cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

爬行动物的体液免疫

爬行动物针对颗粒性和可溶性抗原,能够快速、有效的产生抗体。爬行动物血清中的抗体主要包括高分子量的免疫球蛋白(HMWIg)和不止一种的低分子量免疫球蛋白(LMWIg),爬行动物中还有在亲代和子代间传递的免疫球蛋白Ig Y。目前爬行动物免疫球蛋白的纯化方法主要有:硫酸铵沉淀法、联合凝胶过滤层析和离子交换层析法、Protein A亲和层析法。研究爬行动物体液免疫对研究动物免疫的进化及对病原控制具有重要意义。     

乙型肝炎病毒HBeAg上调S100钙结合蛋白A11基因启动子表达活性的研究

目的 探讨乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对S100钙结合蛋白A11(calgizzarin S100A11)启动子转录的激活作用。方法 以我室构建的HBeAg反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交(SSH)筛选结果为基础，利用生物信息学技术确定S100A11的启动子区域(S100A11-P)，聚合酶链反应(PCR)扩增S100A11-P，克隆至真核报告载体PCAT3中，构建pCAT3-S100-p报告载体，以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性，并与pcDNA3．1(-)-HBeAg共转染HepG2细胞系，用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3-S100-P在HepG2细胞中能够指导CAT的表达；共转染实验中pCAT3-S100-P-pcDNA3.1(-)-HBeAg组CAT的表达活性是pCAT3-S100-P组的6．1倍。结论 我室克隆的S100A11启动子有顺式激活下游基因的活性，HBeAg具有对S100A11的反式激活作用。本实验进一步验证了我室利用SSH技术研究HBeAg反式激活作用的结果。     

动物中DNA甲基转移酶2研究进展

哺乳动物中DNA甲基转移酶家族包括DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1),DNA甲基转移酶2(DNA methyltransferase 2,Dnmt2,也叫做天冬氨酸tRNA甲基转移酶1(tRNA aspartic acid methyltransferase 1,TRDMT1))和DNA甲基转移酶3(DNA methyltransferase 3,Dnmt3)。Dnmt2在进化史上比Dnmt1和Dnmt3更古老,存在于更多物种中,包括植物、真菌、寄生虫、昆虫、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物,但其生化学机制和生物学功能仍不十分清楚,已有研究报道也存在许多矛盾之处。本文仅就Dnmt2在动物中的研究,包括其结构特点,对RNA甲基化的作用及相关生物学表型的研究进展作一总结。     

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白3基因的克隆化研究

目的应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术(bioinformatics)筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(Pre-S1)反式激活新型靶基因，进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法以HBV前-S1蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-PreS1转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术，结合生物信息学技术，克隆HBV前-S1反式激活作用的新的靶基因。结果对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA，以逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，并测序证实，因其可以被前-S1蛋白反式激活，故命名为前-S1反式激活蛋白3(PSITP3)，已在GenBank中注册，注册号：AY446274。PSITP3基因的编码序列全长为1173个核苷酸(nt)，编码产物由390个氨基酸残基(aa)组成。结论HBV前-S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要的作用，最近的研究表明前-S1蛋白还具有反式激活的作用，上调宿主细胞某些基因的表达，从而改变宿主正常的免疫应答水平，引起病变。HBV前-S1反式激活新靶基因的发现，为进一步研究HBV前-S1蛋白的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

复方甘草甜素下调细胞周期素依赖性激酶1启动子表达

目的:了解复方甘草甜素调节细胞周期素依赖性激酶 1(CDK1)基因启动子的活性,为甘草甜素的作用机制提供理论依据． pCAT3-basic空载体的12．4倍,是甘草甜素刺激转染pCAT3- CDK1-P的HepG2细胞的9．3倍．结论:复方甘草甜素可以下调CDK1基因启动子的活性,进而下调CDK1基因的表达,为深入了解甘草甜素在肝纤维化和肝癌中的作用机制提供新的分子生物学依据．     

