小鼠脂联素重组腺相关病毒载体的构建

目的：构建脂联素重组腺相关病毒载体，为进一步研究脂联素的功能提供基础。方法：实验于2003年在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心进行。以带有小鼠脂联素基因的质粒peDNA3．0-Ad为模板，聚合酶链反应克隆脂联素基因，并将聚合酶链反应扩增产物定向克隆于pAAV-MCS载体，重组AAV-MCS-Ad质粒经双酶切和测序鉴定。随后采用磷酸钙转染法将pAAV-MCS-Ad、pAAV-RC，pAAV-Helper质粒共转染AAV-293细胞，包装得到重组腺相关病毒（rAAV-Ad）。回收病毒原液，采用PEG8000和氯仿纯化浓缩病毒。SDS-PAGE及透射电镜鉴定纯化的病毒，并采用Southern blot测定重组腺相关病毒的滴度。Western blotting检测rAAV-Ad转染H4IIE细胞后脂联素蛋白的表达。 结果：①重组质粒AAV-MCS-Ad经双酶切和测序鉴定证实将脂联素基因已正确插入。②SDS-PAGE和电镜均证实rAAV-Ad病毒已构建成功。③Southern blotting测定病毒滴度约为约2．5&;#215;10^14L^-1，通过rAAV-LacZ转染细胞后X-gal染色计数，病毒的感染滴度在（0．83～1．2）&;#215;10^10转导单位／mL。（少Western blotting证实rAAV-Ad转染H4IIE细胞后在30ku处见特异的阳性蛋白条带，证明能有效表达脂联素蛋白。 结论：成功构建了携带小鼠脂联素基因的rAAV-Ad载体，经纯化浓缩后具有较好的纯度和较高滴度，能有效转染H4IIE细胞，并表达脂联素蛋白，具有良好的功能，为进一步研究其茁真核细胞中的功能奠定了基础。     

关于糖尿病分类的一些补充

笔者曾就糖尿病的分类和诊断标准作过简略的介绍[新医学1986;17(1):43]。1985年2月11日至16日世界卫生组织(WHO)在日内瓦召开了糖尿病研究组工作会议,在1980年WHO糖尿病专家委员会第2个报告中提出的糖尿病分类和诊断标准草案的基础上,作了一些说明和修改,现综合简介如下。     

糖尿病昏迷小剂量胰岛素治疗的临床观察

本文报告20例酮症酸中毒性和2例高渗性非酮症性昏迷(简称非酮症性昏迷)用小剂量胰岛素治疗的结果,并作初步分析探讨。     

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

[目的] 探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性.[方法] 培养小鼠骨髓干细胞,采用含 GLP-1和 nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达.[结果]培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第 7天,有 ngn3和 pdx-1基因表达;在诱导分化第 14天,有 nkx2.2、 pdx-1和 ins2基因表达.[结论] 小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究.     

糖尿病周围神经病变诊断与治疗新进展

糖尿病周围神经病变(DPN)的诊疗是十分重要但尚未解决的问题.由于DPN现代诊疗研究仍处于探索阶段,诊断方法和治疗药物都还不够成熟,因此还需要继续对这方面做深入研究与实践.笔者在总结前人成果的基础上,从诊断和治疗两部分对此做系统论述,简要介绍DPN的类型划分、临床表现、评估检查与诊断方法;并从日常行为、常用药物及其毒性、不良反应等多个角度探讨DPN的治疗.     

小鼠骨髓多能成体祖细胞的分离、培养及体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的：探讨培养骨髓多能成体祖细胞的条件和生物学特性及其向胰岛素分泌细胞分化的可能性。 方法： 采用文献报道的条件培养液培养小鼠骨髓多能成体祖细胞，观察其细胞形态、生长情况、细胞表面标志及mRNA水平，检测其oct-4基因表达，并以含胰高糖素多肽-1的无血清培养液诱导分化细胞，基因水平检测与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。 结果： 小鼠骨髓多能成体祖细胞类圆形，细胞核大，胞质少；细胞增殖能力尚可；细胞表面CD13+、CD44-、CD45-、MHCⅡ-；有oct-4基因表达；诱导分化后，可见与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。 结论： 成功培养小鼠骨髓多能成体祖细胞，具有与文献报道类似的生物学特征；有被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。     

