选择标记可去除的植物高效表达载体的构建

在常用的植物组成型表达载体pBI121的选择标记基因NPTII两侧插入同向的lox位点并用多克隆位点(MCS)取代了GUS基因序列,构建了NPTII基因可被去除的和可插入目的基因的通用植物表达载体pBI121-lox-MCS。替换pBI121-lox-MCS中驱动目的基因表达的35S启动子,可构建成一系列具有其他表达特性的植物表达载体,如本文描述的韧皮部特异表达载体pBdENP-lox-MCS。为方便地筛选去除选择标记基因的转基因植物,还构建了绿色荧光蛋白(GFP)表达框与NPTII表达框连锁的pBI121-gfp-lox-MCS载体。上述植物表达载体可广泛应用于培育选择标记可去除的转基因植物。     

利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测

源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别 34bp的靶DNA序列loxP ,进行位点特异性的重组反应。为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性 ,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因 (gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中 ,然后将构建的原核表达载体pET30a Cre和pET2 3b loxGFP电击共转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选。通过直接观察转化子的绿色荧光 ,便可以显示Cre酶的体内重组活性 ,并进一步通过SDS PAGE分析、质粒酶切鉴定进行了验证。结果表明 :以gfp为报告基因、通过两种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进Cre loxP重组系统提供一种简便直观的检测方法     

水稻OsPLD3和OsPLD4基因及其启动子

磷脂酶D(Phospholipase D, PLD)是在植物组织中广泛存在的一类磷脂酶, 可催化磷脂如磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)水解产生磷脂酸(phosphatidic acid, PA)和一个自由的头部基团如胆碱(choline)。在植物体内PLD家族往往包括多个成员。利用反向遗传学技术对水稻磷脂酶D家族(OsPLD)中的两个成员OsPLD3和OsPLD4基因及其启动子的研究显示: OsPLD3和OsPLD4的启动子在花器官的不同部位中驱动报告基因不同程度地表达, 二者都受损伤和茉莉酸甲酯诱导, 但是对诱导因子反应的时空模式不同。利用转基因技术在水稻中过量表达OsPLD3和OsPLD4基因或是干扰OsPLD3和OsPLD4基因表达都不能引起可见的水稻表型的变化, 说明OsPLD家族不同成员可能有功能上的重复。     

水稻小G蛋白OsPra2基因的克隆及功能分析

利用micro array 技术对水稻幼苗在营养胁迫条件下根部基因表达的研究中发现: 一个与豌豆Pra2(小G蛋白)基因有同源性的基因的RNA水平在营养胁迫后再补充营养时, 表达量下降。用RT-PCR和PCR方法分别获得该基因的cDNA克隆—OsPra2和该基因翻译起始位点上游1 kb的启动子序列。OsPra2基因编码的蛋白质具有结合GTP/GDP的4个保守结构域和构成小G蛋白Rab家族的特有的结构域。该基因cDNA与GST蛋白基因融合表达载体在洋葱表皮细胞中的瞬间表达结果显示该蛋白定位在在细胞膜和细胞核上, OsPra2基因启动子与GUS报告基因融合表达转基因水稻显示该基因启动子驱动GUS在胚芽鞘和根中表达, 35S启动子驱动OsPra2基因过表达转基因水稻与野生水稻株型相比明显矮化, 类似BR缺陷型植物株型。本实验还对OsPra2和P450蛋白的相互作用及在BR代谢途径中的可能作用进行了分析。     

中国植物病毒研究40年

本文综述我国自20世纪70年代以来在植物病毒学领域的研究概况,较全面地介绍各个时间段具有代表性的研究成果,并对国内高水平的植物病毒学研究室及其研究领域进行了较详细的介绍。     

Recombination with coat protein transgene in a complementation system based on Cucumber mosaic virus (CMV)

