改良卵黄培养基培养空肠弯曲菌的生物学性状初步研究

目的探索改良弯曲菌卵黄培养基对空肠弯曲菌生长以及生物学性状的影响.方法采用改良布氏无血琼脂培养基以及改良弯曲菌蛋黄培养基在相同条件下培养空肠弯曲菌,观察其生长状况及生物学性状.结果改良弯曲菌卵黄培养基培养的空肠弯曲菌生长良好,性状典型.结论改良弯曲菌卵黄培养基可用于空肠弯曲菌的大量繁殖,可供疫苗生产候选.     

重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定

目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平。用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例。以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性。结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42kD左右特异性蛋白质条带。pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%。在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖。结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达。     

miRNA-7在小鼠不同组织器官中表达的检测及其意义

目的 采用Real-time PCR方法来检测miRNA-7在小鼠12种不同组织器官中的表达情况并探讨其意义.方法 首先分别提取小鼠12种组织器官总RNA,用miRNA-7特异性引物逆转录为cDNA,采用Real-time PCR探针法检测miRNA-7在12种组织器官中的表达水平.结果 成功应用Real-time PCR方法检测miRNA-7在小鼠12种组织器官中的表达水平,结果显示,miRNA-7在肺组织中的表达水平最高,而在淋巴结中的表达水平最低.此外,在小肠、脑、胸腺、脾脏中也存在miRNA-7的高表达.结论 miRNA-7在小鼠的肺、小肠、脑、胸腺、脾脏中呈较高水平的表达,提示该分子可能在上述器官的发育、分化、功能维持及相关疾病发生中具有重要作用,为后续深入研究miRNA-7的生物学功能提供了前期试验依据.     

遵义地区汉族人群流行性出血热相关等位基因的分布

目的:从基因水平调查遵义地区汉族人群与流行性出血热(EHF)相关的人类白细胞抗原(HLA)-A*31、B*40、B*58、DRB1*16等位基因分布状况。方法:应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对遵义汉族200名健康个体进行HLA-A、B、DR位点基因分型,筛选出HLA-A*31、B*40、B*58、DRB1*16阳性标本,进一步做高分辨基因亚型分型,进而对遵义汉族人群的这几组等位基因与其他不同人群的分布情况做比较。结果:遵义地区汉族HLA-A*31、B*58、DRB1*16基因各检出1种亚型,HLA-B*40共检出4种等位基因亚型,其中B*4001、B*4002、B*4006为常见亚型,B*4063为罕见基因亚型。遵义汉族人群所检出的等位基因频率大部分与我国其他地区的相接近,而与日本人比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究获得了遵义汉族人群与EHF相关的HLA等位基因分布特征,为HLA与疾病相关性及本地区群体遗传学等方面的研究提供了重要依据。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测

目的检测重组人白细胞介素-10（recombinant human interleukiu-10,rhIL-10）作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分为6组：①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素（CsA）低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10＋CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组。移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射。术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平。结果①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组（P〈0.05）。CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组（P〈0.05）。②移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高（P〉0.05）,与抗体阳性对照比较有显著差异（P〈0.05）。结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性。     

TLR2 / 4 在MTB Hsp16.3 刺激小鼠巨噬细胞过程中表达及作用的初步探讨

目的:在体外细胞水平,初步探讨TLR2/4 在MTB Hsp16.3 刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞的表达及作用。方法:从BALB/ c 小鼠的胫腓骨中取骨髓细胞,与GM-CSF 共培养获得骨髓来源的M0 型巨噬细胞,流式检测F4/80 和CD11b 的表达并观察其形态;100 ng/ ml MTB Hsp16.3 刺激M0 巨噬细胞,分别培养0、12、24、36、48、72 h,Real-time PCR 检测不同时间点TLR2/4 的表达水平;利用RNAi 干扰技术沉默巨噬细胞表面的TLR2/4 受体,MTB Hsp16.3 刺激沉默TLR2/4 的M0 巨噬细胞,分别培养0、12、24、36、48、72 h,Real-time PCR 检测不同时间点TLR2/4 及Ym-1、Fizz1、IL-10 、TNF 、iNOS、TGF 细胞因子的表达水平。结果:M0 型巨噬细胞在MTB Hsp16.3 刺激后出现了较短的伪足,沉默TLR2/4 的M0 型巨噬细胞在MTBHsp16.3 刺激后出现了较长伪足;M0 巨噬细胞在MTB Hsp16.3 刺激后高表达TLR2/4。MTB Hsp16.3 刺激沉默TLR2/4 的M0型巨噬细胞,高表达M1 型巨噬细胞相关的细胞因子IL-6、TNF 、iNOS,低表达M2 型巨噬细胞相关的细胞因子IL-10、TGF 、Ym-1、Fizz1。结论:MTB Hsp16.3 通过TLR2/4 促进M0 型巨噬细胞向M2 型转化,抑制M1 型巨噬细胞,这可能参与了MTB 躲避巨噬细胞的吞噬过程。     

