糖尿病难愈创面与晚期糖基化终末产物的关系

创面愈合延迟或不愈在糖尿病患者中很常见,但其发病机制目前尚未明了,其中非酶促糖基化反应可能是影响创面愈合的一个重要因素.非酶促糖基化反应系还原性糖、醛基与各种蛋白质N端游离氨基酸或赖氨酸残基的ε-氨基团间在非酶催化下形成可逆的Schiff碱基,再经进一步反应,和化学结构重排转变为性质更为稳定的Amadori产物(Amadori products,AP),这些早期糖基化产物可继续缩合,经十分复杂的重组、脱氢、交联,最终形成不可逆的晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end-products,AGEs)[1].     

晚期糖基化终末产物与糖尿病皮肤微血管病变的相关性研究

目的　研究晚期糖基化终末产物 (AGE)与糖尿病 (DM)皮肤微血管病变的关系 ,探讨DM创面新生血管化障碍或延迟的机制。方法　应用链脲佐菌素 (STZ)将SD大鼠诱导成速发型DM大鼠模型 ,并以正常SD大鼠作为对照 ,于致病后 12周获取大鼠背部中央的皮肤标本。应用F 30 10荧光分光光度计和免疫组织化学技术测定皮肤中AGE含量的变化 ;应用透射电镜观察皮肤微血管超微结构的改变。再选用人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白 (AGE HSA)在体外共同培养 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测AGE对人血管内皮细胞活性的的影响。结果　DM大鼠皮肤胶原提取液的荧光值明显高于相应年龄的正常大鼠 (P <0 .0 1) ;免疫组织化学检测显示DM大鼠皮肤中AGE呈片状或块状沉积 ,其表达阳性率和强阳性率显著高于正常大鼠 (P <0 .0 1) ;DM大鼠皮肤普遍存在微血管病变 ,主要表现为血管内皮细胞变性和基底膜增厚 ;内皮细胞经 10 0 μg/mlAGE HSA干预 6h后 ,采用MTT法测定其吸光度值显著低于正常大鼠 (P <0 .0 1) ,流式细胞仪测定的各时相点凋亡细胞百分率亦明显高于正常大鼠 (P <0 .0 1) ,且均呈时间和剂量的依赖性。结论　AGE是DM皮肤微血管病变的重要致病因素 ,亦是DM合并创伤后新生血管化障碍或     

人外周血粒细胞褪黑素受体亚型的基因与蛋白表达

目的：研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor，MR)亚型的基因与蛋白表达的特点。方法：通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞，采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA，分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA，并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序；同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点。结果：Northern印迹方法检测出长约1．1kb的mt1mRNA，但未检出长约1．1kb的MT2mRNA；RT-PCR方法则得到了约370bp的mt1 cDNA片段，无320bp的MT2 cDNA片段，mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白，主要分布于细胞膜和细胞质，呈棕褐色阳性颗粒，而细胞核上几乎未见阳性颗粒，MT2受体蛋白则未检出。结论：证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达，而无MT2亚型的基因与蛋白的表达，提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin，Mel)作用的外周靶器官。     

华蟾素对TGF-β1诱导人结肠癌细胞上皮-间质化的实验研究

目的 研究华蟾素在体外对肿瘤坏死因子-β1(TGF-β1)诱导的人结肠癌细胞上皮-间质化(EMT)的作用.方法 将体外培养的人结肠癌细胞株(SW480)分为:(1)正常对照组;(2)TGF-β1 (10 ng/mL)单独处理组;(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5、10、20、40、80 mg/mL)共同处理组,并在体外培养48 h.CCK8检测细胞增殖抑制情况,利用倒置相差显微镜观察各处理组细胞形态学变化,Transwell小室检测细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在mRNA及蛋白水平表达的变化.结果 (1)与TGF-β1(10 ng/mL)单独处理组比较,TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(10、20、40、80 mg/mL)共同处理组对SW480具有显著的增殖抑制作用(P＜0.05).(2)与正常对照组相比,TGF-β1单独处理组、TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5 mg/mL)共同处理组呈现典型的间质化表型,TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(5 mg/mL)共同处理组则呈现经典的上皮表型.(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组相比侵袭和迁移能力均明显减弱(P＜0.05).(4) QRT-PCR和Western blot结果显示TGF-β1单独处理组与正常对照组比较,Vimentin表达水平明显增强,E-cadherin表达显著减弱.TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5 mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组、对照组相比Vimentin表达水平显著降低,E-cadherin表达显著增强.结论 华蟾素可抑制TGF-β1诱导的人结肠癌细胞SW480的增殖,其机制可能与促进E-钙黏蛋白表达增强,同时使波形蛋白表达减弱,从而与抑制TGF-β1诱导的EMT过程有关.     

