Duchenne型肌营养不良症病人中出现"返祖纤维"的免疫荧光和分子生物学研究

目的：探讨临床诊断为Duchenne型肌营养不良（Duchenne's muscular dystrophy,DMD)病人的免疫荧光检测中出现“返祖纤维”现象的可能机制。方法；对病人的肌肉组织行免疫荧光检查抗肌营养不良蛋白（dystrophin)抗体，并同时对病人DMD基因中的25个外显子进行检测。结果：21例病人中有5例出现“返祖纤维”现象，即在免疫荧光检测中有单个或一小簇肌纤维呈阳性反应，其余呈阴性表现，多重PCR检测该5例病人，其中3例有外显子缺失。结论：“返祖纤维”现象提示：病人的个别肌纤维可能存在完整的抗肌营养不良蛋白基因表达，其发病机制可能有别于传统意义上的DMD发病机制。“返祖纤维”现象可用来评估病人的预后，并为临床治疗提供一些新的思路。     

遗传性疾病基因诊断技术及进展

人类基因组计划（ＨＧＰ）的工作框架图已经完成，不久将完成全部图谱。结构基因组学研究目标的顺利进行标志着以揭示基因组功能及调控机制为目标的功能组学和以揭示人类基因与疾病的关联的疾病基因组学的研究已成为ＨＧＰ的新一轮计划。使已知的基因序列用于疾病的诊断和治疗是目前国内外许多实验室正在努力探索的课题，疾病的基因诊断有可能发展成２１世纪临床医学的一个重要分支。     

聚合酶链反应检测胃活检组织标本中的幽门螺杆菌

幽门螺杆菌是慢性Ｂ型胃炎的一个重要致病因素，并与消化性溃疡及胃癌的发生有密切关系。幽门螺杆菌在胃炎和消化性溃疡中的检出率达８０％～９０％。目前使用的检测、鉴定方法较多，常用的方法有组织学检测、细菌培养、尿素酶试验和１４Ｃ呼吸试验等。我们采用聚合酶链反...     

人类外周血T及B淋巴细胞用AET-SRBC玫瑰花法分离及鉴定

玫瑰花形成法通常被使用于分离T和B淋巴细胞。因为所形成的玫瑰花不稳定,我们用AET处理SRBC以增强SRBC和T淋巴细胞的结合能力,然后用密度梯度离心将T和B细胞分离。 由SRBC-AET所形成的玫瑰花和没有用AET处理的SRBC所形成的玫瑰花相比较具有形成率高,更加稳定和更好的重复性。 所回收细胞悬液中活细胞量用染料排除试验超过90％。T和B细胞纯度用免疫荧光试验来估价分别为80％和70％。因此,所得到的B细胞可以被用于HLA-DR分型。本文对国产AET和进口AET的效应也进行了比较。     

新型富集方法在结核分枝杆菌检测中的应用

结核病(tuberculosis)主要是由结核分枝杆菌感染引起的疾病,目前全球大约20亿人,即约占全球1/3的人口感染过结核分枝杆菌。每年与结核分枝杆菌感染有关的病例数超过880万例,而将近200万人死于此病。世界卫生组织专家预测如果未来病情不进一步加强控制,到2020年新发现的感染结核分枝杆菌的患者数可达10亿,死亡人数将达3 600万。及时诊断和治疗是防止结核病的有力措施,也是全球控制结核病的重要举措。     

用尼龙毛法组分淋巴细胞

本文报道用尼龙毛法分离T和B淋巴细胞。讨论了血小板的去除以及用涤纶纤维代替尼龙毛,用 Hanks液代替 199培基的使用。结果表明,用本法分离 T、B淋巴细胞是一种简易、快速、纯度较好、得率高、基本上不损害细胞的方法。     

丙型病毒性肝炎相关肝细胞肝癌的研究

丙型肝炎病毒(HCV)感染不仅是造成慢性肝病的主要原因,同时也是部分国家和地区肝细胞肝癌(HCC)的主要病因.HCV的结构特点和生命周期的规律使感染易转为慢性化,病毒通过其基因组编码的若干蛋白使肝细胞发生转化.在此过程中,肝脏反复发生的损伤和修复、肝纤维化和肝硬化是HCC发生过程中的几个关键阶段.反应性氧分子家族的作用和HCV感染造成肝细胞基因的遗传损伤可能是导致肝细胞癌变的重要机制.运用体外细胞转染方法和转基因动物模型研究HCV-HCC发病机制已取得一定进展,并将成为研究的主要手段.     

荧光原位杂交法快速检测粪便难辨梭菌

目的 建立量子点标记的荧光原位杂交方法以快速检测粪便中的难辨梭菌.方法 采用量子点-亲和素-生物素-DNA探针直接与粪便中难辨梭菌进行荧光原位杂交,同时与难辨梭菌分离培养、难辨梭菌毒素A、B检测结果比较.结果 20份临床腹泻粪便标本中,10份标本毒素检测结果阳性,此10份中有8份培养与原位杂交结果同时阳性;10份毒素检测结果阴性标本的培养与原位杂交结果均阴性;荧光原位杂交法与培养法的符合率为100%,毒素检测法具有更高的敏感度.结论 荧光原位杂交法检测难辨梭菌具有快速、简便、特异的特点,可用于临床粪便标本的检测.     

全自动血球计数仪的比对分析

目的:对Orpee mythic 22全自动血球计数仪进行比对分析,并作使用评价。方法:检测Orpee mythic 22全自动血球计数仪的携带污染率、精密度和线性范围,并与临床常用全自动血球计数仪A、B作相关性试验。结果:①空白试验白细胞(WBC)0.1×109/L、红细胞(RBC)0、血红蛋白(Hb)0、血小板(PLT)0;②携带污染率试验WBC 0,RBC0.40%、Hb 0.58%、PLT 1.71%;③精密度试验,批内精密度,WBC变异系数(CV)1.91%、RBC CV 1.00%、Hb CV 0.51%、PLT CV 3.25%,天间精密度WBC CV 2.79%、RBC CV 2.12%、Hb CV 1.87%、PLT CV 4.49%;④与全自动血球计数仪A相关性试验的相关系数R2分别为WBC 0.9959、RBC 0.9944、PLT 0.9799、Hb 0.9969,而与全自动血球计数仪B相关性试验的相关系数R2分别为,WBC 0.9958、RBC 0.9903、PLT 0.9813、Hb 0.9937;⑤线性范围,WBC R2=0.9968、RBC R2=1.0000、Hb R2=0.9993、PLT R2=0.9991。结论:Orpee mythic 22全自动血球计数仪分析性能良好,可满足临床需要。     

血清中TIGAR的ELISA建立及初步临床试验

目的建立肿瘤蛋白53（TP53）诱导的糖酵解和凋亡的调控子（TIGAR）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）,并探讨血清中TIGAR定量测定在肿瘤患者诊断中的临床应用。方法构建TIGAR原核表达载体并诱导蛋白表达,纯化蛋白后免疫家兔获得多克隆抗体,以此兔抗TIGAR多克隆抗体为包被抗体,以生物素-辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（SA-HRP）检测系统,建立TIGAR定量检测的双抗体夹心ELISA。测定40例肿瘤患者及40名对照者的血清TIGAR含量,并探讨其与肿瘤的关系。结果建立的TIGAR定量ELISA拟合曲线的相关系数（r）=0.99,肿瘤患者血清TIGAR含量高于对照组,差异有统计学意义（S=954.5,P〈0.01）。结论本研究成功建立了TIGAR定量ELISA,血清TIGAR含量测定对某些肿瘤的研究和临床检测可能有一定价值。