人源性抗-HBc单链噬菌体抗体库的构建

目的 构建人源性单链噬菌体抗体库，为筛选人源性抗—HBc单链抗体奠定基础。方法 利用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)和噬菌体表面展示技术，直接从乙肝病毒核心抗体(抗—HBc)阳性患者淋巴细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA；合成全套人抗体可变区引物扩增抗体可变区基因，并将重、轻链可变区基因进行拼接装配成单链抗体(ScFv)基因，重组于噬菌粒载体叶pHEN1，转化抑制型大肠埃希菌E.coliTG1，以辅助噬菌体援救后，构建成人源性单链噬菌体库。结果 成功地构建了人源性抗—HBc单链噬菌体库，库容量达10^6。结论 利用RT—PCR和噬菌体表面展示技术可以成功构建人源性单链抗体库，并达到建库标准，可进一步从中筛选人源性单链抗体。     

成纤维细胞激活蛋白与慢性肝脏病变

成纤维细胞激活蛋白（FAP）是存在于活化的成纤维细胞上的一种膜整合糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶家族,与二肽肽酶家族成员二肽基肽酶Ⅳ（DPPⅣ）具有52%的同源性,但同时具有二肽肽酶和胶原酶活性。研究发现FAP在肿瘤的生长、浸润、转移中发挥重要作用,并参与肝脏病变的发生和发展。     

两种肠道腺病毒基因型分型标本处理方法的比较

目的 通过对两种肠道腺病毒基因型分型方法进行比较,以寻找出简便快速的肠道腺病毒基因型分型方法.方法 采集114例非腹泻人群的粪便样本,方法一：在A549细胞中进行培养,提取病变细胞的DNA进行PCR扩增,然后克隆、测序,确定病毒基因型;方法二：直接提取粪便悬液过滤上清DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型.结果 114份样本中,两种方法均有12份样本检出腺病毒,阳性率为10.5%（12/114）.序列分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致.这12份样本分别属于人腺病毒5型（3份）、7型（2份）、12型（3份）及48型（4份）.结论 虽然两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式.PCR扩增,而无需如方法一中所进行的3次体外病毒分离实验,节省了实验的时间及成本,因此值得推荐.     

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎过程中乙型肝炎病毒基因型变化情况分析

目的研究阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)治疗慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)过程中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型变化情况。方法选取16例应用ADV治疗的CHB患者作为研究对象,用一片段PCR法扩增了用药前(baseline,BL)、用药后第28周、52周、92周时的HBV全基因组,克隆后进行全基因组序列测定及基因型分型。结果16例CHB患者治疗开始时(baseline,BL)的HBV基因型分布为:B型9例,C型7例,未发现A、D、E、F基因型。但有5例患者在接受ADV治疗后的28周、52周、92周,基因型发生了变化即从B型变为C型,或从C型变为B型。结论本研究发现,在ADV治疗CHB过程中,31.25%患者体内的HBV基因型发生了变化。这种变化产生的原因及其生物学意义,有待于进一步研究。     

TT病毒在健康人群和肝病患者中检出的意义

目的 了解新型肝炎病毒-TT病毒的致病性和在健康人群和肝病患中的流行情况。方法 收集180份健康体检患血清和156份不同类型肝病患血清，采用PCR方法检侧TT病毒的DNA。同时检测HAV，HBV，HCV、HEV和HGV感染标志．比较分析TT病毒在健康人群和不同类型肝病患中流行情况及其致病性。结果 健康体检人群和肝病患中，TTV DNA检出率分别为2．2%和4．5％，两组之间无显性差异(P>O.05)，体检人群中，ALT正常和升高的检出率分别为l.7％和12.5%。急性肝炎，慢性肝炎和肝硬化的检出率分别为4．8％，4．3%和和4．7%，ll例阳性患中，3例A1，T正常，8例ALT异常。在8例ALT异常患中，6例为HBV现行感染，1例为HCV现行感染，仅1例为NA-G肝炎患。结论在中国健康体检人群和肝病患中能检出低水平的TT病毒现行感染。但似乎仅引起个别患的转氮酶轻度升高。TT病毒的致病性可能较弱或需要其他因素协同致病。     

