其分子碱性强度呈正相关.     

缺氧条件下梭曼中毒大鼠血清和心肌磷脂酶A2活性的变化

目的探讨高原缺氧条件下梭曼中毒大鼠磷脂酶A2(PLA2)活性变化与心脏损伤的关系.方法实验大鼠随机分为正常对照组、高原缺氧组、平原中毒组和高原中毒组,采用放射免疫法测定模拟高原4 000 m缺氧条件下梭曼中毒后大鼠血清和心肌PLA2活性的变化.结果缺氧和梭曼中毒单一或复合损伤均可引起PLA2活性升高.与平原中毒组比较,高原中毒组大鼠血清PLA2活性在各时间点均明显升高(P＜0.01),心肌PLA2活性在12小时和24小时显著增强(P＜0.01).结论PLA2活性增强可能是导致高原梭曼中毒心脏功能损伤加重的重要原因之一.     

眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶A_2对三氯化铁诱导的大鼠动脉血栓形成的抑制作用

目的　研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶A2 组分Ⅰ (命名为APLA2 Ⅰ)抑制动脉血栓形成的能力 ,观察将其开发成抗血栓药物的可能性。方法　模型组大鼠舌下ivPBS,3组APLA2 Ⅰ预治疗组大鼠分别舌下ivAPLA2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5和 0 .1mg·kg-1 。各组给药 30min后 ,用 40 %FeCl3 诱导大鼠腹主动脉血栓形成 ,监测远端腹主动脉压 ,记录最低腹主动脉压和血栓形成时间 ,测量血栓面积及血栓重量。采用大鼠体外血浆凝块回缩实验观察APLA2 Ⅰ对血浆凝块回缩的影响。用小鼠尾动脉出血实验观察APLA2 Ⅰ对出血时间的影响。结果　预ivAPLA2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5及 0 .1mg·kg-1 可抑制FeCl3 诱导的大鼠血栓形成后的腹主动脉压下降 ,使最低腹主动脉压从(4.0± 0 .5)kPa(模型组 )分别增高至 (7.7± 1 .0 ) ,(6 .8±0 .8)和 (5 .4± 0 .7)kPa ;使血栓形成时间从(31±4)min(模型组 )分别延长至 (60± 7) ,(53± 5)和(49± 6)min;使血栓面积从 (1 0 62± 1 39) μm2 (模型组 )分别减少至 (72 4± 74) ,(785± 96)和 (91 0±1 2 6) μm2 ;使 0 .5cm长血管内血栓重量从 (5 .2±0 .6)mg(模型组 )分别减少至 (3 .5± 0 .5) ,(3 .8±0 .5)和 (4.6± 0 .6)mg(P <0 .0 5 ,n =1 0 )。体外实验显示APLA2 Ⅰ能剂量依赖性地抑制大鼠血浆凝块回缩?     

黄连素的抗炎作用及其机制

目的探讨黄连素抗炎作用及其机制。方法（采用中性粒细胞趋化法、化学发光法、微酸滴定法和紫外分光光度法等，从细胞和分子水平观察黄连素（berberine，Ber）对中性粒细胞及几种重要炎症介质的影响。结果5×10-5、5×10-4mol·L-1明显抑制趋化因子ZAP（zymosan-activitedplasma）诱导的中性粒细胞趋化;抑制多形核白细胞酵母多糖诱导的化学发光;对白细胞系产生的羟自由基及过氧化氢导致的化学发光亦有显著的抑制作用;明显降低中性粒细胞中磷脂酶A2（PLA2）的活性。在整体实验中，Ber30、60、90mg·kg-1，ig，可明显降低大鼠炎症组织中PGE2的含量。结论Ber的抗炎作用可能与抑制中性粒细胞趋化、产生活性氧的功能，抑制自由基产生，降低PLA2活性，减少炎症组织中PGE2的产生等多因素有关。     

磷脂酶A2与创伤

磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２ＰＬＡ２）是一种能催化磷脂甘油分子上二位酰基的水解酶，亦是花生四烯酸（ＡＡ）、前列腺素及血小板活化因子（ＰＡＦ）等生物活性物质生成的限速酶，所产生的脂质介质在炎症和组织损伤时膜通道的活化、信息传递、血流动力学...     

补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达

目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

磷脂酶C-γ1在高温诱导热休克蛋白70表达中的作用

目的：研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70．HSP 70)表达的影响。方法：以基因敲除方法建立的缺失plcgl基因(plcgl^-/-)及野生型(plcgl^ / )小鼠胚胎成纤维细胞为模型。Western免疫印迹-增强化学发光法检测它们在高温诱导时的HSP 70表达，并以酶联免疫吸附(ELISA)法做半定量分析．MTT法对比分析两种细胞的热耐受力。结果：两种细胞经43℃与45℃高温诱导30min．都能引起HSP 70合成．但plcg^-/-细胞HSP 70表达水平显著低于plcgl^ / 细胞．P＜0．01；较低温度(41℃)不能诱导plcgl^-/-细胞HSP 70表达,却能引起plckgl^ / 细胞HSP 70表达,且plcgl^-/-细胞的热耐力亦明显低于plcgl^ / 细胞.结论：PLC-γ1参与了热诱导成纤维细胞HSP 70表达的信号转导。     

眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A_2的研究进展

眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)作为眼镜蛇毒中的一个重要成分,有着广泛的生物学活性,近年来的研究热点正日益从眼镜蛇粗毒转向毒素中的某个单体,如sPLA2的研究。该文简要综述了眼镜蛇毒sPLA2的结构特征、分离纯化以及分子生物学特性,着重论述了sPLA2多样的药理毒理作用,并对其作用机制和发展前景进行了探讨。     

动态观察不同的药理性阻断剂对膜磷脂PtdIns(4,5)P2的代谢过程的影响特征

目的时空观察PtdIns(4,5)P2在细胞内水解及再合成的动态变化过程,并比较渥曼青霉素(wortmannin)、氯化锂(LiCl)、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程的影响.方法利用绿色荧光蛋白(GFP)与磷脂酶Cδ1 (PLCδ1)PH区(PLCδ1PH)的融合体(PLCδ1PH-GFP)作为标记PtdIns(4,5)P2的特异性荧光探针,使用激光扫描共聚焦显微镜技术动态观察及测量PtdIns(4,5)P2位置的变化.结果在CHO细胞,用ATP刺激内源性表达的P2Y受体,可引起PLCδ1PH-GFP荧光转位可恢复性的变化;渥曼青霉素和LiCl不影响PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化,但可阻断此转位的恢复;U73122可以阻断PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化; 新霉素对PLCδ1PH-GFP的转位无影响,但可抑制未表达PLCδ1PH-GFP的细胞中PLC激活后水解PtdIns(4,5)P2的作用.结论 PLCδ1PH-GFP可作为一种有价值的荧光探针来标记PtdIns(4,5)P2的动态变化;渥曼青霉素、LiCl、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程有不同的影响;PLCδ1PH-GFP可阻断新霉素发挥其抑制PLC水解PtdIns(4,5)P2的作用.