双位点核酶细胞内抑制乙型肝炎病毒基因的表达

目的：构建针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ区基因（２０２９－３１及２０６３－６５位点）的双位点核酶的真核表达载体,观察其在细胞内对ＨＢＶ基因表达抑制作用。方法：利用亚克隆从质粒ｐＧＥＭＲｚ１２３切下ＥｃｏＲ－ＢａｍＨＩ片段,双粘端克隆于真核质粒ｐＢＢＳ２１２中,将该质粒与ｐ１．２Ⅱ（含ＨＢＶ全序列）共转染ＨＨＣＣ细胞（人肝癌细胞株）。观察该核酶对ＨＢＶ基因表达的抑制作用。结果：在ＨＨＣＣ细胞中Ｐ１．２     

有备无患:谈如何备课

从教学活动全过程来看,备课是三个连续的过程,即课前、课堂和课后的备课。三者的基本任务是：＂课前作准备＂即对教学内容、教学对象和教学方法进行充分准备;＂课堂抓落实＂即对课堂所用时间、语言、情感和教态以及管理进行设计和准备;＂课后行反思＂即对课前备课和课堂教学进行课后的认真思索和分析,总结经验,找出不足。拟从备课的这三个环节入手,浅谈备课的方法及其重要性,为进一步提高教学质量奠定基础。     

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用

目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以与Syk相互作用。结论HTNVGI蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。     

乙肝后肝硬化食管静脉曲张上消化道出血的临床观察

目的：探讨乙肝后肝硬化食管静脉曲张患者出血与临床表现的关系。方法：46例分为出血组和未出血组，分别从病程、年龄、凝血酶原时间（PT），三系细胞计数（RBC、WBC、BPC）、门静脉直径、脾脏厚度及斜径、胃镜下的形态变化进行观察。结果：出血组PT长、BPC减少，胃镜下红色征和糜烂病灶与未出血者有显著性差异。结论：PT、BPC、门静脉、脾脏厚度及斜径增大、减少、胃镜下红色征和糜烂病灶与上消化出血密切相关。     

TIMP-1 ELISA检测方法条件的优化研究

目的进一步研究酶联免疫吸附方法（ELISA）检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的最优化试验条件。同时最大程度降低成本，使血清TIMP-1ELISA国产试剂盒价格、质量更优。方法用抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb），辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1，通过选用国产酶联板及对酶联板进行紫外线辐照处理，改变固相化条件；通过对抗体包被时间、样本温育时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。同时复检临床408例肝病患者血清，并与优化前检测结果做以比较。结果改变固相化条件，并延长包被时间至48h，抗原抗体反应时间为37℃ 2h，可获得更佳的血清TIMP-1定量结果。结论优化后的TIMP-1测定方法在敏感性、重复性及标准曲线线性关系更好，可提高临床肝纤维化血清阳性检出率。     

汉坦病毒感染致血小板减少的机制

汉坦病毒主要感染血管内皮细胞,引起两种人类疾病,即肾综合征出血热和汉坦病毒心肺综合征,它们的共同特点是毛细血管广泛损伤,通透性升高。汉坦病毒感染者血小板数量严重减少,不仅与“外周破坏增加”有关,而且还可能与“血小板生成和功能障碍”有关。尽管汉坦病毒感染引起血小板减少的机制尚不完全明确,但近年也取得了一些重要进展。本文主要围绕血小板减少相关的两种机制展开讨论,旨在阐明汉坦病毒感染发病机制,为治疗肾综合征出血热的药物设计提供指导。     

肾综合征出血热并自发性肾破裂11例临床回顾性分析

目的：分析肾综合征出血热（HFRS）患者自发性肾破裂的临床特点,探讨降低其发生率的预防策略及其有效治疗措施．方法：对我院感染科2006—2008年间收治的11例HFRS并自发性肾破裂病例进行回顾性分析．结果：11例HFRS自发性肾破裂患者有明显诱因10例,多发生在少尿期,单纯左肾破裂2例,右肾破裂8例,双肾破裂1例,血小板〈80×10^9／L者7例,内科保守治疗治愈9例,死亡2例,其中血透后死亡1例,患者家属放弃治疗后死亡1例．结论：HFRS自发性肾破裂多发生在少尿期,患者血小板计数较低,在床上翻动过多、腹内压增大,如咳嗽、解大小便为发生肾破裂的主要诱发因素．因此,HFRS少尿期患者应予严密监护,避免上述危险因素;对血小板极低者可用无肝素化透析;对大多数患者内科保守治疗仍为首选且有效的治疗措施．     

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响

目的:探讨丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响. 方法:应用ELISA方法检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果,随后应用RT-PCR法分析感染对细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达的影响. 结果:感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(MMP-2:t=4.186,P＜0.05; MMP-9:t=2.325,P＜0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达弱于对照组,但差异不明显(proMMP-2:t=1.196,P＞0.05;proMMP-9:t=1.417,P＞0.05). 结论:丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌能力下降,为非特异性.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

趋化因子RANTES和SDF-1细胞内共表达抑制HIV-1感染的研究

目的　观察HIV 1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV 1感染的作用。方法　应用磷酸钙沉淀法共转染HIV 1辅受体及其配体的质粒 ,制成辅受体表型剔除的靶细胞 ,与转染HIV 1膜蛋白质粒的细胞混合 ,观察合胞体形成并记数 ;脂质体介导法将含有报告基因CAT而缺失HIV包膜蛋白的质粒与HIV包膜蛋白质粒共转染 2 93细胞 ,包装成具有一次感染活性的假病毒 ,感染转化pCMV R K S K、pCMV R K、pCMV S K或pCMV的PM 1细胞 ,采用同位素薄层层析分析法检测CAT活性。结果　pCMV R K S K转染可以显著抑制M及T嗜性HIV膜蛋白诱导的合胞体形成 ;CAT检测发现与pCMV转染组相比 ,当两种嗜性重组病毒感染pCMV R K S K转染组PM 1细胞时 ,仅检测到背景水平的CAT活性。结论　HIV 1辅受体CCR5 CXCR4表型剔除可以明显抑制M和T嗜性HIV 1病毒进入靶细胞