靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

猫胃螺杆菌对二级Balb/C小鼠的实验性感染*

目的探讨猫胃螺杆菌(Hf)对二级Balb/C小鼠进行实验性感染.方法二级Balb/C小鼠16只,6～8周龄,先灌服三联药物混合液(灭滴灵2.6mg/d,四环素2.6mg/d,丽珠得乐1.2mg/d),实验组继以Hf菌液0.25m1/次(1×105～6CFU/ml)灌服,隔日1次,共4次.对照组以布氏肉汤0.2ml灌服,隔日1次,共4次.结果细菌学检查,实验组均感染了Hf,对照组无感染;病理组织学检查显示实验组5只小鼠出现慢性胃炎病理改变,而对照组则无.结论运用二级Balb/C小鼠进行试验,全部感染了Hf,获得成功.     

电动角膜异物钻治疗角膜残锈效果观察

角膜异物多数为铁屑。己生锈的角膜异物用角膜异物针(或注射针头)有时很难挑净,为此,笔者于1984年试制了“电动角膜异物钻”,至今治疗已生锈的角膜异物328例,报告如下。材料和方法1684年4月起,我院门诊接诊已生锈的铁屑性浅层角膜异物328例,详见附表。治疗方法:     

电动角膜异物钻治疗角膜残锈效果观察

笔者于1984年试制成功“电动角膜异物钻”,至今用此钻已治疗了生锈的铁渣性浅层角膜界物328例,取得较好效果,特报告如下。 临床资料 1984年4月以来,我院眼科门诊共收治已生锈的铁渣性浅层角膜异物328例,其中年龄最小8岁,最大65岁,进异物到就诊时     

高原部队人群幽门螺杆菌感染的流行病学调查

目的 了解Hp在高原部队人群中感染状态及与上消化道疾病的关系。方法 对驻青藏高原（海拔2800-5231公尺）某邵官兵517人进行普查，年龄18-40岁。采用胃镜普查和^14C-尿素呼吸试验方法，接受胃镜普查的受检均在肾窦部取活检2块，分别行Hp快速尿素酶试验和病理检查。结果 高海拔地区部队人群Hp感染率较低海拔地区为高，入伍仅1月的新兵，Hp感染率为38.18%，而另两组人群长期生活在高原不同海拔高度至少1年以上，Hp感染率达52.42%和62.32%。新兵组与其它两组相比具有显性差异（p<0.05和p<0.01）。结论 不同海拔高度Hp感染率不同，高海拔地区部队人群Hp感染率较低海拔地区为高，高原自然环境特点和缺氧可能是导致Hp在胃粘膜的定植并引起Hp感染率增加的重要素因之一。     

五种HP根除方案对高原部队HP感染的病人治疗效果的比较

了9筛选适合于高原部队防治由于HP感染所致的上消化道疾痛的HP根除治疗方案，设计了5种不同的治疗方案，并对胃镜检查证实的140名HP阳性的患进行随机分组治疗，治疗结束后4周采用“C-尿素呼吸试验复查，溃痔患胃镜复查并行HP快速尿素醇试验和病理检查．结果表明：以蒋诺为主的2号和3号四联方案HP根除率分别为92．23%和91．67%，但不良反应较多；4号方案(雷尼替丁150mg2／天，甲硝唑200mg4／天，呋哺唑酮100mg4／天)HP根除率为83．33%，但与2号和3号四联方案比较并无显差异(P>0．05)，且不良反应少，般从性好，药品成本低。因此，根据我们的结果，4号方案是一种较为理想的并适合于高原基层部队的HP根除治疗方案，值得在临床推广应用。     

