基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

目的摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中,17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4h后的表达量最高,目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中,纯度达80%,经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%,用G25柱转换缓冲液,使缓冲液pH值＞8,同时去除缓冲液中的还原剂DTT,将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制,最终获得纯度＞98%和比活性>3×107U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。     

滑膜炎颗粒治疗湿热蕴结型痛风性关节炎的临床研究

目的观察应用滑膜炎颗粒治疗湿热蕴结型痛风性关节炎的临床疗效。方法石家庄市中医院骨科自2017年3月至2018年6月痛风性关节炎患者60例,随机分为治疗组和对照组。治疗组给予滑膜炎颗粒+基础治疗+布洛芬治疗,对照组选择给予基础治疗+布洛芬治疗,治疗7 d后,对两组患者VAS评分、中医证候评分、血尿酸、Lysholm功能评分、膝关节主动活动度(ROM)、肿胀程度、综合疗效进行比较。结果治疗组的临床疗效优于对照组,治疗后两组VAS评分、中医证候评分、血尿酸、肿胀程度较治疗前均降低,治疗组较对照组降低更明显,治疗后两组Lysholm功能评分、ROM较治疗前均升高,治疗组较对照组升高更明显,差异均具有统计学意义(P 0.05)。结论滑膜炎颗粒治疗湿热蕴结型痛风性关节炎的患者,可使其膝关节疼痛、肿胀、活动度、中医证候等明显得到改善,促进尿酸排泄,取得了良好的临床疗效。     

地震伤并发气性坏疽患者2例手术过程中感染控制的做法

气性坏疽是由梭状芽孢杆菌侵入伤口引起的一种严重的特异性感染，以全身出现毒血症，局部出现产气、水肿、坏死、恶臭为其特征，是创伤后最严重的并发症之一。该病通过伤口接触传播，感染后若不及时救治，12h内可造成严重后果，甚至死亡。四川汶川大地震后，截至5月31日，我院手术救治地震伤员345例，其中2例并发气性坏疽。现将2例并发气性坏疽患者开放性骨折手术中的感染控制方法介绍如下。     

糖皮质激素治疗Vogt-小柳—原田综合征74例疗效分析

Vogt-小柳一原田综合征为双侧渗出性色素膜炎,常伴有中枢神经系统异常和皮肤毛发改变。已往根据发病部位对其分为前部型(Vogt-小柳氏病)和后部型(原田氏病)。但是近年有人认为前部型是由后部型发展而来,实际上是同一疾病的不同阶段,在临床上很难将其截然分开,从而动摇了此种分型的实用价值。一般认为本病与自身免疫有关。因此治疗上普遍采用糖皮质激素类药物,并取得较好疗效。但目前临床上对应用此类药物的剂量、方法尚存有明显分歧,本文结合74例住院病人的治疗情况,就这一问题进行初步探讨。对象和方法一、治疗对象     

食“春卷”添春趣

进入阳春三月以后,我国人民有吃春饼、春卷的习俗,并借此企盼好年景与家人的安康。在春饼、春卷之中,春卷以其食用方便、主副兼备、花色多样而最受人们喜爱,下面介绍几款春卷的制作方法。     

HSP受体与肿瘤免疫应答

热激蛋白(heat shock proteins,HSP,曾称热休克蛋白)是一类广泛存在于原核、真核生物细胞内的热应激蛋白质,和HSP受体结合发挥应激、抗感染、抗肿瘤作用。与肿瘤免疫相关的HSP受体主要包括TLR2/4、CD91、SR、CCR5等。TLR2/4一方面可与CD14形成受体复合物结合HSP,促进树突状细胞(DC)和免疫效应细胞聚集,激活抗肿瘤免疫应答;另一方面也可在肿瘤细胞表面高表达,促进肿瘤生长分化。CD91能够发挥肿瘤抗原提呈作用,作为信号性受体启动抗肿瘤免疫应答;但表达于肿瘤细胞上的CD91往往会促进肿瘤的迁移和侵袭。SR参与内源性抗原识别和交叉提呈,可以识别肿瘤细胞,进而激活大量CD8+T细胞发挥抗肿瘤作用。CCR5参与致癌机制,是多种肿瘤发生、发展和预后判断的新型生物学标志。随着研究的深入HSP受体有望成为未来肿瘤防治的新突破口。     

