针对人caspase-8基因的siRNA的载体的构建及其沉寂效应检测

目的：设计并构建针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达载体，观察其对转染细胞中的caspase-8的抑制作用。方法：化学合成用于产生针对caspase-8的发夹状的RNA的寡核苷酸，将合成的寡核苷酸链退火形成双链，连接入经Hind Ⅲ和Bgl II双酶切后的pSUPER真核表达载体。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导，把重组质粒瞬时转染入HeLa细胞，RT—PCR、间接免疫荧光检测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果。结果：构建了针对人caspase-8基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER—C1和pSU—PER—C2，并在人HeLa细胞中有效发挥了对caspase-8基因的干涉作用，而且pSUPER—C1对于caspase-8基因的抑制作用要优于pSUPER—C2。结论：成功地构建了针对人caspase-8基因的siRNA载体，转染HeLa细胞后可抑制caspase-8基因的表达。     

慢性乙型肝炎患者胃粘膜HBV-DNA检测及临床意义

目的:检测慢性乙型肝炎(乙肝)患者乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA),探讨HBV与胃粘膜病变的关系。方法:选择慢性乙肝并伴有慢性胃炎的患者58例(H组)及慢性胃炎但其血清HBV标志物(HBVM)和HBV-DNA均阴性对照组52名(C组),两组均进行胃镜检查,同时取胃粘膜,H组取空腹静脉血液,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法进行血清、胃粘膜HBV-DNA含量和血清HBVM检测。结果:H组血清和胃粘膜HBV-DNA阳性例数分别为38例(65.52%)和46例(79.31%),两者相比有显著性差异(χ2=6.125,P<0.05);两者HBV-DNA含量显著正相关。H组32例血清HBeAg阳性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA均为阳性,而26例血清HBeAg阴性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA阳性只有6例(23.1%)和14例(53.8%)。C组胃粘膜HBV-DNA全部阴性。胃镜下观察H组患者广泛存在胃窦炎,C组以慢性浅表性胃炎为主。结论:HBV存在于胃粘膜中,可能引起胃部的炎性损伤。     

血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制

目的：检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化，以探讨血小板第4因子（PF4）对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制。方法：雄性BALB／c小鼠随机分为3组，第1组（正常对照组）、第2组（单纯照射组）、第3组（PF4保护组），第3组在照射前26h及20h腹腔注射PF440μg／kg，第2、3组全身一次性5Gy ^60Co-γ射线照射，照射后4h取小鼠骨髓细胞，Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化。结果：第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高，而Cyclin D1、CDK4则明显降低（P〈0．05）；第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异（P〈0．05），而Cyclin D1与CDK4无统计学意义（P〉0．05）。结论：p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用。     

022 人肿瘤坏死因子-α突变蛋白与活性部位分析

利用基因工程技术，可以得到大量的hTNF-α突变蛋白，它们是研究hTNF-α活性部位结构与功能关系的有力工具，国外许多学者就此方面做了大量的实验研究。本文就影响hTNF-α功能的活性区域和主要氨基酸残基以及N端、C端和二硫键与hTNF-α生物活性的关系做一综述。     

单硝酸异山梨酯注射液治疗充血性心力衰竭40例

硝酸酯类制剂作为血管扩张剂目前被广泛地用于充血性心力衰竭的治疗 ,静脉滴注能同时减轻心脏的前、后负荷 ,抑制左室重构 ,有效缓解充血性心力衰竭和减少并发症 ［１ ,２］。目前单硝酸异山梨酯 (ＩｓｏｓｏｒｂｉｄｅＭｏｎｏｎｉｔｒａｔｅ,ＩＳＭＮ)已开始应用于临床。我科自１９９９年１月至２０００年１２月对８１例各种病因引起的充血性心力衰竭住院患者分别应用ＩＳＭＮ注射液和硝酸甘油(ＮＴＧ)注射液进行治疗 ,以比较两种药物的疗效 ,现报道如下。１．一般资料采用单盲对照法随机分两组 :(１)ＩＳＭＮ组４０例 ,其中男性２７例 ,…     

