限制性内切酶酶切及限制性内切酶酶切图谱分析

限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能够识别DNA的特异序列并在识别位点剪切双链DNA的核酸内切酶。主要存在于原核生物中，大多数来自于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制一修饰体系，限制外源DNA、保护内源DNA。1970年Smith等分离到第一种限     

慢性肺源性心脏病失代偿期预后的评估

本文就40例慢性肺源性心脏病(简称肺心病)失代偿期患者(死亡组、存活组各20例)进行临床对比分析,结果发现其预后不良的因素为:①持续性发烧和(或)神志改变;②并发气胸;③持续性缺氧和(或)二氧化碳潴留;④上消化道出血;⑤多脏器损害;⑥难纠正的呼酸代酸或三重性酸硷失衡;⑦积极治疗两周以上无效。为降低慢性肺心病失代偿期住院病死率,我们建议:①改进给氧方法;②慎用肾毒性抗生素;③用制酸剂或甲氰咪胍,减少上消化道出血;④及时处理气胸等并发症;⑤监测血气及电解质。     

骨桥蛋白和P21在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的　探讨骨桥蛋白(OPN)和P2 1在原发性肝癌组织中的表达及它们在肝癌转移中的作用。方法　采用免疫组化S P法检测69例原发性肝癌组织中OPN和P2 1的表达情况。结果　①OPN和P2 1的阳性表达主要定位于癌细胞的细胞浆;OPN、P2 1在69例肝癌组织中阳性表达率分别为72 .5 % (5 0 / 69)和62 .3 % (4 3 / 69)。②在发生转移的肝癌组织中OPN和P2 1阳性表达率分别为84.2 % (3 2 / 3 8)和76.3 % (2 9/ 3 8) ,高于无转移的肝癌组织中OPN(5 8.1% ,18/ 3 1)和P2 1(4 5 .2 % ,14 / 3 1)阳性表达率,差异具有显著性,P <0 .0 5。③两者均阳性表达的3 5例肝癌中有2 4例(74.3 % )已发生转移,与两者均阴性表达的11例肝癌中仅有1例(9.1% )发生转移比较差异有显著性,P <0 .0 5 ,提示OPN和P2 1均阳性表达与肿瘤转移的发生密切相关。④OPN和P2 1的表达与肿瘤的大小、AFP水平、有无HBV感染、肿瘤分化、性别、年龄等因素无关,但与肿瘤侵袭转移的发生有关,P <0 .0 5。⑤OPN和P2 1的表达呈显著正相关(r =0 .2 5 7,P <0 .0 5 )。结论　OPN和P2 1的表达与肝癌侵袭转移的发生有密切关系,两者均阳性表达时对预测肝癌已发生转移具有指导意义。     

804细胞外间质对体外培养牛角膜内皮细胞增殖的影响

目的 研究细胞外间质对牛角膜内皮细胞增殖的影响。方法 以８０４Ｇ细胞外间质作为牛角膜内皮细胞培养的基础，用免疫荧光分析结合素α６的表达，并测定酸性磷酸酶活性分析牛角膜内皮细胞增殖。结果 生长于８０４Ｇ细胞外间质上的牛角膜内皮细胞结合素α６表达增加，酸性磷酸酶活性明显高于对照组。结论 ８０４Ｇ细胞外间质可促进体外培养的牛角膜内皮细胞增殖。     

804G细胞外间质对体外培养牛角膜内皮细胞增殖的影响

目的研究细胞外间质对牛角膜内皮细胞增殖的影响。方法以８０４Ｇ细胞外间质作为牛角膜内皮细胞培养的基础，用免疫荧光分析结合素α６的表达，并测定酸性磷酸酶活性分析牛角膜内皮细胞增殖。结果生长于８０４Ｇ细胞外间质上的牛角膜内皮细胞结合素α６表达增加，酸性磷酸酶活性明显高于对照组。结论８０４Ｇ细胞外间质可促进体外培养的牛角膜内皮细胞增殖     

多聚酶链反应-单链构象多态性分析基因点突变

单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)是一种简便、敏感有效的鉴定扩增DNA序列变化的技术.相同长度的单链DNA因其序列不同(甚至单个碱基不同),形成的构象相异,电泳时泳动速度不一.PCR产物经变性后进行单链DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳时,靶DNA中若有单个碱基替换等改变时,会出现泳动变位(mobility shift).PCR-SSCP的最主要优点是简单,在不同的系统中突变检出率达70%～95%以上,其主要不足可能是漏检一些突变.作者根据本实验室对多抑癌基因(tumor suppressor gene,TSG)p53突变的检测,介绍PCR-SSCP的实验过程.     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。     

侵袭性肺曲霉病的临床特点及其危险因素分析

目的探讨侵袭性肺曲霉病(IPA)的临床特点并分析其危险因素,为早期发现IPA提供临床依据。方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院在2014年8月至2017年8月出院诊断80例IPA患者(包括确诊20例)作为感染组,按1:1配对原则,选取同期同病区并有发热和/或伴呼吸道症状的非IPA患者80例作为对照组。比较两组的临床症状和体征、胸部CT表现、相关实验室检查结果和基础疾病,应用单因素、多因素条件Logistic回归分析,找出IPA感染发生的危险因素。结果两组均可出现发热、咳嗽和肺湿啰音等症状和体征,IPA患者胸部CT可有曲霉球、空洞、新月征和晕轮征等相对特异性表现,且易合并糖尿病和慢性阻塞性肺疾病。广谱抗生素应用、长期及大剂量糖皮质激素应用、低蛋白血症、免疫抑制剂应用、合并慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、多次住院、粒细胞缺乏是侵袭性肺曲霉病的危险因素(P0.05);多因素条件Logistic回归分析显示长期应用糖皮质激素、多次住院、合并慢性阻塞性肺疾病和粒细胞缺乏是IPA的独立危险因素(P0.05)。结论接受长期糖皮质激素治疗及多次住院、合并慢性阻塞性肺疾病、粒细胞缺乏患者是IPA感染的独立危险因素,应引起临床重视。     

DNA印迹试验

DNA印迹是一种将电泳分离的DNA片段转移到固相支持物上用探针与靶DNA进行杂交的技术,又称Southem杂交。利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组DNA,或经PCR获得扩增片段,经琼脂糖凝胶电泳,所得的DNA片段按分子大小分离,DNA片段经琼脂糖凝胶、变性,并将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上(多为硝酸纤维素膜,NC或尼龙膜),     

肺动脉粥样硬化兔肺动脉壁骨桥蛋白表达的变化

目的探讨肺动脉粥样硬化模型兔肺动脉壁骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法 24只新西兰兔,随机平均分为正常对照组和高脂模型组,分别给予基础饲料和高脂饲料(基础饲料+1%胆固醇+5%猪油)喂养12周后取血和肺动脉,分析血清中相关脂质成分的变化;HE染色观察肺动脉壁的形态结构;免疫组化法和Western blot检测肺动脉粥样硬化兔肺动脉壁OPN的表达。结果成功建立肺动脉粥样硬化兔模型,高脂模型组在高脂饮食12周后,与正常对照组比较,血清中甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)有明显增加(P<0.05),其中以LDL和LDL/HDL比值升高最明显;HE染色显示高脂模型组肺动脉内膜增厚,细胞间隙逐渐增大,泡沫细胞形成,可见明显的动脉粥样硬化斑块;免疫组化法和Western blot显示高脂模型组肺动脉壁OPN的表达较正常对照组显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食可导致肺动脉粥样硬化形成,OPN在肺动脉粥样硬化斑块形成中起重要的作用。