血必净注射液研究现状和热点的可视化分析

目的：分析血必净注射液的应用现状和研究热点,为血必净注射液在临床的合理应用提供参考依据。方法：检索中外文献数据库中的血必净注射液相关文献,运用BICOMB-2软件对文献资料进行提取和统计,并利用UCINET 6.0软件中的NetDraw 2.118进行社会网络分析,利用gCLUTO进行聚类分析。结果：最终纳入中文文献2 117篇,英文文献183篇;发文量最多的中英文杂志分别是《中国中西医结合急救杂志》和《Frontiers in Pharmacology》;通过血必净注射液的社会网络分析,得到该领域的研究热点为"脓毒症"、"炎症反应"、"新冠病毒感染"等;聚类分析结果显示了当前研究的六大主题：炎症反应抑制、凝血功能改善、器官功能保护、联合用药、安全性评价、新型冠状病毒性肺炎治疗。结论：血必净注射液的疗效确切,作用环节多样。近5年研究热度略有下降,但新型冠状病毒的流行使其重新成为中药复方制剂研究的热点,具有良好的临床应用前景。     

RhoA介导凝血酶或脂多糖诱导内皮细胞株单层通透性增高

目的探讨RhoA在凝血酶或脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层通透性改变中的作用。方法用免疫荧光和改良的Boydon小室分别检测HUVECs F-肌动蛋白和单层通透性;用Western blot和免疫组化分析HUVECs内RhoA的表达;用RT-PCR检测RhoA mRNA表达。结果HUVECs经凝血酶或LPS处理后,F-肌动蛋白解聚,细胞周边形成应力纤维,HUVECs单层通透性增高;RhoA蛋白和mRNA表达上调;Rho激酶抑制剂Y-27632能明显缓解上述变化。结论RhoA参与凝血酶或LPS诱导的HUVECs的F-肌动蛋白的重构和单层通透性的改变。     

人E1A激活基因阻遏子的表达、抗体制备及生物学活性分析

目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体。诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白。以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化。用ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响。结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确。诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%。Westernblot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合。ELISA测得该抗体的效价>1∶105。免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITA-SY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围。BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖。结论:成功地获得兔抗hCREG抗体。证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调。表达的hCREG蛋白可抑制HI-TASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化。     

人血管细胞中hCREG1基因启动子对血清饥饿发生应答

目的： 为揭示E1A 激活基因阻遏子（CREG1）在人血管平滑肌细胞(VSMCs)和人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达的调控机制，构建人CREG1（hCREG1）启动子报告基因载体，探讨CREG1在不同血管细胞中的表达。方法: 在对hCREG1进行生物信息学分析的基础上，以人基因组DNA为模板，PCR方法扩增含有hCREG1基因上游-3 677 bp序列，构建了hCREG1 5′上游-3 677 bp、-2 310 bp和-945 bp序列片段，分别将这3个序列克隆到pMD18-T载体上并定向亚克隆到pEGFP-1报告基因载体-pEGFP-hCREG1-P3677、pEGFP-hCREG1-P2310和pEGFP-hCREG1-P945。将重组质粒瞬时转染VSMCs株HITASY和HUVECs，检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达。结果: 经测序鉴定证实，3个报告基因载体中插入的PCR扩增序列均与hCREG1基因上游DNA序列完全匹配。瞬时转染体外培养的人VSMCs和HUVECs后，经荧光观察和蛋白质印迹（Western blotting）证实，细胞内存在GFP的表达，并且0.5%FBS培养的HITASY细胞中GFP表达较10%FBS培养的细胞中明显增加。HUVECs中的GFP表达较人VSMCs明显增加。结论: hCREG1基因启动子报告基因载体构建成功，核心启动子存在于5′上游序列的-945 bp-0 bp区域，为进一步研究hCREG1基因表达提供了条件。     

人CREG融合蛋白基因的构建、表达及钝化

目的EIA激活基因细胞阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)是新近被发现的可能具有促进细胞分化、抑制细胞增殖作用的基因.本研究拟构建含hCREG基因的原核表达质粒,在E.coli中表达GST-hCREG融合蛋白,通过凝胶层析纯化GST-hCREG蛋白,为进一步研究hCREG与人血管平滑肌细胞分化与增殖的关系创造条件.     

基质金属蛋白酶1基因-519A/G多态性与冠心病发病的关系

目的 研究中国北方汉族人群中基质金属蛋白酶1(MMP1)基因-519A/G单核苷酸多态性与冠心病发病的关系.方法 采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性技术结合琼脂糖凝胶电泳和基因测序等方法,检测经冠状动脉造影证实的517例冠心病患者和380例健康对照者MMP1-基因-519A/G多态性位点的基因型和等位基因分布,分析两组人群MMP1基因型和等位基因型频率的差异.结果 中国北方汉族人群中存在MMP1基因-519A/G单核苷酸多态性.MMP1基因-519A/G单核苷酸多态的AA基因型在冠心病组和对照组间的分布差异有统计学意义[67.70%(350/517)比40.26%(153/380),OR=1.64,P＜0.001,95%CI:1.44～1.86],A等位基因携带者冠心病发病的相对危险度为1.49(P＜0.001,95%CI:1.33～1.69).亚组分析显示,AA基因型在急性冠状动脉综合征(ACS)组和稳定性心绞痛组间的分布差异有统计学意义[68.81%(278/404)比51.76%(44/85),P＜0.01,95%CI:1.04～1.27].A等位基因携带者发生ACS的相对危险度为1.11(P＜0.05,95%CI:1.01～1.21).不稳定性心绞痛组与急性心肌梗死组比较,AA基因型和A等位基因的分布差异无统计学意义.结论 中国北方汉族人群中存在MMP1基因-519A/G单核苷酸多态性.MMP1基因-519A/G单核苷酸多态性与冠心病的发病相关,A等位基因携带者发生ACS的危险性增加.     

贮存红细胞膜氧化损伤与抗氧化酶的保护作用

对过氧化引起红细胞膜损伤进行了实验研究。结果表明:红细胞经超氧化物阴离子氧化后,其损伤表现为高分子蛋白质交联聚合物形成,共轭二烯水平增加,红细胞贮存损伤亦呈类似特征。抗氧化酶可阻抑蛋白质交联聚合物的形成并对膜损伤有一定的保护作用。