NSPc1-siRNA重组慢病毒的构建及其对U87细胞NSPc1基因的沉默效应

【目的】构建包装NSPc1-si RNA慢病毒颗粒,并在U87胶质瘤细胞中鉴定其感染及基因沉默效果。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备合成GV118-si RNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装载体质粒通过Lipofectamine TM2 000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒颗粒在目的细胞U87胶质瘤细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR（RT-PCR）和Western blotting方法检测NSPc1 si RNA慢病毒对U87中NSPc1的干扰作用。【结果】成功构建NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,重组病毒滴度为4×10^8TU/ml;用该病毒体外感染U87胶质瘤细胞,当感染复数（MOI）为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blotting方法检测NSPc1基因沉默的效率分别为66.4%、60.0%。【结论】成功构建了NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,该重组病毒包装后在体外感染U87胶质瘤细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。     

内镜下射频消融术治疗功能性烧心患者的临床疗效研究

目的 探讨内镜下射频消融术治疗功能性烧心(FH)患者的临床疗效.方法 回顾性分析2017-2019年三台县人民医院收治的41例FH患者相关临床资料,其中采用莫沙比利联合奥美拉唑治疗的为对照组(n=20),采用内镜下射频消融术联合莫沙比利、奥美拉唑治疗的为观察组(n=21),所有患者均出院后随访12个月.比较两组患者烧心、胸痛症状评分,高分辨率食管测压结果,24 h食管阻抗-pH监测结果.结果 治疗后随访12个月,观察组患者烧心、胸痛症状评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者远端收缩积分、食管下括约肌静息压高于对照组,而收缩前沿速度、食团内部压力低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者总反流次数、酸反流次数、弱酸反流次数、非酸反流次数均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者出现1例消化道少量出血.结论 针对FH患者,内镜下射频消融术可改善食管下括约肌的松弛,降低反流频次,改善患者临床症状.     

1例误服体温表内水银患者的护理

1 临床资料与护理 患者,男性,69岁,因车祸致腰部疼痛1h入院.入院诊断:腰1压缩性骨折.患者入院时神志清楚,否认毒物接触史,否认高血压、糖尿病等家族性遗传病史.入院后予平卧硬板床、补液消肿治疗.患者18:00腋下体温38.8℃,予降温治疗后于19:25复测体温时,患者自行将体温表由腋下移至口中测量,并在家属为其洗脸时不慎咬断体温表,误将体温表前端玻璃头连同水银吞下.值班人员立即予催吐,催吐无效,予清水漱口后口服鸡蛋清75mL、牛奶300 mL,并予炒韭菜250 g口服,番泻叶10 g冲服.同时氧气吸入3 L/min,监测生命体征,协助轴性翻身1h/次,并予以心理安慰.患者于次日15:00解大便1次,送检粪常规结果示正常,隐血试验阴性.18:00第2次排便排出体温表头端玻璃小段.     

阴沟肠杆菌肺炎的临床特点及药敏分析

目的：分析和总结阴沟肠杆菌肺炎的临床特点和其对抗菌药物的敏感性的分布情况。方法对51例阴沟肠杆菌肺炎的临床资料进行统计分析,测定该菌的药物敏感性。结果阴沟肠杆菌肺炎多见于65岁以上老年患者（76.47%）,其中多存在于低蛋白血症患者（60.78%）和患有基础疾病患者,如慢性阻塞性肺病（21.57%）、脑血管意外（27.45%）和糖尿病（33.33%）等。临床科室主要分布于老年科13例、外科7例和呼吸科6例,临床表现主要为咳嗽、咳痰51例（100%）。胸部X线均呈现程度不等的肺部浸润阴影。药敏检测表明,哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、帕尼培南、亚胺培南/西司他丁、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素比较敏感外（100%～66.67%）,该菌广泛耐药。结论阴沟肠杆菌肺炎好发于老年、有基础疾病及免疫功能低下者,及早进行细菌药敏检测和选择可能敏感的抗菌药物可改善预后。     

