对不同层次学生《生物化学》实验教学的一点体会

实验课是生物化学教学的重要组成部分,通过实验课不但可以强化学生对理论课内容的理解和记忆,还可以培养学生的动手能力与独立思考能力,使学生能够掌握一定的科研方法,有助于科学精神的培养.更重要的是,一次成功的实验课可以激发出学生对本学科的兴趣,有效的锻炼学生的创造性思维.可以说,实验课具有重要的意义,产生的效果是理论教学所不能替代的.但是不同层次的学生由于其基础的差异,实验课对他们的要求有一定的不同.因此,在教学过程中着重点、方法上都要有所侧重.笔者结合自己在实验课教学中的体会浅谈一下对于不同层次的学生实验教学的一点心得.     

脾虚型哮喘大鼠TNF—α／NF—κB信号途径变化的研究

目的:探讨脾虚对哮喘大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度和肺组织核因子KBp65(NF-κBp65)活性变化的影响.方法:将30只Wistar雄性大鼠随机分为3组:生理盐水对照组(A组)、脾虚型哮喘组(B组)、哮喘组(C组).采用ELISA方法检测血清扣BALF中TNF-α的浓度,免疫组织化学法检测肺组织NF-κBp65的活性.结果:B组、c组血清和BALF中TNF-α的浓度及肺组织NF-κBp65的活性显著高于A组(P<0.01),B组肺组织NF-κBp65的活性显著高于C组(P<0.01).结论:脾虚能够使哮喘大鼠血清和BALF中TNF-α浓度升高,并且能够使肺组织NF-κBp65的活性进一步增加.     

葛根芩连汤调控巨噬细胞极化趋势干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块机制

目的 探究葛根芩连汤调控巨噬细胞极化趋势干预ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化（AS）易损斑块的机制。方法 12只正常C57BL/6CNC小鼠作为空白组，60只同品系的ApoE^-/-小鼠随机分为5组，即模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组（GQL-D、Z、G组，剂量3.12、6.24、12.48 g·kg·d^-1）、阿托伐他汀组（西药组），以高脂饲料喂养造模。空白组、模型组予等体积无菌蒸馏水灌胃；GQL-D、Z、G组、西药组分别予对应浓度的药物灌胃8周。生化法检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，大体油红O染色、苏木素-伊红（HE）染色观测主动脉区域斑块分布情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中M1型促炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平和M2型抗炎性因子白细胞介素-13（IL-13）、转化生长因子-β（TGF-β）水平，免疫荧光双标检测巨噬细胞甘露糖受体（MMR/CD206）/精氨酸酶-1（Arg-1）、CD206/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测主动脉Arg-1和iNOS mRNA表达水平。结果 与模型组相比，GQL-Z组、GQL-G注和西药组的TG、TC、LDL-C水平明显降低（P<0.05），HDL-C水平明显升高（P<0.05）；随着葛根芩连汤浓度的增加，斑块富集区域逐渐缩小，颜色随之变浅，以GQL-G组和西药组染色区域分布最散；给药各组的Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05），CD206蛋白表达水平明显升高（P<0.05），iNOS蛋白表达水平明显降低（P<0.05），Arg-1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05），iNOS mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论 葛根芩连汤对AS易损斑块的干预作用可能与其改善脂质代谢，抑制巨噬细胞M1极化，促进巨噬细胞M2极化，进而改善巨噬细胞炎症微环境有关。     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的EA.hy926细胞Bcl-2表达的影响

目的研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(EA.hy926)Bcl-2表达的影响。方法苦荞麦总黄酮作用于高浓度软脂酸刺激下的EA.hy926细胞,RT-PCR技术检测Bcl-2 mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组相比较,苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组之间无显著差异(P>0.05)。结论苦荞麦总黄酮可以促进EA.hy926细胞Bcl-2基因及蛋白的表达发挥抑制凋亡的作用。     