重视天然药物化学实验教学

本根据天然药物化学实践性很强的特点,强调了实验的重要性。提出要理论联系实践,从而更好的掌握理论知识,培养实验技能,达到学以致用的目的,对实验课严格要求,培养学生严谨治学的态度。     

青年教师教学需要注意的几个问题

本主要从课堂教学的组织、教学内容的安排和教师与学生的关系等三个方面探讨了青年教师在实验工作中一些亟需解决的问题。     

新型高级创伤外科机动救治力量及其培训体系的建立

未来远海环境下的舰艇编队作战将成为我海军主要作战形式。远海作战战场广阔、攻防形势转换快、所致伤情伤势复杂,易在任意时间、任意战场地点瞬间产生批量伤员,救治难度极大。本文系统介绍了一种针对远海舰艇编队作战的新型高级创伤外科机动救治队伍及其专属模块化、标准化、轻量化的手术复苏装备系统,并阐述其培训体系构想,以备卫勤研究者、参与者借鉴参考。     

DNA聚合酶-I Klenow片段原位检测缺血性神经元的DNA早期断裂

1　材料和方法 1.1　材料　雄性4 mo龄左右SD大鼠36只,体质量250～350 g, 本校实验动物中心提 供 ;DNA聚合酶-I Klenow大片段、biotin-dATP, dGTP, dCTP, dTTP购自美国Gibco公司. 1.2　脑缺血模型　按文献［1］方法建立前脑缺血模型. 1.3　动物分组及组织切片制备　36只大鼠随机分组,实验组每组4只,假 手术对照组每组2 只,分缺血再灌注1, 2, 3, 6, 24和72 h 6个时间点,各组于相应时间点取脑,将其快速包 埋于干冰中,选择视交叉部位切片,片厚10 μm,储存于-70℃冰箱备用. 1.4　方法　玻片晾干,在40 g.L-1多聚甲醛固定30 min, 0.01 mol.L-1 PB S漂洗5 min×3次;在37℃湿温箱中,用含有10 μmol.L-1的dGTP, dCTP, dTTP标记 的dATP和40 U.mL-1的E.coli Klenow片段及50 mmol.L-1 Tris-HCl, 1 0 mmol.L-1 MgCl2, 50 mmol.L-1 NaCl的混合液(pH 8.0)孵育1 h, 0.01 mol.L-1的PBS液终止反应,然后在PBS/小牛血清白蛋白(0.5 g.L-1)中洗5 m in,再将生物素-卵白素-辣根过氧化物酶复合物(ABC 1∶300, Sigma)在PBS/小牛血清白 蛋白中孵育1 h,最后用0.5 g.L-1 DAB在PBS (0.01 mol.L-1 pH 7.4)和0.5 g.L-1 H2O2中显色.     

骨肉瘤和骨巨细胞瘤的p53蛋白、PCNA表达 与肿瘤组织微血管密度的关系

探讨骨肉瘤和骨巨细胞瘤的ｐ５３蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达与癌组织内微血管密度（ＭＶＤ）的关系。方法;应用免疫组化和形态计量方法检测４０例骨肉瘤和４０例不同级别骨巨细胞瘤的ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ表达与肿瘤组织内ＭＶＤ之间的关系。结果：骨巨细胞瘤Ⅱ～Ⅲ级组ＰＣＮＡ表达明显高于骨巨细胞瘤Ｉ级组（Ｐ＜０．０５）,且骨巨细胞瘤ＭＶＤ≥５的肿瘤组织Ｐ５３蛋白表达明显高于ＭＶＤ＜５的肿瘤组织（Ｐ＜０．０５）;骨肉瘤ＭＶＤ≥５的肿瘤组织Ｐ５３蛋白表达也明显高于ＭＶＤ＜５组（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３蛋白阳性率虽骨巨细胞瘤Ⅱ～Ⅲ级、骨肉瘤均高于骨巨细胞瘤１级但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ过度表达与ＭＶＤ有密切关系,ｐ５３、ＰＣＮＡ及ＭＶＤ可作为评估骨巨细胞瘤、骨肉瘤预后有价值的分子生物学指标。