支架蛋白Gab2与肿瘤关系的研究进展

Gab2是Gabs家族蛋白中一种至关重要的信号中介分子,该家族蛋白通过接受多种生长因子、细胞因子及抗原等胞外刺激,参与信号转导的放大及整合。Gab2蛋白被蛋白酪氨酸激酶磷酸化激活后,招募富含SH2结构域的信号效应蛋白如SHP2、 PI3K的p85亚基、Crk和GC-GAP,主要介导SHP2/RAS/ERK和PI3K/AKT两条经典的信号通路,在多种生理学及病理学过程中发挥重要作用。近年研究发现,异常的Gab2及其信号与乳腺癌、白血病及黑色素瘤等其他人类肿瘤密切相关。本文就Gab2蛋白的结构、信号调控及在肿瘤中的研究进展进行综述。     

肾综合征出血热T细胞的免疫应答

肾综合征出血热是由汉坦病毒(HV)引起的、以鼠类为主要传染源的自然疫源性疾病.HV感染后机体存在着错综复杂的免疫应答,其中细胞免疫应答是主要的应答方式之一.因此,研究T细胞免疫应答对肾综合征出血热的预防、诊断、治疗以及发病机制的了解具有重要意义.此文就HV感染后T细胞应答和CTL表位预测的研究进展进行了综述.     

外周血树突细胞亚群与外周血单个核细胞在肺结核中的变化

目的通过对肺结核患者外周血树突细胞（DC）亚群数量和淋巴细胞（LC）、单核细胞（MO）的绝对值的观察,了解DC亚群和LC绝对值、MO绝对值在肺结核病情中的变化情况,以及三者的相关性,探讨DC亚群和LC、MO在肺结核发病机制中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术的三色分析法检测70例肺结核患者的DC1及DC2亚群。用全自动血细胞计数五分类法检测外周血LC、Mo的绝对值。结果①肺结核活动期患者外周血DC1/PBM（C外周血单个核细胞）、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数均明显低于健康正常者（P〈0.05）,DC1/DC2的比值明显高于健康正常者（P〈0.05）;非活动期患者DC1/PBMC、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数与健康正常者比较均无显著性差异（P〉0.05）,DC1/DC2的比值与健康正常者比较无显著性差异（P〉0.05）;活动期患者DC2的绝对数明显低于非活动期（P〈0.05）。②活动期与非活动期患者的LC绝对值明显低于健康正常者（P〈0.05）;活动期患者外周血的LC绝对值明显高于健康正常者（P〈0.05）;非活动期患者的MO绝对值与健康正常者比较无显著性差异（P〉0.05）。③肺结核活动期患者的DC1绝对数、DC2绝对数与LC、MO、之间作两两相关性分析,均未发现有相关性（P〉0.05）。结论肺结核患者外周血DC1和DC2数均明显降低、LC绝对值减少及MO绝对值增多。研究提示DC、LC、MO在肺结核的免疫发病机制中均发挥一定的作用,外周血树突细胞亚群（DC1、DC2）的检测可了解肺结核患者的免疫功能状态及反映病情变化,有助于阐明肺结核的免疫致病机理,同时也可为肺结核的生物防治提供新线索。     

肺结核患者血清sE-选择素的水平及临床意义

目的:探讨血清可溶性E-选择素(sE-selectin)在肺结核的变化及其临床意义。方法:应用双抗体夹心ELISA法分别检测40例未治疗及20例治疗2月后肺结核患者、20例健康正常人血清sE-选择素水平。结果:肺结核血清sE-选择素水平明显高于正常对照(P<0.01),其中血行播散型肺结核(Ⅱ型)组明显高于继发型肺结核(Ⅲ型)(P<0.01)。抗结核治疗2月后血清中的sE-选择素水平明显下降(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:研究表明血清sE-选择素作为重要的免疫分子可能参与肺结核发病及免疫机制,可作为肺结核患者病情判断及治疗预后的参考指标。