补脾益气方药对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响

目的观察补脾益气方药对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达的干预作用。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、生理盐水治疗组(C组)、地塞米松组(D组)和补脾益气方药治疗组(E组)。哮喘组通过卵蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,以生理盐水和地塞米松分别做对照治疗。E组大鼠在复制哮喘模型后,按照1 mL/100 g体质量给予补脾方药1次/d,共14 d。计数肺泡灌洗液细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数;光镜下观察肺组织病理学改变;采用RT-PCR和Western bloting检测肺组织eotaxin的表达。结果与A组比较,B、C组肺泡灌洗液EOS计数、eotaxin的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.01),D、E组较B组降低(P<0.01),D、E组间无差异(P>0.05)。结论补脾益气方药可能通过降低哮喘大鼠体内eotaxin水平,减轻炎症细胞在肺组织局部浸润,抑制气道炎症。     

四神丸对小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌化学预防作用研究

目的：观察四神丸对小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌化学预防作用。方法：40只ICR小鼠,随机分为正常对照组、模型组、四神丸口服给药组和四神丸灌肠给药组4组。以40mg/g 1,2-二甲肼（DMH）腹腔注射、20g/L右旋葡聚糖苷钠（DSS）饮用水诱导小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌模型。口服和灌肠四神丸组分别给予0.2mL四神丸浸膏剂（生药浓度2g/mL）,共21周后,观察小鼠脾脏、胸腺、结肠质量,结肠组织病理变化和四神丸对小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌发生率的影响。结果 ：与模型组相比,四神丸可以明显改善小鼠DMH＋DSS诱癌过程中胸腺等组织的改变和恶病质状态,同时四神丸明显抑制小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌,并降低成癌率。但口服和灌肠两种给药方式对结果没有影响。结论：四神丸能抑制小鼠结肠炎性病变后诱发结肠癌。     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的EA．hy926细胞Bcl-2／Bax表达的影响

目的：研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞（EA．hy926）凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法：体外培养EA．hy926细胞,实验分为正常组、模型组、苦荞麦总黄酮组和二甲双胍组,用高浓度的软脂酸建立胰岛素抵抗状态血管内皮细胞损伤模型。采用westernbolt检测BcI-2及Bax蛋白的表达情况。结果：与正常组相比,模型组细胞Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2／Bax比值降低,差异有显著性（P〈0．01）;与模型组相比较,苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞Bcl-2蛋白表达水平明显升高,Bax蛋白表达减少,Bcl-2／Bax比值明显提高,差异有显著性（P〈0．01）;苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组之间无显著差异（P〉0．05）。结论：苦荞麦总黄酮可通过调节Bcl-2／Bax表达而抑制软脂酸诱导的EA．hy926凋亡,减少内皮细胞损伤。     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导EA.hy926细胞NO合成的影响

目的:研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导EA.hy926细胞NO合成的影响。方法:将体外培养的EA.hy926细胞分为正常对照组、软脂酸诱导的胰岛素抵抗细胞模型组、苦荞麦总黄酮组、二甲双胍组。采用硝酸盐还原酶法检测各组细胞上清液中NO含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western blot法检测各组细胞eNOS mRNA和蛋白的表达。结果:胰岛素抵抗细胞模型组细胞上清液NO含量,细胞eNOS mRNA及蛋白表达与正常对照组相比明显下降(P<0.05)。苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞上清液NO含量,细胞eNOS mRNA及蛋白表达与模型组相比,明显增多(P<0.05)。苦荞麦总黄酮组和二甲双胍组相比,以上指标均无明显差异(P>0.05)。结论:苦荞麦总黄酮可有效促进软脂酸刺激下血管内皮细胞eNOS mRNA和蛋白的表达,从而增加NO的合成。     

高等中医药院校生物化学课程双语教学的实践与思考

双语教学是我国高等教育的一项重要内容,生物化学是生命科学领域中一门前沿学科,生物化学课程双语教学已成为新世纪医学教育改革的重要内容.根据我校开展双语教学的实际,对生物化学双语教学中的主要问题及其解决方法进行初步探讨和总结,以期建立规范、完善的双语教学模式,并对双语教学在生物化学中的应用与发展提供可能的借鉴.