穴位埋线治疗不同证型单纯性肥胖疗效观察

目的观察穴位埋线对不同辨证分型的单纯性肥胖患者疗效的影响。方法随机选择近3年来在门诊就诊的不同辨证分型的单纯性肥胖患者120例,采用穴位埋线治疗并观察不同辨证分型的单纯性肥胖患者穴位埋线前后的体重、肥胖度、体重指数以及血脂的变化和疗效。结果各型患者穴位埋线治疗后每疗程各个肥胖指标与治疗前相比均明显下降(P0.05)。其中脾虚湿阻型总有效率为86.7%,显效率为50.0%,均高于其他各型(P0.05)。结论穴位埋线治疗各种证型单纯性肥胖均有良好疗效,对脾虚湿阻型单纯性肥胖疗效最佳。     

喀什地区维族妇女乳腺癌转移复发风险初步探讨

目的：探讨新疆喀什地区维吾尔族妇女乳腺癌复发转移风险,为临床术后的综合治疗方案和预后评估提供可靠的依据。方法：收集本院2009～2010年行手术切除的维吾尔族妇女乳腺癌患者72例,采用免疫组化En-Vision法检测乳腺癌组织中ER、PR、HER2、CK5/6、Ki-67、E-cad,做出6项复发转移风险评估的基因表达谱分类。结果：72例患者中40岁以上年龄患者56例,占77.78%;浸润性导管癌64例,占88.89%,Ⅱ～Ⅲ级以上高级别者占78%;肿瘤大小：T2以上者61例,占85%;查到脉管浸润65例,占90.3%;有淋巴结转移者52例,占72%;激素受体阳性49例,占76.6%,HER2阳性3＋患者13例,占20.3%（13/64）。结论：喀什地区维族妇女乳腺癌有较高的复发风险,激素受体阳性占77.6%,提示本地维族妇女乳腺癌大部分适用于内分泌治疗。     

干细胞调控因子神经系统多梳蛋白1的全基因组范围结合靶点分析

背景:在胚胎发育早期神经系统高表达的多梳蛋白家族成员神经系统多梳蛋白1具有明确转录抑制作用。最近研究表明,神经系统多梳蛋白1可能是一个有别于同源基因Bmi1的新的神经干细胞调控因子。目的:检测体外神经细胞分化模型小鼠畸胎瘤P19细胞中神经发育相关表观遗传调控因子神经系统多梳蛋白1在基因组上的结合靶点。方法:扩增未分化状态的小鼠畸胎瘤P19细胞系(内源性高表达神经系统多梳蛋白1基因),使用兔源抗神经系统多梳蛋白1多克隆抗体进行P19细胞的染色质免疫沉淀实验,并结合采用高通量芯片检测技术(ChIP-on-chip)检测捕获靶基因序列,最后利用生物信息学在线软件分析神经系统多梳蛋白1结合靶点临近基因功能的分类特点。结果与结论:筛选出约1280个神经系统多梳蛋白1结合靶点,靶点临近或所在基因的功能主要与分化、发育、转录及其调节、神经发生等密切相关。提示全基因组结合靶点分析可有效揭示神经系统多梳蛋白1基因在体外神经干细胞分化模型P19细胞中结合并可能参与调控的靶基因谱的分布特点,有利于下一步深入开展干细胞调控相关因子神经系统多梳蛋白1的下游信号通路研究。     

直接测汞仪测定尿中的汞

[目的]建立尿中汞含量的直接测定方法。[方法]采用DMA80直接测汞仪测定尿中汞含量并与冷原子吸收法进行比较。[结果]该方法的线性范围为2．00～40．00μg／L,线性方程夕=0．019x＋0．006,r=0．9995,检出限为0．05ng,精密度试验相对标准偏差为2．2％～8．7％,加标回收率范围为97．5％～102．6％。[结论]该法与冷原子吸收分光光度法测定尿中汞含量结果相比较,差异无统计学意义。     

NSPc1是维持HeLa细胞正常增殖的必要因子

目的 研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法 运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响。结果 （1）设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;（2）瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;（3）成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢;结论 NSPc1的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。     

去甲氯胺酮单克隆抗体制备及鉴定

近年来,氯胺酮(ketamine,KET)在中国青少年中滥用呈快速上升趋势[1].目前,KET及其代谢物的分析检测主要依赖仪器联用技术,有关KET的免疫学检测方法也有报道[2-3].