基于survivin的"模拟病毒"瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用

背景与目的：结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子，构建基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法：制备基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，用扫描电镜和免疫印迹（Western blot）进行鉴定。酶联免疫斑点试验（Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT）和标准^51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性，并对Babl／c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果：扫描电镜和免疫印迹证实“模拟病毒”瘤苗制备成功，并能有效介导“模拟病毒”瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准^51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应，可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子，对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性，杀伤率为56．4％；肿瘤治疗实验证实“模拟病毒”瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度，提高荷瘤动物的生存率，与对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论：基于survivin的“模拟病毒”瘤苗能有效激发出特异性CTL应答，并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长，提高荷瘤动物的生存率，为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。     

IFN-γ促进人单核细胞向不典型成熟DC分化

目的: 研究IFN-γ对人单核细胞表型及分化的影响.方法: 采用免疫磁珠法从健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs)中特异性分选单核细胞, 以细胞因子IFN-γ、 TNF-α、 IFN-α刺激单核细胞后, 观察单核细胞生长特性, 并以流式细胞术检测单核细胞表面CD1a、 CD14、 CD80、 CD83、 CD86、 HLA-DR等分子表达.结果: 细胞因子IFN-γ、 TNF-α、 IFN-α对单核细胞形态、生长及表型转化有不同影响.IFN-γ促进单核细胞黏附聚集形成"细胞小岛结构", 刺激单核细胞形态向梭形及多角形转化; IFN-γ上调单核细胞表达CD80、 CD83、 CD86及HLA-DR分子, 同时下调CD14分子表达.结论: IFN-γ促进单核细胞向不典型的成熟DC方向分化.     

过氧化氢对白色念珠菌酶影响的显微分光光度计定量研究

本文按细胞化学原理和方法显示白色念珠菌（C．albicans）琥珀酸脱氢酶（SDH）和酸性磷酸酶（ACP），并用显微分光光度计检测定量分析了过氧化氢（H_2O_2）对C．albicans此两酶的影响。结果表明，3.0～3.2％H_2O_2可引起C．albicans SDH和ACP反应物吸光度较对照组显著降低，说明H_2O_2能使此两酶的活性降低或含量减少。     

大肠息肉及其癌变的细胞核DNA含量和形态测定分析

大肠息肉及其癌变的细胞核ＤＮＡ含量和形态测定分析阎晓初，柳凤轩，贺光友，傅晓岚，李才安应用显微分光光度计和图象分析仪对大肠各类息肉与癌变的细胞核ＤＮＡ含量和组织学形态进行定量研究，以探讨息肉类型与癌变的关系和腺瘤型息肉不典型增生分级的客观标准，为临床...     

放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞细胞周期及其DNA含量的影响

背景造血微环境的异常是造血功能障碍的重要影响因素,但关于造血基质细胞是否对辐射具有敏感性,尚无统一定论.目的观察放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及NDA含量的影响,为深化放射辐射条件下导致的造血功能障碍的认识,并为早期干预环境中的有害因子提供科学依据.设计以实验动物为研究对象,完全随机分组设计,随机对照实验.单位一所军医大学高原军事医学系中心实验室、预防医学系防原医学教研室.材料本实验于2002-10/2003-04在解放军第三军医大学动物实验中心完成.实验昆明种健康雄性小白鼠60只.按随机数字法将小鼠分为放射损伤组和正常对照组各30只.方法对放射损伤组30只小鼠,用60Co-γ射线照射,距离4 m,照射率1.27 Gy/min.正常对照组30只小鼠未实施干预措施.取放射损伤后3,7 d小鼠骨髓细胞进行体外培养,分别对培养14,21 d的骨髓基质细胞进行检测.主要观察指标射线照射后骨髓基质细胞集落数量、细胞周期和DNA含量的变化.结果5.0 Gy照射后,骨髓基质细胞仍能贴壁生长,但骨髓基质细胞集落数量显著低于正常(P<0.01).照射7 d后的骨髓基质细胞集落数量虽比照射后3 d所增加,但恢复缓慢,延长培养时间,显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑.流式细胞仪检测结果表明放射损伤组照射3,7 d后G2+M期细胞(2.60±0.41,4.20±1.27)和DNA含量(58 40±0.79.61.17±1.35)显著低于正常对照组(12.60±0.75,78.57±0.83)(P<0.05～0.01).结论骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性,且持续时间较久.     