成骨细胞对葡萄糖水平的感知作用

背景：新近研究表明,骨钙素可提高胰岛素分泌水平、胰岛素敏感性,并且可阻止脂肪的积累,参与糖脂代谢,发挥此作用的主要是羧化不全骨钙素。 目的：观察不同浓度葡萄糖对成骨细胞羧化不全骨钙素分泌水平的影响。 方法：切下人肋骨骨小梁剪碎,胰酶消化后以PBS彻底冲洗直至于倒置显微镜下观察骨片表面及清洗液中无粘着及漂浮的细胞,以DMEM完全培养液清洗骨小梁1次,移入培养瓶内培养,每周更换培养液1次,1周后可见成骨细胞自骨片移出,4~6周细胞融合成单层可作传代培养。取生长活跃的传二三代细胞接种于6孔板中分成5组,待细胞融合至80%以含5.6,7.6,9.6,12.6,20.6 mmol/L葡萄糖的培养基刺激成骨细胞,同时加入维生素K2使其在培养液中最终浓度为10-5 mol/L。培养半小时后收集上清液,以放免法检测成骨细胞培养上清液中羧化不全骨钙素水平,并以上清液中总骨钙素进行校正,计算羧化不全骨钙素率。 结果与结论：在不同葡萄糖浓度下成骨细胞羧化不全骨钙素分泌水平不同,7.6,9.6,20.6 mmol/L葡萄糖浓度组羧化不全骨钙素率高于5.6 mmol/L葡萄糖浓度组[(0.27±0.02),(0.29±0.04),(0.12±0.02)%,P < 0.05]。提示成骨细胞可感知葡萄糖浓度变化,在5.6~9.6 mmol/L葡萄糖刺激下成骨细胞可呈剂量依赖性地提高自身羧化不全骨钙素分泌水平,进一步提高葡萄糖浓度时羧化不全骨钙素水平反而降低。     

瘦素对胰岛β细胞胰岛素分泌及葡萄糖信号传递的影响

瘦素是近年发现的一种与肥胖症有关的激素。它通过与下丘脑特异受体结合 ,发挥维持机体正常体重的功能。同时瘦素对胰岛素分泌及胰岛素的外周作用亦存在影响 ,但结果不一 ,对其作用机制尚少有报道。我们研究瘦素对胰岛素分泌的急性与慢性影响 ,并通过观察细胞内游离钙、葡萄糖激酶 (ＧＫ)ｍＲＮＡ表达的变化 ,初步探讨瘦素影响胰岛素分泌的机制。一、研究方法1.胰岛 β细胞培养 :β ＴＣ3 细胞 (由美国爱因斯坦大学Ｅｆｒａｔ教授惠赠 )以含 15 %马血清、2 5 %胎牛血清 (ＰＢＳ)、10 0Ｕ/ｍｌ青霉素、0 1ｍｇ/ｍｌ链霉素的ＤＭＥＭ培养液 …     

自身免疫性甲状腺病患者白细胞介素及受体基因表达的研究

目的 观察３７例自身免疫性甲状腺病（ＡＩＴＤ）患者甲状腺组织中相关白细胞介素（ＩＬ）及受体基因表达,并测定血清ＴＴ３,ＴＴ４及ＴＧＡ,ＴＭＡ的水平,结果表明格莱弗氏病（ＧＤ）患者ＩＬ－２,ＩＬ－２Ｒ及ＩＬ－６ｍＲＮＡＡ表达细胞阳性率与血清ＴＴ３,ＴＴ４水平呈正相关。桥本氏甲状腺炎（ＨＴ）患者ＩＬ－２,ＩＬ－２Ｒ,ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达细胞阳性率与血清ＴＧＡ ＴＭＡ呈正相关。     

双侧自发性气胸——呼吸系统疾病(18)

自发性气胸是临床常见急症,容易诊断。但双侧自发性气胸(以下简称双侧气胸)病情凶险,易误诊。现就其主要特点作一复习。一般情况发生率各家报道不一。张诚笃报道双侧同时气胸占气脚病列的2～6%。大畑正昭报道双侧气胸占气胸总数16%,双侧同时气胸达气胸总数的6.8%,并认为双侧气胸有上升趋势。病因多发生在肺部原有慢性疾患基础上,且多为两肺弥漫性病变。少数为特发性。Poiken报道