靶向沉默转化生长因子β1表达的短发夹RNA的筛选

目的:筛选可靶向沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达的短发夹RNA(shRNA)。方法:设计和制备靶向沉默TGF-β1的5条shRNA,并构建靶向沉默TGF-β1的p-Genesil-shRNA真核表达重组质粒及含无关shRNA的pGenesil-1-shRNA-vect对照质粒,酶切和测序方法进行鉴定。通过脂质体介导分别将p-Genesil-1-shRNA-vect质粒和各重组表达质粒转染入高糖或AngⅡ环境激活的HKC细胞(分别命名为p-Genesil-1-vect细胞及p-Genesil-shRNA1~5细胞),Western blot方法检测沉默TGF-β1表达的效果。结果:酶切和测序结果显示,5种重组质粒均可切出与预计相符的目的片段,所有shRNA编码序列与设计一致。与HKC细胞相比,高糖或AngⅡ刺激的HKC细胞和pGenesil-1-vect细胞中TGF-β1表达均增高(F=74.188,P<0.001),而后二者之间TGF-β1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与高糖或AngⅡ刺激的p-Genesil-1-vect细胞相比,高糖或AngⅡ刺激的各组p-Genesil-shRNA细胞中TGF-β1表达均降低(F=139.695,P<0.001)。结论:筛选出1条可靶向沉默TGF-β1表达的shRNA。     

HPV16相关宫颈癌组织中MUC16和E6表达的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16相关宫颈癌组织中粘蛋白抗原16(MUC16)与E6表达的关系。方法:以HPV16 E6阳性和阴性的宫颈癌细胞系和宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织(184例)为研究对象,采用Western blot和免疫组化方法检测HPV16 E6和MUC16的表达。结果:Western blot结果显示:C-33A细胞中HPV16 E6无表达,Ca Ski细胞和Si Ha细胞中可见HPV16 E6表达;C-33A细胞中MUC16的表达低于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(P<0.05),Ca Ski细胞和Si Ha细胞中MUC16的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:HPV16E6阳性的宫颈鳞癌组织中MUC16的表达高于HPV16 E6阴性的宫颈鳞癌组织(χ2=43.670,P<0.001)。结论:宫颈癌细胞系和鳞癌组织中MUC16与E6表达可能有关。     

曼氏血吸虫Mr 30 000抗原(或联用人用佐剂)可诱导小鼠产生高保护力

Attallah等研制的抗曼氏血吸虫的IgG2a型单抗BRL4,在小鼠3次被动转移免疫实验中,分别获得51.6%、41.9%和53.8%的减虫率。该单抗的保护性表位存在于曼氏血吸虫尾蚴(CAP)、成虫(SWAP)和虫卵(SEA)组分的Mr74000抗原中。进一步的研究发现,能与BRL4反应的还有一种Mr较小的30000抗原,该分子既存在于曼氏血吸虫病患者的尿液中,也存在于亲和纯化的Mr74000抗原经α-糜蛋白酶和胰蛋白酶消化的产物中。该研究旨在检测Mr30000抗原表位在有或无联用人用佐剂的情况下能否诱导抗曼氏血吸虫的免疫保护力。实验用动物为雌性CD1白化变种小鼠。免疫用…     

TLR4在华支睾吸虫感染致小鼠肝纤维化作用的研究

目的探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用。方法建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化。结果 C3H/HeN小鼠肝脏大体病变从2W开始,随感染时间延长而加重;C3H/HeJ小鼠从2W开始,4W加重,至8W已明显减轻。观察HE、Masson染色肝脏切片示随感染时间的延长,C3H/HeN小鼠前期肝纤维化逐渐加重,至8W起趋于稳定;2W~12W纤维化评分均高于感染前(P0.01)。C3H/HeJ小鼠肝纤维化评分2W升高,4W达高峰并显著高于感染前(P0.01),至8W明显下降。与C3H/HeN比较,感染后2W、4W、8W、12W C3H/HeJ小鼠肝纤维化程度轻(P0.01)。感染后7d,C3H/HeN小鼠的HE染色切片上可见嗜酸性粒细胞,4W达高峰,此后明显减少。感染后2W、4W、8W,C3H/HeJ小鼠嗜酸性粒细胞较C3H/HeN小鼠少(P0.05)。结论 TLR4基因缺失可能在华支睾吸虫感染致肝纤维化过程起一定的阻制作用,从而减缓肝纤维化的进程。     

