流式细胞外周血刺激法检测Th1/Th2在复发性流产中变化探讨

目的:探讨流式细胞外周血刺激法检测Th1、Th2及Th1/Th2在复发性流产(RSA)中变化。方法:2012年1月—2018年5月本院就诊患者,妊娠前有复发性自然流产病史310例为RSA组,无自然流产病史220例为对照组;早孕有复发性流产史140例为早孕RSA组,正常早孕102例为早孕对照组;稽留流产患者19例。经过外周血PMA+Ion刺激后采用流式细胞技术检测Th1(CD4+/IFN-γ+)和Th2细胞(CD4+/IL-4+),计算Th1/Th2值。结果:非妊娠期,RSA组与对照组均处于Th1优势状态,未发生向Th2偏移,两组Th1/Th2值比较未见差异(P0.05);早孕RSA组与早孕对照组比较仍处于Th1优势状态,未发生向Th2偏移,两组Th1/Th2值比较未见差异(P0.05);稽留流产患者为Th1优势状态,未发生向Th2偏移。结论:复发性流产患者妊娠前后、稽留流产患者均处于Th1优势状态,均未发生Th1/Th2失衡。     

抗DEN-2基因核酶的克隆及其体外切割活性的研究

目的：探讨核酶抗登革病毒活性。方法：根据DEN－2基因结构的特点，按照锤头状核酶的结构模型和作用模式，设计，合成针对172－174GUC位点的核酶基因；定向插入质粒pGEM-3Zf( )的Sac I和Sal I位点之间；核酶基因克隆和DEN－2靶基因克隆分别进行体外转录，生成核酶的靶RNA，体外进行切割反应。结果：核酶与登革病毒靶序列体外产物电泳 见预期切割条带。结论：该核酶具有切割相应靶RNA的活性，可进一步用于细胞内核酶抗登革病毒的研究。     

广东省免费孕前优生健康检查地中海贫血基因检测结果分析

目的:分析近两年广东省免费孕前优生健康检查地中海贫血基因检测结果,为地中海贫血防控工作提供依据。方法:以广东省各县区参加免费孕前优生健康检查的新婚夫妇为研究对象,MCV≤82fl或(且)MCH≤27pg作为地中海贫血筛查阳性指标,夫妇双方筛查均为阳性时,需同时进行α及β地中海贫血基因检测。结果:16240例筛查阳性者中发现基因携带者12995例(80.0%)准确率为80.0%,部分县区90%。发现3382对夫妇有妊娠重型地中海贫血胎儿的可能,产前诊断的需求率为41.65%。结论:MCV联合MCH作为筛查地中海贫血阳性指标可靠,操作简单,便于在基层应用,但需加强实验室质量控制。     

广东省登革病毒的分子流行病学研究

目的 通过对广东省90年代以来流行的登革病毒分子流行病学研究,初步了解我国毒株的可能来源,方法 采用RT－PCR方法扩增广东省不同年份分离的登革病毒（DEN）1型和2型NS1部分基因片段,然后进行克隆测序,测序后的基因片段与国际上已知的多个DEN1和DEN2相应的序列进行比较,并以核苷酸的差异在6％以上作为基因亚型分型的标准。结果 ①广州1991年分离的DEN1（GD03／91）与潮洲995年分离的DEN1（GD23／95）同源性很高,为97％,属同一基因亚型,而两者与从潮洲997年分离的DEN1（GD14／97）同源性均为93％,分属不同的基因亚型。基因系统树分析提示：GD03／91和GD23／95可能来自东南亚或瑙鲁等地,GD14／97可能来自新加坡。②佛山19934昕分离的DEN2（GD06／93）和南海市1998年分离的DEN2（GD01／98）同源性为93％,分属不同的基因亚型。基因系统树分析提示：GD01／98与泰国流行株ThNH-P28/93株共享序列非常接近,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为100％,因此推测GD01／98可能来源于泰国。结论 广东省90年代以来流行的登革热来源于不同的传染源。     

广东地区不育男性精液质量与细菌感染关系的研究

目的 研究不育男性精液质量与细菌感染之间的相关性,为指导不育男性人群的生殖健康提供临床依据。方法 采集不育男性精液200例作为研究对象,然后进行分离培养48h,根据培养结果,分为无致病菌生长组、有致病菌生长组、无菌生长组,完成有致病菌生长组细菌耐药性分析,并进行各组间精液质量比较。结果 分离培养48h后,200例精液中无致病菌生长163例,占比81.5%,有致病菌生长33例,占比16.5%,无菌生长4例,占比2.0%;33例有致病菌培养结果前三位依次为大肠埃希菌、无乳链球菌和粪肠球菌,耐药率分别为80.0%、87.5%、100.0%。结论 不育男性精液中细菌培养检出率较高,且致病细菌会对精液质量产生影响。     