In order to study the feasibility of Cucumber mosaic virus (CMV) as an expression vector, the full-length cDNA of RNA 3 from strain SD was cloned and the sequence around the start codon of the coat protein (CP) gene was modified to create an Nsi I site for insertion of foreign genes. The CP gene was replaced by the green fluorescent protein (GFP) gene. The cDNAs of Fny RNAs 1 and 2 and the chimeric SD RNA 3 were cloned between the modified 35S promoter and terminator. Tobacco protoplasts were transfected with a mixture of the viral cDNAs containing 35S promoter and terminator as a replacement vector and expressed GFP. A complementation system was established when the replacement vector was inoculated onto the transgenic tobacco plants expressing SD-CMV CP. GFP was detected in the inoculated leaves in 5 of 18 tested plants and in the first upper systemic leaf of one of the 5 plants ten days after inoculation. However, no GFP could be detected in all the plants one month after inoculation. Recombination be     

我国啤酒花根癌土壤杆菌的初步研究

1983—1984年,对北京、浙江、山东等地啤酒花种植地区的啤酒花冠瘿病发病情况进行了调查,并采集、分离到啤酒花根癌土壤杆菌16株。对其生物型、质粒类型、寄主范围和对土壤杆菌素8{(agrocin 84)的敏感性进行了测定。证明所测菌株都属于土壤杆菌生物I型菌,质粒类型为胭脂碱型(nopaline),具有较广的寄主范围,其中11株菌对土壤杆菌素8{敏感,5株菌不敏感。对1 0株菌的质粒进行了检测。在琼瞻糖凝胶电泳图上表明,所有菌株都含一个与pTiC58大小相同的质粒,此外,大多数菌株还含有l一3个隐蔽质柱。     

萝芙木的保育研究

萝芙木属(Rauvolfia Linn.)植物富含的单萜吲哚类生物碱在降压、抗心律失常、抗肿瘤等方面都有重要的药用价值.为缓解野生萝芙木资源濒危的状况,萝芙木的保育需要同时满足资源量和药用质量两种需求.对萝芙木保育的种子繁殖、扦插繁殖、组织培养、栽培管理、收获部位及药用质量评价进行了综述,着重梳理了建立萝芙木离体再生体系的最优组培条件和毛状根诱导及生产利血平等生物碱的研究进展,指出了目前萝芙木保育中存在的问题和未来的研究方向.     

高职生物制药技术拟企业化生产实训模式的构建

因行业特殊性,高职生物制药技术专业学生的生产实训很难在生产企业进行,为此尝试构建校内模拟生产的拟企业化生产实训模式,实现实训与生产的基本一致,有效提高学生的职业技能和职业素养,取得了显著的成效。该模式主要包括：组建具有生产管理和教学经验的教学团队;开发基于抗生素生产过程的“多粘菌素E生产实训”项目并编写相应的生产实训教材;组建高度仿真兼具科研和社会服务功能的开放式实训基地;构建企业化的生产组织和管理方式;创建分级考核制度的过程性考核评价体系。     

水稻OsPLD3和OsPLD4基因及其启动子

磷脂酶D(Phospholipase D, PLD)是在植物组织中广泛存在的一类磷脂酶, 可催化磷脂如磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)水解产生磷脂酸(phosphatidic acid, PA)和一个自由的头部基团如胆碱(choline)。在植物体内PLD家族往往包括多个成员。利用反向遗传学技术对水稻磷脂酶D家族(OsPLD)中的两个成员OsPLD3和OsPLD4基因及其启动子的研究显示: OsPLD3和OsPLD4的启动子在花器官的不同部位中驱动报告基因不同程度地表达, 二者都受损伤和茉莉酸甲酯诱导, 但是对诱导因子反应的时空模式不同。利用转基因技术在水稻中过量表达OsPLD3和OsPLD4基因或是干扰OsPLD3和OsPLD4基因表达都不能引起可见的水稻表型的变化, 说明OsPLD家族不同成员可能有功能上的重复。