绿色荧光蛋白标记成人骨髓间充质干细胞的超微结构特征

背景:研究表明,绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞免疫学表型、细胞周期、分化潜能等均未发生明显改变。目的:进一步观察绿色荧光蛋白标记对骨髓间充质干细胞超微结构的影响。方法:分离培养成人骨髓间充质干细胞,抗CD34、抗CD105免疫细胞化学染色鉴定,选第3代细胞进行绿色荧光蛋白标记,超薄切片后用透射电镜观察细胞超微结构,以未经绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞为对照。结果与结论:骨髓间充质干细胞表达CD105,不表达CD34。绿色荧光蛋白标记后,骨髓间充质干细胞细胞质发出绿色荧光,绿色荧光主要集中于细胞核周围的胞浆内,远离细胞核的胞浆内荧光强度逐渐减弱。相对于未标记的骨髓间充质细胞,经绿色荧光蛋白标记后细胞粗面内质网、高尔基体等细胞器较多,而线粒体相对较少;另外,脂滴和空泡样结构也多一些。结果证实绿色荧光蛋白对骨髓间充质干细胞性状的影响较为局限,是一种较为理想的细胞标记示踪剂。     

绿色荧光蛋白标记成人骨髓间充质干细胞的超微结构特征

背景：研究表明,绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞免疫学表型、细胞周期、分化潜能等均未发生明显改变。 目的：进一步观察绿色荧光蛋白标记对骨髓间充质干细胞超微结构的影响。 方法：分离培养成人骨髓间充质干细胞,抗CD34、抗CD105免疫细胞化学染色鉴定,选第3代细胞进行绿色荧光蛋白标记,超薄切片后用透射电镜观察细胞超微结构,以未经绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞为对照。 结果与结论：骨髓间充质干细胞表达CD105,不表达CD34。绿色荧光蛋白标记后,骨髓间充质干细胞细胞质发出绿色荧光,绿色荧光主要集中于细胞核周围的胞浆内,远离细胞核的胞浆内荧光强度逐渐减弱。相对于未标记的骨髓间充质细胞,经绿色荧光蛋白标记后细胞粗面内质网、高尔基体等细胞器较多,而线粒体相对较少;另外,脂滴和“空泡”样结构也多一些。结果证实绿色荧光蛋白对骨髓间充质干细胞性状的影响较为局限,是一种较为理想的细胞标记示踪剂。     

骨髓干细胞动员对创伤失血犬免疫功能的调节作用

目的观察创伤失血犬自体骨髓干细胞动员后外周血干细胞、免疫细胞亚群和细胞因子含量动态变化,为干细胞治疗战创伤提供依据。方法健康比格犬10只,采用手术方法切除左侧肾后,经肾动脉放血至血压60mmHg并维持30min。实验组（n=5）皮下注射GM-CSF5μg/kg,隔日1次,连续3次,对照组（n=5）同步注射等量生理盐水,分别于0、2、4、6、8、10d采集外周血,计数白细胞总数、淋巴细胞和中性粒细胞比例,测定CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD56＋、CD34＋、CD133＋细胞比例和血清TNF-α、IL-1、IL-2含量。结果与0d比较,实验和对照犬在创伤失血后白细胞总数、中性粒细胞比例均逐渐升高,第4～6d达到高峰（P〈0.05）,然后逐渐下降,但实验组高于对照组（P〈0.05）;两组淋巴细胞的比例均下降（P〈0.05）,但实验组高于对照组（P〈0.05）;CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD56＋细胞的比例下降（P〈0.05）,到第4～6d达到最低（P〈0.05）,随后逐渐升高,至第10d时接近正常,其中实验组高于对照组（P〈0.05）;两组CD34＋、CD133＋细胞比例均逐渐升高,至第2～4d达到高峰（P〈0.05）,随后逐渐下降,但实验组在整个实验过程中均高于对照组（P〈0.05）;实验组血浆TNF-α、IL-1、IL-2的含量均逐渐升高,至第6d达到高峰（P〈0.05）,随后下降至第10d时接近正常。结论骨髓干细胞动员可提高创伤失血犬外周血免疫亚群细胞比例和细胞因子含量,提示具有保护创伤失血犬免疫功能的作用,但也有促进炎症反应的作用。     

干细胞移植治疗糖尿病肾病

背景：糖尿病肾病所致的终末期肾病已成为慢性肾功能衰竭的主要原因,传统的血液透析和肾脏移植已无法满足临床治疗的需求,以干细胞为基础的再生医学研究有可能为糖尿病肾病的治疗带来新的希望。 目的：综合分析不同来源干细胞治疗糖尿病肾病的机制及临床研究进展。 方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2006年1月至2011年8月关于干细胞治疗糖尿病肾病的文章,在标题和摘要中以“胚胎干细胞;骨髓间充质干细胞;诱导性多能干细胞;糖尿病肾病”或Embryonic stem cells; Bone marrow mesenchymal stem cells;induced poluripotent stem cells;induced multipotent stem cells; diabetic nephropathy”为检索词进行检索。最终选择26篇文章进行综述。 结果与结论：胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、诱导性多能干细胞均具有向肾脏组织细胞分化的潜能,大量研究表明干细胞移植对肾脏损伤和修复具有积极的作用。通过对干细胞相关特性的描述和相关机制的研究,干细胞移植有可能为糖尿病肾病提供一种新型的治疗方案。     