拉米呋啶联合山豆根注射液对慢性重度乙型肝炎患者抗病毒的疗效观察

乙型病毒性肝炎是一种常见传染病 ,慢性乙型肝炎发病机制尚未完全阐明 ,目前认为乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)的复制表达状态和机体特殊的免疫应答状态是两个主要因素( 1) 。慢性重度乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发生可能与ＨＢＶ的大量复制及免疫应答损害加重有关。因此 ,抑制ＨＢＶ     

广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分子流行病学研究

目的研究广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分布特点。方法采集73例成人、41例儿童共114例非腹泻人群的粪便样本，进行体外细胞感染实验，同时提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增，对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果114份样本中，共有12份样本检出腺病毒，阳性率为10．5％（12／114）。其中儿童组阳性率为14．6％（6／41），成人组阳性率为8．2％（6／71），两组间比较差异显著有统计学意义（P〈0．05）。经序列分析显示，12份样本分别属于人腺病毒5型（3份）、7型（2份）、12型（3份）72-48型（4份）。成人的人腺病毒型别为5型、7型、及48型，婴幼儿的人腺病毒型别为12型、48型。结论广州地区人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在，其中12型及48型为首次发现，并且12型仅在婴幼儿中发现。此外，文献报道人腺病毒48型为罕见血清型，但其占本研究中阳性样本的33％，其在我国是否属于罕见，需要慎重对待。     

乙肝表面抗原及抗体同时阳性的感染者调查分析

我国是乙型肝炎的高发区 ,人群中乙型肝炎表面抗原(ＨＢｓＡｇ)的携带率约 10 %。在其感染者中 ,有一部分患者血清呈ＨＢｓＡｇ与抗 -ＨＢｓ的同时阳性〔1〕。我们对此进行了调查研究。现报道如下。1　材料与方法1 1　调查对象　对 1998年 9月～ 1999年 7月在中山医科大学附属第三医院传染科就诊患者进行筛检 ,对确诊ＨＢＶ感染者再用Ａｂｂｏｔｔ试剂进行复检。1 2　诊断标准　按 1995年全国传染病与寄生虫病学术会议制订的《病毒性肝炎防治方案》 ,部分病例为病理诊断。1 3　ＨＢＶＭ检测　采用美国Ａｂｂｏｔｔ公司生产的ＩＭｘ 自动免疫…     

磷酸钙法与脂质体法转染HBV全基因组的比较

目的比较磷酸钙法和脂质体法转染全长HBV基因组的效率及对HBsAg和HBeAg表达的影响。采用真核细胞报告基因SEAP与HBVDNA共转染人肝癌细胞系HepG2。方法分别将带有分泌性碱性磷酸酶（SEAP）报告基因的质粒、表达绿色荧光蛋白的PCI—EFGP质粒与HBVDNA共转染HepG2细胞。培养后48h计数表达绿色荧光蛋白的细胞，收取细胞培养上清，用ELISA法测定SEAP活性，IMX法检测HBV表面抗原和e抗原水平。结果脂质体法转染HBV全基因组的效率明显高于磷酸钙转染法，转染后48h的细胞上清表面抗原和e抗原的表达也明显高于后者。结论脂质体转染法转染HBV的效率较磷酸钙转染法高，抗原表达水平高，是体外研究HBV的较理想方法。     

HVB DNA定量检测与HBV五项标志的关系及临床意义

目的了解HBsAg与抗-HBs同时阳性者临床类型、血清学标志与HBVDNA量之间的关系。方法对26例HBsAg与抗-HBs同时阳性者应用Amplisensor法测定血清HBVDNA量。结果慢性肝炎、重型肝炎和肝硬变者HBVDVA分别为:109.17±1.60、109.44±1.98和108.14±2.27（copyL-1）;HBeAg（＋）、抗-HBe（＋）和两者都（－）组HBVDNA分别是：1010.31±0.71、108.34±2.20和108.16±1.49（copy·L-1）;HBsAg（S／N）值≤100和＞100者HBVDNA分别是：108.26±1.85和1010.31±0.93（copy·L－1）;抗-HBs值≤10和＞10（IU·L1-）者分别为：109.07±1085和109.20±1.91（copy·L-1）结论不同临床类型其病毒含量差异无显著性;HBsAg、HBeAg（S／N）值与病毒量呈正相关,而抗-HBs值与病毒含量无相关性。