耐辐射球菌基因组DNA酶切条件的优化

目的研究耐辐射奇球菌Deinococcus radiodurans R1基因组DNA酶切的优化条件,从而获得构建基因文库所需的DNA片段,旨在构建DR菌基因组DNA表达文库,进一步筛选文库中与其有相互作用的蛋白。方法培养耐辐射奇球菌,提取基因组DNA,用Sau3AI酶切DR菌基因组DNA,分别从酶浓度、酶切时间等选择酶切产生的DNA片段集中在0.5-5.0 kb的最佳条件,最后通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果Sau3AI酶切DR菌基因组DNA的最佳酶浓度为0.125 u/10μL,最佳作用时间为3 h,此条件下DR菌基因组DNA片段主要集中于0.5-5.0 kb。结论优化了DR菌基因组DNA的酶切条件,为进一步构建DR菌基因组DNA表达文库,筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。     

利用酵母双杂交系统筛选与FXR1P相互作用的蛋白

目的筛选FXR1P相互作用蛋白,探讨FXR1P生物学功能。方法应用酵母双杂交技术,构建诱饵表达载体pGBKT7/FXR1,转化酵母菌AH109,与转化了人胎脑cDNA文库的酵母菌Y187交配筛选阳性克隆并测序。结果重组表达载体pGBKT7/FXR1构建成功;从人胎脑cDNA文库中筛选出5个与FXR1P结合的蛋白基因,分别与5种已知的编码蛋白基因序列同源：胞苷一磷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶（CMAS）、铁蛋白重链多肽1（FTH1）、高尔基体自身抗原golgina亚类4（GOLGA4）、17-β羟类固醇脱氢酶1（HSD17B1）、绒毛膜生长催乳激素1（CSH1）。结论为进一步研究FXR1P的功能及脆性X综合征发病机制提供新的线索。     

抗肿瘤和乙肝双交IL18—HBV S基因疫苗的构建

目的：探讨IL－18及乙肝病毒S基因（HBVS）的联合功效。方法：从胎肝组织中抽提总RNA，RT－PCR扩增IL－18cDNA基因。从载体pcDNA3．0／S中限制性酶切获取HBV S基因，然后，将其与IL－18cDNA一半亚克隆到真核表达质粒pIRES-EGFP中。结果：构建了具有抗肿瘤及乙肝双重功效的IL－18－HBV S乙肝基因疫苗。结论：含有IL－18基因的HBV基因疫苗的构建为基因疫苗的功能和应用研究提供了基础。     

甲氧滴滴涕对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响

目的探讨甲氧滴滴涕(MXC)对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响。方法实验动物分为对照组,溶剂组,5 d、10 d和15 d MXC实验组。用流式细胞仪检测染毒雄性大鼠生精细胞周期变化。结果随着MXC染毒时间延长与对照组比较,实验组G0/G1期与S期细胞数减少,G2/M期细胞数增多(P<0.05),单倍体细胞减少,二倍体与四倍体细胞增多(P<0.05);除5 d实验组二倍体与四倍体细胞荧光强度强外,其余各实验组的单倍体、二倍体和四倍体细胞荧光强度均减弱(P<0.05);溶剂组与对照组间的变化无显著性差异(P>0.05)。结论MXC可引起大鼠睾丸生精细胞S期抑制及G2期阻滞。     

壮族人群脆性X综合征中不稳定遗传序列的研究

目的研究湖南省壮族人群FraX中不稳定DNA序列的多态性，建立一种快速筛查FraX中FMR-1动态突变的方法，为提高遗传咨询和诊断水平奠定基础。方法采用经典的PCR-Southem blot法对156例X染色体FRAXA位点(CGG)n重复序列拷贝数进行测定并与PCR-序列分析胶银染法进行比较。结果(CGG)n重复序列范围为6～57，高峰为29；发现一男性携带者，CGG重复数为57；PCR-序列分析银染法结果与PCR—Southerm blot法结果完全一致，从PCR扩增到产物检测只需4，5h即可完成。结论壮族人群(CGG)n频率分布高峰为29，其次为27，30；PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用，适合脆性X综合征的大规模群体筛查。     

脆性X综合征的研究进展

简述了脆性X综合征的发病机理、临床特征、遗传特征及其诊断方法，着重介绍了脆性X综合征发病机制的分子研究及其产物FMRP生物学功能研究的进展。     

创新预防医学实践能力及综合素质培养体系研究与实践

通过改革传统培养体系,树立“夯实基础理论、强化能力培养、培育创新精神、全面提高素质”的实验课程教学理念,构建“宽覆盖、一体化、多模块、网络化、分层次”实验教学体系,研究“三三”教育模式和特色实验教学平台,建立健全分层次实验课程考核评价体系。该研究对培养高素质公共卫生人才具有积极指导作用。     

酵母双杂交系统及其应用研究进展

酵母双杂交系统(yeast two hybrid system)是Stanley Fields等提出并建立的一种直接于细胞内检测蛋白一蛋白之间相互作用的遗传学方法，其最突出的特点是能够在酵母这种繁殖迅速、遗传背景清楚且操作简便的体系中研究真核细胞的蛋白质之间的相互作用，并通过cDNA文库的筛选可以直接找到与未知蛋白质相互作用的DNA序列。酵母双杂交系统作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，广泛地应用于真核基因的表达与调控、细胞粘合因子间的相互作用、信号传导通路以及细胞周期与分化、反式因子的鉴定与分离等诸多领域的基础研究。随着这个方法的广泛应用，在原有酵母双杂交体系上发展了大量的衍生系统：单杂交系统、逆向双杂交系统、三杂交系统。本文就酵母双杂交系统的原理和组成及应用等方面作一综述。     

甲氧滴滴涕对雄性大鼠生殖细胞毒性的影响

目的探讨甲氧滴滴涕(Methoxychlor,MXC)对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响。方法用流式细胞仪检测染毒雄性大鼠生精细胞周期变化。结果随着MXC染毒时间延长,实验组G0/G1期细胞数(5、10和15 d组分别为58.4%、45.8%和43.9%)与S期细胞数(5、10和15 d组分别为21.9%、20.8%和12.7%)减少,G2/M期细胞数(5、10和15 d组分别为19.7%3、3.4%和43.4%)增多(P<0.05);实验组单倍体细胞减少,二倍体与四倍体细胞增多(P<0.05);除5 d实验组的二倍体与四倍体细胞平均荧光强度增强外,其余实验组单倍体、二倍体和四倍体细胞平均荧光强度减弱(P<0.05),溶剂组变化差异无显著性(P>0.05)。结论MXC可以引起大鼠睾丸生精细胞S时相抑制,并出现G2期细胞阻滞。