高压氧治疗新生鼠缺氧缺血性脑病的病理学观察

目的：运用病理学手段观察高压氧治疗新生鼠缺氧缺血性脑病（HIE）疗效。方法：7d龄SD大鼠40只,结扎左侧颈总动脉,建立HIE模型,分为2组,一组给高压氧连续7d治疗,另一组为HIE对照组。7d后处死动物,观察大脑改变。结果：高压氧治疗组（HOB组）与损伤对照组（HIE组）都具有（1）神经元细胞变性,坏死;脑充血,水肿;胶质细胞增生,胶质结节形成;透明血栓生成等基本病变。（2）软化、空洞及钙化等继发性改变。HIE组与HBO治疗组统计学处理结果提示其损伤程度无明显差异（P＞0．05）。结论：本组资料显示高压氧治疗新生鼠缺氧缺血性脑病无明显效果,在方法学及疗效上值得商榷。     

兔胫骨截骨延长区愈合过程的病理学观察

目的 :探讨截骨延长区骨愈合的病理学特点和新骨形成规律。方法 :取健康兔 2 7只建立胫骨骨延长动物模型 ,分别于延长的第 0、1、3、5、10、15、2 0、30、40天处死动物 ,在延长区取材进行病理组织学观察 ,同时用抗骨形成蛋白 (BMP)单抗作免疫组化染色。结果 :延长前即出现血肿 ,延长第 1天血肿机化 ,第 3天出现新的血肿 ,第 5天软骨形成和新血肿机化 ,第 15天出现膜内成骨、纤维性成骨和软骨内成骨 ,第 2 0天延长区大部分被骨性骨痂取代 ,第 30天开始改建。免疫组化染色显示延长区纤维母细胞、骨母细胞和软骨细胞均不同程度表达BMP。结论 :延长区存在膜内成骨、纤维性成骨和软骨内成骨 3种方式 ,以软骨内成骨为主 ;内源性BMP参与了延长区愈合过程。     

乳腺增生病p16蛋白表达及p16基因突变

目的　探讨p16基因在乳腺癌发生早期的作用。方法　用免疫组化方法检测 36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、14例导管内癌和 16例浸润性导管癌中p16蛋白的表达 ,用PCR SSCP和DNA测序技术检测上述组织中p16基因突变。结果　p16蛋白在单纯性增生、不典型增生、导管内癌、浸润癌中的表达缺失率分别为 0、16 .1%( 5 /31)、35 .7%( 5 /14 )、43.7%( 7/16 ) ,在 1例不典型增生、1例导管内癌、1例浸润性导管癌中检测p16基因突变。结论　p16蛋白表达缺失出现在乳腺癌发生的早期阶段 ,这种表达异常似乎与p16基因突变无明显关系。     

兔VX2肿瘤模型的建立及18F-FDG显像研究

,平均约1.8 cm×1.5 cm,CT密度均匀,CT值约30 HU,PET示放射性摄取明显增高,T/M值最高约为9.2.结论 本实验通过瘤细胞注射的方法成功建立了VX2肿瘤细胞荷瘤兔,并获得了40%的成瘤率,临床型PET-CT显像证实VX2肿瘤能够高摄取18F-FDG,为PET-CT在该肿瘤模型的进一步研究奠定了基础.     

过表达Jagged1促老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移

目的 探讨过表达Jagged1对老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力的影响.方法 PBS冲洗1～2月龄和19～ 26月龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,应用含10％ FBS的DMEM/F12培养基差速贴壁法进行体外培养,以Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染和vWF免疫组织化学染色进行鉴定.实验分为四组:对照组(未进行基因转染的老龄大鼠内皮祖细胞组)、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源内皮祖细胞组.荧光显微镜下计数GFP表达细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blot检测Jagged1 mRNA和蛋白表达;Transwell培养和MTT法分别检测细胞迁移和增殖能力.结果 免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测均显示转染后Jagged1显著增高,PIRES2-EGFP-Jagged1转染组mRNA和蛋白表达均较对照组显著增强(P＜0.01);与对照组相比,过表达Jagged1显著增强老龄大鼠来源内皮祖细胞迁移和增殖能力(P ＜0.05或P＜0.01).结论 过表达Jagged1增强老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力.     

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 N端片段的原核表达

目的 在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段.方法 应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性.结果 从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60 000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合.结论 获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件.