放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞细胞周期及其DNA含量的影响

背景：造血微环境的异常是造血功能障碍的重要影响因素，但关于造血基质细胞是否对辐射具有敏感性，尚无统一定论。目的：观察放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及NDA含量的影响，为深化放射辐射条件下导致的造血功能障碍的认识，并为早期干预环境中的有害因子提供科学依据。设计：以实验动物为研究对象，完全随机分组设计，随机对照实验。单位：一所军医大学高原军事医学系中心实验室、预防医学系防原医学教研室。材料：本实验于2002—10／2003—04在解放军第三军医大学动物实验中心完成。实验昆明种健康雄性小白鼠60只。按随机数字法将小鼠分为放射损伤组和正常对照组各30只。方法：对放射损伤组30只小鼠，用60Co—γ射线照射，距离4m，照射率1．27Gy／min。正常对照组30只小鼠未实施干预措施。取放射损伤后3，7d小鼠骨髓细胞进行体外培养，分别对培养14，21d的骨髓基质细胞进行检测。主要观察指标：射线照射后骨髓基质细胞集落数量、细胞周期和DNA含量的变化。结果：5．0Gy照射后，骨髓基质细胞仍能贴壁生长，但骨髓基质细胞集落数量显著低于正常(P&;lt;0．01)。照射7d后的骨髓基质细胞集落数量虽比照射后3d所增加，但恢复缓慢，延长培养时间，显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑。流式细胞仪检测结果表明放射损伤组照射3，7d后G2+M期细胞(2．60&;#177;0．41，4．20&;#177;1．27)和DNA含量(58．40&;#177;0．79，61．17&;#177;1．35)显著低于正常对照组(12．60&;#177;0．75，78．57&;#177;0．83)(P&;lt;0．05—0．01)。结论：骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性，且持续时间较久。     

免疫磁珠负性分离纯化小鼠脾脏CD8+ T细胞

目的 探讨小鼠脾脏CD8 T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测.方法 以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8 T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增殖能力. 结果 经过流式细胞仪测定免疫磁珠负性分选后的小鼠脾脏CD8 T细胞纯度达到(91.6±3.6)%,台盼兰染色细胞活力为(94.9±3.2)%,ConA刺激72 h后有(56.3±1.7)%的细胞增殖.结论 免疫磁珠负性分选法能够分选出高纯度的CD8 T细胞,并且不影响分选靶细胞的细胞活力和功能.     

青藤碱促进树突状细胞分化抑制其成熟

目的 探讨青藤碱对树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化发育、成熟、抗原递呈及刺激T细胞活化能力的影响.方法 DC体外培养时,青藤碱处理,观察细胞生长情况,流式检测细胞表型及抗原内吞能力,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞活化的能力,E(I)ISA检测细胞因子分泌.结果 与对照组相比,青藤碱处理DCCD1a表达上调而CD14下调,IL-12分泌减少,共刺激分子表达减少,同种T细胞刺激活性降低.结论 合适剂量的青藤碱能刺激单核细胞分化为不成熟DC但能抑制其进一步成熟.     

胸腺肽 α1 体外刺激胃癌患者外周血单个核细胞对淋巴细胞亚群影响

目的 观察胸腺肽α1(thymosin α1,Tα1)体外刺激培养胃癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对淋巴细胞亚群分化及分泌细胞因子谱的影响,分析Tα1对肿瘤患者免疫功能的影响. 方法 分离32例胃癌患者及18例健康自愿者PBMCs,50、10、1 μg/ml Tα1体外刺激培养2 d;流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞百分比、CD4+/CD8+变化及分泌Th1/Th2细胞因子谱变化. 结果 Tα1体外刺激PBMCs后,胃癌患者及健康自愿者的CD4+、CD8+ T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无明显变化;健康自愿者CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞水平无明显变化,胃癌患者CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞水平明显提高(P<0.05);1 μg/ml Tα1促进胃癌患者PBMCs分泌IL-1β、TNF-α,10 μg/ml促进胃癌患者PBMCs分泌IL-6(P<0.05),健康自愿者PBMCs分泌细胞因子谱变化不明显(P>0.05). 结论 Tα1体外刺激胃癌患者PBMCs,提高CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞亚群水平,可能对肿瘤患者抗肿瘤免疫起抑制效应.     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....