草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白在毕赤酵母中表达的初步研究

根据GeneBank中草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)104株VP6蛋白的全基因序列(HM234682)设计一对特异引物,以提取的GCRV-104核酸为模板,采用RT-PCR技术扩增VP6蛋白编码基因,并将其克隆到含强启动子AOXⅠ的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZB上。重组酵母质粒pPICZB-VP6经SacⅠ线性化,电击转化到毕赤酵母KM71菌株中,Zeocin抗性平板上筛选高拷贝转化子。阳性转化子在30℃,0.5%(V/V)的甲醇添加量的条件下,连续诱导3 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-Blotting检测,结果表明成功实现了GCRV-104 VP6蛋白在毕赤酵母中的胞内表达,重组VP6蛋白相对分子质量约46 000,与天然VP6蛋白相对分子质量接近,并且可与鼠抗草鱼GCRV-104 VP6蛋白的多克隆抗体特异性结合。     

一株产乙醇嗜热厌氧油藏微生物Thermoanaerobacter sp DF3的性质研究

[目的]了解油藏微生物Thermoanoerobacter sp DF3的生理生化特性,优化木糖产乙醇培养方案。[方法]利用厌氧分离技术从大港油田油层采出液中分离到一株产乙醇厌氧杆菌DF3。采用生理生化鉴定与16SrDNA序列的系统发育学分析其系统发育地位。用气相色谱分析其代谢产物。[结果]菌株DF3是一株严格厌氧的嗜热细菌,呈直杆状,G^-,菌体大小为O．42μm×（1．60～5．20）μm,单生、成对或成串生长,产顶端芽孢;生长温度为45～78℃（最适65℃）,能利用葡萄糖、木糖、果糖、核糖、甘露糖、阿拉伯糖、蔗糖、半乳糖、乳糖、纤维二糖、松三糖、棉子糖、淀粉等作为底物;其16SrRNA与zpseudoethanolicus相似性为99．7％。发酵葡萄糖与木糖的主要产物为乙醇,培养方案优化后其代谢木糖产乙醇终浓度为2．og／L。[结论]通过试验证明菌株DF3是目前已知菌株中产乙醇活性较强的茵株之一,在65℃时代谢木糖能产生2．Og／L的乙醇。目前代谢木糖高产乙醇的茵株均由国外分离获得,菌株DF3的分离获得为我国研究木质纤维素产乙醇提供了优良的出发菌株。     

杂色蛤在微冻保鲜过程中菌落总数的变化

[目的]研究不同保鲜方法处理后的微冻保鲜过程中杂色蛤的菌落总数变化,以探寻最佳的保鲜方法。[方法]以杂色蛤为研究对象,在-3℃微冻条件下采用生物保鲜剂、涂膜保鲜、气调保鲜等不同保鲜方法处理并进行比较。[结果]采用C、E、G组方法处理保鲜的杂色蛤,其菌落总数上升较少,保鲜效果较佳。[结论]复合生物保鲜剂、气调保鲜、涂膜保鲜法均具有抑菌作用,气调保鲜结合生物保鲜剂法、涂膜结合生物保鲜剂的法比单独使用生物保鲜剂的抑菌效果好。     

石家庄市耕层土壤有效磷含量及变化情况分析

2008年石家庄市耕层土壤养分调查表明,全区耕层土壤养分含量整体处于中等水平,耕层土壤有机质、全氮、碱解氮、有效磷含量均有所提高,速效钾含量呈下降趋势。磷肥的大量施用及秸秆还田大面积推广是有效磷上升的主要原因。     

大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp 的片段, 克隆到 pMD19-T载体上, 构建重组质粒 pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后, 以10倍梯度稀释 pMD19-T-MCP重组质粒, 作为标准模板进行 TaqMan实时荧光定量PCR扩增, 制作标准曲线, 建立了大鲵虹彩病毒的 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系, 且线性范围宽, 相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示, 该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性, 与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应, 特异性好, 检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数, 约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸, 较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强, 对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。     

苹果蠹蛾消长动态及果园中赤眼蜂释放技术的研究

[目的]明确果园中利用赤眼蜂防治苹果蠹蛾的田间释放技术.[方法]采用性诱剂诱捕法和寄主卵诱捕法,研究了苹果蠹蛾在阿拉尔地区的发生动态及人工繁殖赤眼蜂在果园生态环境中的自然扩散规律.[结果]苹果蠹蛾雄成虫在阿拉尔地区1年有4个发生高峰,有滞育现象,赤眼蜂在果园扩散距离可达16m,但在2-8m范围内赤眼蜂的寄生数量最多;随着放蜂次数的增加,其寄生率也在增加,但并非放蜂的次数越多越好.[结论]在该虫的防治策略上用苹果蠹蛾性诱芯捕杀雄蛾防治越冬代,化学防治重点在第一代幼虫;田间释放赤眼蜂重点在第二代,即7月下旬至8月上旬,放蜂2-3次,蜂卡间隔距离8m为宜.     

牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)不同的基因型在抗原性方面存在差异,使疫苗免疫难以收到预期效果。本试验对分离到的BVDV石河子株和其他石河子分离株进行基因型鉴定,通过对病毒的遗传分类研究,为该病的防治和开发新的基因工程疫苗提供一定依据。采用免疫学试验、电镜观察、理化特性测定以及PCR技术、同源性比较等方法分离、鉴定1株BVDV石河子分离株,命名为BVDV shz132株,并应用系统发生分析方法鉴定该株与其他石河子分离株Manasis、hihezi148和Letuyi株的基因型。将免疫学鉴定为阳性的样品进行病毒分离,电镜观察分离的BVDV shz132株病毒直径为40~60 nm,为有囊膜的球形颗粒。理化鉴定结果与参考株BVDV Oregon C24V一致。根据BVDV基因组5-′UTR基因设计引物在发病牛淋巴结、肠道分泌物制备的悬液及其分离的病毒细胞培养物中均扩增得到了大小为267 bp的片段。核苷酸同源性分析结果表明BVDV shz132株与BVDV Osloss株的同源性最高(97.5%),BVDV Manasi株等与BVDV NADL株的同源性最高(97.8%);系统发生分析表明上述所有石河子分离株均属于BVDV-Ⅰ型。     

通过嗅觉体验提高动物食欲和饲料忠诚度

<正>嗅觉是动物最原始的感觉,现代人类的嗅觉越来越差,但对于绝大多数动物来说,嗅觉仍是高度发达的感觉器官,是其生存必不可少的一部分。嗅觉可给动物预警,帮助动物寻找食物,从营养物中分辨出有毒食物等。嗅觉也参与繁殖(从交配到辨认自己的幼仔)。牛和猪都有非常敏感的     

犊牛代乳粉和开食料中添加牛安对控制球虫病的功效

本文进行了两项研究,进一步评估了用牛安（拉沙里菌素）控制球虫病对面临艾美尔球虫挑战的奶用犊牛健康和生产性能的影响,牛安添加方式如下：在代乳粉和开食料中同时添加牛安、仅在代乳粉或开食料中单独添加牛安。在第一项试验中,与不添加和仅在开食料中添加牛安相比,在代乳粉或在代乳粉和开食料中同时添加牛安可以：提高代乳粉和开食料的消耗量,提高体重,减少艾美尔球虫卵囊的排出,降低腹泻频率和严重性。当犊牛在早期（如2~3周龄）感染球虫时,由于其开食料的采食量较低,因此,可能不能提供有效控制球虫病所需的球虫药剂量。在第二项研究中,用牛安预防球虫病,可以防止由于感染球虫所致的采食量降低和体重下降,尤其是在代乳粉和开食料（颗粒料）中均添加牛安时更有效。在代乳粉（或鲜乳）中添加牛安,可以预防犊牛感染球虫,如果在开食料（颗粒料）中同时也添加牛安可以进一步保护犊牛。     

大肠杆菌ERIC-PCR分子分型方法的建立及其初步应用

为建立高效、敏感的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)的分子分型方法,该研究提取大肠杆菌基因组DNA,以此为模板建立和优化ERIC-PCR分型体系,并采用ERIC-PCR方法对62株大肠杆菌进行分子分型和遗传相似性统计分析。结果显示从提取的大肠杆菌基因组中能够扩增到2~8条DNA片段,且大部分片段在100 bp至2 000 bp之间。通过4因素3水平正交试验,建立了较为稳定的ERIC-PCR分型方法。利用ERIC-PCR方法可将62株菌分为20型,其中以A型为优势菌群。遗传相似性结果表明,各菌株之间遗传相似性有较大的变化,但部分菌株高度同源。聚类分析表明,ERIC-PCR的分辨率系数为0.937,具有较高的分辨能力。表明应用ERIC-PCR分型技术在分子水平上对大肠杆菌进行鉴别和分型,具有简便和分辨力高等优点,能够对病原进行溯源分析,在大肠杆菌的分子流行病学研究中具有广泛的应用前景。