海南岛两株甲病毒基因组3′末端核苷酸序列的克隆与分析

目的　从分子水平鉴定海南省分离的两株甲病毒 (HBb17和M1病毒 )。方法　采用RT-PCR方法 ,分别扩增两株病毒基因组的 3′末端核苷酸序列 ,扩增产物经亚克隆 ,筛选重组子并测定核苷酸序列对序列进行分析。结果　HBb17和M1病毒分别扩增出约 1 6kb和 1 3kb的特异片段。序列分析表明 ,在 3′末端非翻译区HBb17病毒与罗斯河病毒 (国际标准株T48病毒 )核苷酸同源性为99 % ,M1病毒与鹭山病毒 (SAG)同源性为 98% ;两病毒结构基因的E1区序列 ,HBb17病毒与罗斯河病毒核苷酸 (氨基酸 )同源性为 99% (99% ) ,M1病毒与鹭山病毒核苷酸 (氨基酸 )同源性为 97% (99% ) ,M1病毒与盖塔病毒同源性为 94% (98% )。结论　序列分析表明 ,海南岛分离的HBb17病毒属于罗斯河病毒 ,M1病毒可能是鹭山病毒或盖塔病毒的变异株     

淋巴细胞主动免疫联合小剂量IVIG治疗URSA的初步探讨

目的:探讨淋巴细胞主动免疫联合静脉点滴小剂量免疫球蛋白治疗复发性流产的临床疗效。方法:经临床筛查确诊为不明原因复发性流产患者72例,分为观察组(47例,采用淋巴细胞主动免疫联合静脉点滴小剂量免疫球蛋白治疗)和对照组(25例,采用淋巴细胞主动免疫治疗),观察妊娠结局。结果:妊娠成功率观察组(89.36%)高于对照组(68.00%)(P<0.05)。结论:淋巴细胞主动免疫联合静脉点滴小剂量免疫球蛋白治疗复发性流产成功率较高,有较好的应用价值。     

mTLR2基因在CHO细胞中的表达

目的在CHO细胞中表达小鼠TLR2(mTLR2)。方法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,并将其转染到CHO细胞,用G418筛选阳性克隆。采用PCR方法,检测外源基因的整合。采用Westernblot、免疫组织化学对转染细胞的mTLR2表达进行鉴定。结果成功构建了pcDNA-mTLR2重组质粒。将其转染到CHO细胞,经G418筛选获得阳性细胞克隆。阳性细胞克隆经PCR检测表明TLR2基因得到稳定整合。Westernblot分析显示在分子量约95000处可见清晰的阳性反应条带。免疫组织化学检测显示转染细胞表达mTLR2。结论获得了表达mTLR2的细胞株,为进一步进行相关研究奠定了基础。     

mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。     

吗啡抗体对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断症状的影响

目的 :评价吗啡抗体对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断症状的影响。方法 :采用混合酸酐法制备琥珀酰吗啡 ,并分别与蓝载体 (BC ,bluecarrier)、KLH和BSA等 3种载体交联成酯 ;常规检测抗原性 ,并免疫小鼠 ,用ELISA法检测抗体滴度 ,纳洛酮催促戒断实验来评价 3种交联物对吗啡依赖性的影响。结果 :与 3种不同载体交联的吗啡酯在 5 μg·ml- 1 包板浓度时显示了良好的抗原性 ;用其免疫的 3组小白鼠的平均抗吗啡抗体滴度都超过 1∶16 0 0 0 ;对照组小鼠及BC组、KLH组、BSA组免疫小鼠在15min内跳跃次数依次为 :2 3 6 7±s 10 2 3次 ,0 88±s 1 36次 ,2 6 3±s 4 87次 ,10 0 0±s 5 71次 ,4组小鼠跳跃次数存在显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :与 3种载体交联的吗啡酯都能诱导产生高滴度的抗体 ,对吗啡诱导的成瘾性抑制作用有所不同 ,其中BC偶联的吗啡酯较其它两种载体 -吗啡酯交联获得更好的效果。