改善微循环在重症胰腺炎治疗中的应用

目的　探讨丹参、低分子右旋糖酐在重症胰腺炎治疗中的作用。方法　采用ELISA法和单克隆酶联免疫吸附法检测 72例重症胰腺炎患者和 4 9例健康体检者的血浆内血小板α颗粒膜蛋白 (GMP 14 0 )、血栓烷B2(TXB2 )、6 酮 前列腺素F1α( 6 keto PGF1α)和血管性假血友病因子相关抗原 (vWF∶Ag)含量。用比浊法测定了凝血酶原时间 (PT)。 72例重症胰腺炎患者随机分为两组 :一般治疗组和改善微循环组 ,疗程 2周。结果　重症胰腺炎患者血浆GMP 14 0、TXB2 和vWF∶Ag含量明显高于对照组 ( P <0 0 1) ,6 keto PGF1α和PT明显低于对照组 (P <0 0 5 )。丹参和低分子右旋糖酐治疗 2周后血浆GMP 14 0、TXB2 和vWF∶Ag水平与治疗前相比明显下降。PT恢复到正常。结论　重症胰腺炎患者存在有高凝状态 ,丹参和低分子右旋糖酐能明显纠正重症胰腺炎患者的高凝状态     

血清IgG4对IgG4相关性疾病诊断价值的Meta分析

目的 系统评价血清IgG4对IgG4相关性疾病(IgG4-RD)的诊断价值。方法 计算机检索PubMed、EMBASE、万方数据库、维普数据库和中国知网数据库,收集自2011年1月1日至2020年1月1日所有以探讨血清IgG4对IgG4相关性疾病诊断价值为目的的英文文献,制定严格的纳入及排除标准进行文献筛选及数据提取,采用质量评价工具(QUADAS-2)进行文献质量评估,采用Meta-Disc 1.4软件及STATA15.0软件中“midas”命令进行异质性分析及综合定量合成,计算合并的敏感度、特异度、诊断优势比、阳性似然比及阴性似然比,绘制相关森林图并拟合受试者工作特征曲线(SROC)。将纳入文献按地区、疾病类型以及样本量大小进行亚组分析。结果 共有17篇文献, 17095名研究对象纳入本次Meta分析,IgG4的临界值为1.3~1.44 g/L,各研究合并的灵敏度0.88(95%CI:0.81-0.93),特异度为0.89(95%CI:0.83-0.93),阳性似然比为8.3( 95%CI:5.1-13.7),阴性似然比为0.13(95%CI:0.08-0.22),诊断优势比为62(95%CI:25-153)。11篇文献报道了血清IgG4>2×ULN(2.7-2.8 g/L)时的诊断价值,各研究合并的灵敏度0.59(95%CI:0.47-0.7),特异度为0.96(95%CI:0.94-0.97),阳性似然比为14.3( 95%CI:9.1-22.7),阴性似然比为0.42(95%CI:0.32-0.57),诊断优势比为34(95%CI:17-69)。亚组分析显示地域、是否仅纳入自身免疫性胰腺炎(AIP)患者以及IgG4-RD患者样本量大小均可能为异质性来源。Deeks漏斗图显示不存在发表偏倚,敏感性分析结果稳定可靠。结论 血清IgG4在IgG4-RD的诊断中具有较高的参考价值,提高临界值至2×ULN并没有明显的诊断优势,这一结果仍需更多前瞻性高质量诊断试验进行验证。     

Trim44敲除导致老年大鼠神经元凋亡和学习记忆能力下降

目的 本文利用Trim44条件敲除大鼠,分析Trim44基因敲除后大鼠行为学异常和脑组织的病理改变,探究Trim44基因在神经系统中的作用机制。方法 采用蛋白印迹法,免疫组化法检测TRIM44在脑组织的表达,利用TUNEL染色观察Trim44敲除大鼠神经元的凋亡,Y迷宫、水迷宫和食物迷宫等行为学测试观察敲除大鼠的行为学改变,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白的表达异常。结果 TRIM44在脑皮质中表达,敲除大鼠大脑组织中Trim44敲除效率可达67%;Trim44敲除导致老年大鼠学习记忆能力下降,神经元凋亡,活性形式的caspase 3、caspase 9蛋白表达增加。结论 Trim44敲除促进神经元凋亡,损害大鼠学习记忆能力。提示了Trim44在神经系统的重要作用,敲除模型也可以用于深入的机制探索。