斑点免疫金染色法与免疫金银染色法诊断日本血吸虫病的比较

目的建立快速、敏感、特异性强，操作简便和经济实用的诊断日本血吸虫病的免疫学检测方法一快速斑点免疫金染色法(R-Dot-IGS)。方法将日本血吸虫虫卵可溶性抗原点加于微孔滤膜，经预作用和封闭后，依次加入待检血清和金标记二抗，然后观察结果，并与快速微量斑点免疫金银染色法(RM-Dot-TGSS)和斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)进行比较。结果用R-Dot-IGS、RM-Dot-IGSS和Dot-IGSS同步检测55份日本血吸虫病患者血清，三种方法的阳性率分别为98．18％(54／55)、98．18％(54／55)和100％；检测50例健康人血清均为阴性；检测10例肝吸虫病人和10例肺吸虫病人血清，仅有1份肝吸虫病人血清在RM-Dot-IGSS反应为阳性。结论R-Dot-IGS检测过程仅为15min不需银显影，具有敏感特异、快速简便实用的特点，适用于日本血吸虫病的现场流行病学调查和临床快速诊断。     

快速斑点免疫金染色法检测日本血吸虫病人血清抗体的初步研究

目的 :探索建立快速、简便、经济的免疫学诊断方法。方法 :将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,检测日本血吸虫病患者血清抗体 ,经过优化条件 ,数分钟出现结果 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)并与斑点免疫金银染色法 (Dot -IGSS)比较。结果 :初步结果显示 ,F -Dot -IGS共检测4 5例日本血吸虫病急性患者血清抗体 ,均为阳性率 10 0 % ;检测 4 5例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清中 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 .0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。检测结果与Dot-IGSS比较无显著性差异。结论 :该法快速、简便、敏感性和特异性较好 ,适用于基层、流行病学调查和临床快速诊断。     

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。     

临床医学专业定向生的人体寄生虫学课程改革与探索

临床医学专业定向生是为基层医疗机构培养全科医生的人才战略措施.教师积极改革教学模式、提高教学质量,有利于学生综合素质的提升,从而更好的服务社会.人体寄生虫学是基础医学向临床医学过渡的桥梁课程,也是医学生的必修课.该课程知识点琐碎、涉及知识面广、实践性强,引导学生学会学习是每个教师关注的重点.本教研室教师根据以往的教学经验,结合临床定向医学生的特点和人体寄生虫学课程现状,依托网络课程平台,积极调整课程内容、优化教学手段和完善评价体系,强调以学生为中心的教学理念,积极融入课程思政,以期提高学生学习的主动性和职业素养,更好的为临床工作服务.     

日本血吸虫辐照尾蚴模拟表位的筛选和初步鉴定

目的从噬菌体表面显示随机肽库中筛选日本血吸虫辐照尾蚴抗原模拟表位。方法用Sepharose4B亲和层析法,从日本血吸虫辐照尾蚴免疫鼠血清中纯化抗体,经正常血吸虫尾蚴抗原吸收后,用于12肽噬菌体随机肽库的免疫筛选。经三轮筛选,随机挑取20个噬菌体克隆,经DNA序列分析后,对各独立表位进行免疫学鉴定。结果DNA序列分析,获得4个有序列重复的噬菌体克隆;Dot-ELISA分析显示,4个克隆均能被辐照尾蚴免疫血清中IgM型抗体识别,反应强度有一定差别;P1和P2克隆还能被IgG型抗体识别。结论从噬菌体随机肽库中成功筛选到日本血吸虫辐照尾蚴抗原模拟表位。