糖尿病皮肤病理生理改变及其机制的研究

目的研究糖尿病皮肤伤前潜在的病理生理改变及其形成的机制。方法将16只8周龄雄性SD大鼠随机分为糖尿病组(8只)和正常对照组(8只)。致病12周后,肝素抗凝血收集血浆,取背部全层皮肤组织标本。测量血浆中糖化蛋白(GSP)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH);观察皮肤组织学的改变,检测表皮厚度、表皮细胞周期、皮肤组织糖和AGEs含量;建立AGE-HSA干预的细胞培养体系,观测AGEs干预后表皮细胞周期和ECV304细胞的生长抑制。结果糖尿病大鼠毛色灰暗、枯黄、体质量减轻,皮肤明显变薄,表皮细胞数量减少,复层排列缺乏,表皮厚度[(0.016±0.007)mm]明显薄于正常对照大鼠[(0.037±0.007)mm],差异有统计学意义(P<0.01);真皮层部分胶原萎缩、肿胀,退化变性,并伴随程度不等的炎性细胞浸润;皮下脂肪进行性萎缩或消失。糖尿病大鼠血浆GSP和MDA含量升高,GSH下降,皮肤糖含量和胶原提取液的荧光值也显著升高(P均<0.01),真皮基质AGEs蛋白表达强烈且广泛,有的相互连接呈片状,正常大鼠真皮基质中亦出现AGEs蛋白的阳性表达,但均散在且淡染。糖尿病大鼠皮肤组织S期表皮细胞百分数(4.83±2.16)%与正常大鼠(5.01±2.47)%相比,差异无统计学意义(P>0.05),但进入G2/M期表皮细胞百分数(0.80±0.62)%比正常大鼠(2.86±1.10)%明显减少(P<0.05),而原代培养的表皮细胞经150μg/ml AGE-HSA干预48 h后,S期和G2/M期细胞比例均显著低于对照组(P<0.05)。ECV304细胞在12.5、25及50μg/ml AGE-HSA作用48 h后,细胞凋亡百分率与对照组比较仍无显著性差异,而在100或200μg/ml AGE-HSA作用6、12、24及48 h后,各时相点的细胞凋亡百分率明显高于对照组(P均<0.01),且呈时间和剂量依赖性。结论糖尿病皮肤组织局部高糖和AGEs等毒性物质蓄积所致的皮肤组织自身的细胞或基质功能不良,是糖尿病皮肤损害的重要机制之一。     

消防部队现场医疗救助应成为我国现行院前急救模式的拓展和延伸

分析我国现有院前急救管理办法、院前急救现实中存在的不足以及消防部队现场医疗救助的优势,以观察消防现场医疗救助对于院前急救的弥合作用,并提出未来我国院前急救发展前景。应充分利用消防部队的各种优势,把消防的现场医疗急救有机融合到院前急救体系中,并赋予相应的法律权限和职责,能够显著提高我国院前急救水平,缓解急救矛盾,以提高城市应急能力,增加城市安全感。在我国现有院前急救体制下,应充分利用医疗系统以外的社会急救力量,消防部队作为我国现役的一支社会综合救援力量,二者有机结合才能够突破现有急救瓶颈,适应现实社会发展需要,使我国院前急救逐渐与国际接轨。     

消防部队应突出和强化现场医疗救助的职责和能力

目的探讨建立我国消防医疗救助体系,提高社会抢险救援和院前医护急救的能力和水平。方法通过对消防部队抢险救援形势和我国医疗急救现状的分析,阐述了消防部队应突出和强化现场医疗救助的必要性、重要性和可行性,并结合当前抢险救援中现场医疗救助的现状,提出了建立消防医疗救护体系,开展救护演练,制定辖区应急预案等措施。结果消防部队参与院外医护急救,可以加强消防和卫生部门的协作,整合了现有社会抢险救援和院前医护急救的资源,最大限度地利用了各自为政的社会抢险救援和院外医护急救装备,共同协商解决社会抢险救护中存在的问题,正确实施灾害或事故的紧急处置预案,建立统一、高效、协同的社会抢险救护机制。结论建立我国的消防医疗救护体系,加强第一现场医疗救护能力,已成为我国消防工作适应国际化的一个派生物,是一个必然的发展趋势。     

增生性瘢痕发生和演变过程中成纤维细胞生物学功能变化及其意义

目的 探索增生性瘢痕在发生和演变过程中,成纤维细胞生物学功能变化的规律及其意义.方法 选取人不同时期增生性瘢痕组织和正常皮肤组织,进行HE染色观察.另外,分离和培养不同时期瘢痕和正常皮肤中成纤维细胞,RT-PCR分别检测成纤维细胞在转移生长因子（TGF-β1）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、和Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达水平的变化.结果 HE染色可见正常皮肤细胞和微血管数目较少,早期瘢痕增多,炎症细胞浸润明显.增生期瘢痕成纤维细胞和微血管增多.随病情进展,微血管呈缩窄倾向.消退期瘢痕成纤维细胞减少,微血管狭窄或闭塞.成熟期瘢痕见微血管、成纤维细胞数目进一步减少,微血管管腔小,大部分开放.RT-PCR检测结果发现,正常皮肤来源的成纤维细胞TGF-β1、VEGF和Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA有较低表达,早期瘢痕成纤维细胞TGF-β1、VEGF和Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达水平开始升高,在增生期表达到达高峰,消退期瘢痕的表达开始下降,到成熟期表达最低.结论 增生性瘢痕发生和演变过程中,成纤维细胞功能存在动态改变,这种动态改变与瘢痕的发生和消退成熟的病理变化相关.     

浅谈当前消防救援的最大误区

当前我国正处于经济转轨和社会转型期。城镇建设和新农村建设日新月异,经济社会的快速发展以及生态环境的恶化,使得致灾因素增多,各类事故灾害多发,社会矛盾集中,灾害的群发性和链状特征越来越突出,新修订的《中华人民共和国消防法》对公安消防部队的职能作了进一步拓展。