关于肠黏膜屏障功能衰竭临床分期标准的初步探讨

目的 初步建立肠粘膜屏障功能衰竭(Intestinal barrier failure,IBF)的临床分期标准。方法　选取消化系统恶性肿瘤、肝硬化、炎性肠病等患者共50例作为病例组，选取25例健康志愿者作为对照组，均口服双糖探针后检测样本尿液中乳果糖/甘露醇（lactulose/mannitol，L/M）含量以评价肠道通透性，同时采集其新鲜粪便行菌群分析，记录其临床指标及实验室指标，分析病例组与对照组的临床表现、肠道通透性、肠菌群及免疫指标间的关系。结果　同对照组(0.02938±0.00725)相比，病例组尿L/M比值(0.06694±0.02343)显著增高，差异有统计学意义（t＝9.874，P<0.01）。不同程度菌群失调患者肠道通透性无显著差异（F＝2.285，P＝0.113）。随着患者腹胀及腹泻程度的增高，肠道通透性增高及中重度菌群失调的比率也增加。病例组C反应蛋白（47.8±33.5mg/L VS 3.2±2.6mg/L）、血浆内毒素（5.806±4.219EU/ml VS 0.018±0.056EU/ml）及血清IL-6(22.19±8.45pg/ml VS 6.24±0.13pg/ml)水平较之对照组均有显著升高（P均<0.01）。结论 　根据患者的临床症状、肠粘膜通透性、肠菌群状态及免疫指标间的关系，可初步建立IBF的临床分期标准。     

采用蛋白指纹图谱技术筛选大肠癌肝转移特异性相关蛋白

目的:应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术从大肠癌及大肠癌肝转移患者中筛选出大肠癌肝转移患者血清特异性相关蛋白。方法:实验于2005-07/2006-09分别在南方医院消化中心实验室与解放军第一五○医院实验室完成。应用美国CipherGen公司IMAC3(ImmobilizedMetalAffinityCapture,金属亲和表面)芯片和蛋白芯片仪检测44例大肠癌患者及36例大肠癌肝转移患者血清中的蛋白质相对含量。设定所有血清样本检测的蛋白质相对分子质量区间在1500～20000。利用PBSⅡ型蛋白质芯片阅读仪对IMAC3芯片进行检测,所得到的蛋白质以波谱的形式表示。采用BiomarkerWizard软件对2组血清在相同质荷比的蛋白质含量数据进行方差分析,将分析所得到的含量有显著性差异(P<0.05)的蛋白质建立数据库,导入BiomarkerPattern智能统计分析软件,选择相应条件,对其进行分组统计,从而得到能够正确分组的特异性蛋白标志物并构建大肠癌肝转移的诊断模型。采用酶联免疫法检测相同血清标本中的CEA水平,与构建的诊断模型在大肠癌肝转移诊断中作比较。结果:①44例大肠癌患者与36例大肠癌肝转移患者的血清蛋白质在质荷比为2685.64～11813间有16个蛋白质含量有显著差异。②大肠癌组在质荷比为5909处的蛋白质的相对含量高于大肠癌肝转移组[(30.1±9.6)%,(14.5±10.4)%,P≤0.01]。③其中44例大肠癌患者中有38例患者被正确分组,36例大肠癌肝转移患者被正确识别,准确率为92.5%(74/80),灵敏度和特异性分别为100%(36/36),86.4%(38/44)。结论:表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术快速、准确、灵敏度、特异性高,通过蛋白芯片仪发现的特异性相关蛋白,有望成为大肠癌肝转移诊断中有应用价值的临床检测指标。     

小量多次“三联”方案治疗幽门螺杆菌感染

对83例幽门螺杆菌(HP)阳性的青年志愿者采用小量多次的改良“三联”方案进行了治疗．其中十二指肠溃疡(DU)9例，糜烂性胃炎10例，其余为慢性红斑渗出性胃炎，所有患者均有消化不良症状。治疗方案；三钾二枸撩酸泌107．7mg．四环素250mg和甲硝唑200mg．每日5次，10天一疗程．^14C-屎素呼吸试验(UBT)评价HP根除效果．DU者重复胃镜检查。随访62例．均进行UBT试验。结果，UBT阴性51例，DU者溃疡均已愈合且HP阴性．HP根除率为86．4%。此外，89%的病人症状改善或消失．结果显示这种小剂量多次数的“三联”方案疗效确切，副作用步而轻微，类似方案值得临床上推广应用。