NK细胞抑制CD34^＋早期急性髓系白血病细胞克隆形成

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆抑制效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞杀伤后的克隆形成,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3-CD16 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的克隆抑制率低于K562,差异有显著性(P＜0.05).结论同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆形成具有一定的抑制作用.     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR Vβ T细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照，建立TCR Vβ谱基因扫描技术，并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法，以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖，应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性，同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布，各亚家族表达频率接近，但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞，并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖，此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用，对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

低分子肝素与前列腺素E1脂微球联合应用预防异基因外周血干细胞移植后肝静脉闭塞病

目的 观察低分子肝素和前列腺素E1脂微球联合应用对异基因外周血干细胞移植后肝静脉闭塞病的预防作用。方法 对2l例异基因外周血干细胞移植病人在移植第-7天至第 30天联合应用低分子肝素和前列素E1脂微球，观察临床效果。结果 2l例病人中只有2例在第 18、 2l天发生肝静脉闭塞病。低分子肝素和前列腺素E1脂微球联合应用未观察到明显的毒副作用。结论 低分子肝素和前列腺素E1脂微球联合应用对预防异基因外周血干细胞移植后肝静脉闭塞病是安全和有效的。     

重组人肿瘤坏死因子对白血病细胞的作用

本文观察了重组人肿瘤坏死因子α(rTNF-α)对白血病细胞株U937,Raji和新鲜急非淋白血病祖细胞(CFU—L)生长的作用。证实TNF—α能够显著抑制自血病细胞的增殖,但不同的白血病细胞对TNF—α敏感性有一定的差异。细胞毒效应可能是其主要的作用机制。     

HLA5/6位点不全相合外周血干细胞移植治疗慢性髓系白血病加速期一例

患者 ,男 ,30岁。因左上腹剧烈疼痛 3ｄ于 1998年 5月15日第 1次入我院 ,诊断慢性髓系白血病 (ＣＭＬ) ,经常规化疗病情稳定在慢性期。 1999年 12月出现腹部及腰背部剧烈疼痛 ,伴发热 ,体重下降 ,血小板异常增多 [(10 83～ 15 73)×10 9/Ｌ],Ｘ线胸片提示白血病细胞肺部浸润 ,在山东医科大学确诊为ＣＭＬ加速期 (ＣＭＬ ＡＰ)。以ＣＯＰ(环磷酰胺、长春新碱、泼尼松 )联合化疗 1个疗程 ,腰背部疼痛减轻 ,但骨髓未完全缓解。经患者及家属同意行ＨＬＡ5 / 6位点不全相合异基因外周血干细胞移植术。供者为其胞兄 ,39岁 ,外周血及骨髓检查正常 ,…     

自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病

为观察自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病的疗效和不良反应 ,对完全缓解或部分缓解的恶性血液病患者用中剂量阿糖胞苷 (1.g/m2 × 5天 )或环磷酰胺 (6 0mg/kg× 2天 )联合G CSF方案动员干细胞 ,并经程序降温仪冷冻 ,- 196℃保存。用Bu/Cy或TBI/Cy方案对患者预处理后 ,回输未净化的自体干细胞。当患者白细胞恢复至 1.0× 10 9/L时 ,输注经 7.5Gy照射的单倍体淋巴细胞 (平均 5 .0× 10 7/kg) ,观察患者造血恢复、疾病转归和长期生存率。结果表明 ,12例接受该方案治疗的患者中 ,5例急性非淋巴细胞白血病患者呈持续缓解状态 ,其中 2例无病生存超过 5 0个月 ;3例IV期恶性淋巴瘤患者中 1例长期缓解 ,2例分别于治疗后 4和 6个月复发而死亡 ;1例淋巴瘤 白血病患者持续缓解 18个月 ,2例慢性粒细胞白血病患者也呈持续缓解状态 ,1例多发性骨髓瘤患者持续缓解 36个月后复发 ,但经反应停治疗目前仍处完全缓解状态。平均随访 2 5个月 ,10例无病生存 ,2年无病生存率 83%。单倍体淋巴细胞输注后在部分患者中除血小板恢复延迟外 ,未见严重不良反应。STR PCR示单倍体淋巴细胞输注后 72小时供者淋巴细胞在受者体内消失。结论 :自体干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注可减少急性白血病的复发 ,提高自     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

以SEAM预处理方案行自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤

背景:造血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤前,预处理方案对移植效果至关重要.目前经典BEAM方案中的药物卡莫司汀在国内不易购得,且该方案毒副作用较大,复发率较高.目的:以司莫司汀取代卡莫司汀组成SEAM预处理方案,观察自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤的效果.设计、时间及地点:病例分析,于2003-06/2006-02和解放军成都军区昆明总医院血液科进行.对象:选取同期收治的15例Ⅲ～Ⅳ期非何杰金淋巴瘤患者,男13例,女2例,平均年龄43.8岁,均经过2～8个疗程的制化疗,CR1 4例,CR2 1例,部分缓解10例;病理证实T细胞淋巴痛3例,弥漫大B细胞淋巴瘤12例;移植前复查肝肾功能及肺功能均正常.组成SEAM预处理方案的4种药物:司莫司汀(Semustine)为浙江瑞新公司产品,批号20071 125;足叶乙甙(Etopside)为江苏恒瑞公司产品,批号07101231:阿糖胞苷(Ara-C)为浙江海正公司产品,批号080103A;马法兰(Mephalan)为葛兰素史克产品,批号7001.方法:皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子动员后12 d采集患者外周血干细胞,与羟乙基淀粉、人血白蛋白及二甲基亚砜配成冻存液移植备用.动员后1个月行自体外周血干细胞移植,移植前患者行SEAM预处理方案:移植前8 d门服司莫司汀320 mg/m2.移植前7 d-移植前4 d,静滴足叶乙甙200 mg/m3,1次/d;静滴阿糖胞苷200 mg/m2,1次/12 h.移植前3 d～移植前2 d,静滴马法兰70 mg/m2,1次/d.移植当天将预先冻存的自体外周血干细胞水浴解冻,经锁骨下静脉插管快速回输给患者,一般输注细胞量为(3.0～5.0)×108/kg.主要观察指标:①预处理的毒副作用.②移植后造血功能恢复.③疾病转归. 结果:SEAM颅处理过程中15例患者均出现不同程度消化道反应,1例出现心动过速,3例出现肝功能损害.所有患者在自体外周血干细胞移植后造血功能均快速重建.中件粒细胞计数≥0.5×109L-1的中位时间为11 d,血小板计数≥20×109 L-1的中位时间为13 d.中位随访时间39个月,13例患者无病存活,2例分别于移植后4,13个月死于疾病复发.结论:非何杰金淋巴瘤患者对SEAM预处理方案耐受性好,该方案毒副作用轻微,造血重建恢复较快,目前随访治疗效果较好.     

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。     

Bcl-2家族在冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨部分Bcl-2家族成员基因表达变化在冬凌草甲素（Ori）诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT法和流式细胞术检测0ri作用后ARH-77细胞的活力和凋亡情况,相差显微镜观察细胞形态改变,RT-PCR法检测Bcl-2家族成员的基因表达变化。结果Ori能明显抑制ARH-77细胞的生长,且呈时间一剂量依赖性。10μmol／LOri作用于ARH-77细胞24h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡率随Ori作用时间的延长而逐渐增加（P〈0．05）。Ori诱导ARH-77细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl、BaxmRNA水平改变有关（P〈0．05）。结论Ori能通过调节ARH-77细胞Bcl-2家族成员的表达而诱导其发生凋亡。