B7-H1基因修饰的调节性DC对小鼠甲状腺相关性眼病的治疗作用

目的：构建表达小鼠B7-H1基因的腺病毒载体,转染修饰树突状细胞,并研究该细胞对小鼠甲状腺相关性眼病( thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)的治疗效应。方法：设计并构建小鼠B7-H1的腺病毒表达载体,转染小鼠骨髓来源的树突状细胞,检测该树突状细胞的表型和功能,鉴定其对免疫应答的负向调控能力,采用实验动物模型观察B7-H1基因修饰的树突状细胞在体内治疗TAO的效果。
　　结果：成功构建出具有良好B7-H1表达效力的腺病毒载体,病毒滴度为1.8伊109 PFU/mL,转染腺病毒的小鼠骨髓来源的树突状细胞表现出调节性树突状细胞性能,能够负向抑制免疫应答;在动物模型中使用该型树突状细胞可以有效控制甲状腺眼病的发生发展。
　　结论：成功构建了表达小鼠B7-H1基因的腺病毒表达载体,转染了该载体的树突状细胞具有调节性树突状细胞的性能,抑制正向免疫应答,能够有效抑制甲状腺眼病的发生发展,揭示基因修饰的树突状细胞可能成为治疗甲状腺眼病的潜在生物制剂。     

MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的构建、表达及其双重生物学功能的初步研究

目的：利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP2γ/GMCSF融合蛋白。方法：通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP2γ/GMCSF融合基因真核表达载体，MIP2γ与GMCSF由（Gly4Ser）3相连；瞬时转染293T细胞后收集含融合蛋白的细胞培养上清；研究了该融合蛋白在体外的促造血细胞增殖活性和对免疫细胞的趋化活性。结果： MIP2γ/GMCSF融合基因载体构建正确；融合蛋白分子量约为24.9 kD；初步生物学功能研究表明，融合蛋白能有效促进TF1细胞增殖，比活性约为2.2×107IU/mg,并能显著刺激骨髓细胞的集落形成；融合蛋白能有效趋化未成熟树突状细胞和CD3+T细胞。结论： MIP2γ/GMCSF融合蛋白具有促进造血和趋化免疫细胞的双重活性，有望成为在造血调控和抗肿瘤免疫中具有良好开发应用前景的新型细胞因子。     

经皮椎体成形术治疗骨质疏松性椎体压缩骨折术后下腰痛的危险因素分析

目的 探讨经皮椎体成形术(percutaneous vertebroplasty,PVP)治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折(osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF)术后下腰痛的危险因素。方法 选取2016年9月~2021年9月笔者医院收治的268例OVCF患者。比较年龄、性别、体重指数、病程时间、焦虑抑郁状态、术前骨密度T值、骨折椎体数、腰椎合并病、术前筋膜损伤、术后Cobb角度、Kümmell病、骨水泥注入量、骨水泥渗漏、骨水泥分布、平均椎体压缩率、手术入路、术后功能锻炼、骨折部位、存在第三方责任等病历资料,通过Logistic回归分析PVP术后下腰痛的独立危险因素。结果 268例OVCF患者PVP术后下腰痛46例,发生率为17.16％。腰椎合并症、焦虑抑郁状态、骨折部位、术前筋膜损伤、存在第三方责任,导致PVP术后下腰痛发生率更高(P＜0.05)。经Logistic回归分析,骨折部位、焦虑抑郁状态、术前筋膜损伤是PVP术后下腰痛的独立危险因素(P＜0.05)。结论PVP治疗OVCF,部分患者术后仍有下腰痛,与骨折部位、焦虑抑郁状态、筋膜损伤等危险因素有关,围术期应针对以上危险因素积极采取有效的防治措施,减少术后下腰痛的发生。