选育甘草乌新Ⅰ号的生理特性和基因多态性研究

目的 对从野生甘草中选育出的新品种甘草(乌新Ⅰ号)进行种质评价。方法 观察了其发芽率、可溶性蛋白量和过氧化物酶活性,并与对照组进行了基因组多态性比较。结果 乌新Ⅰ号可溶性蛋白量产生了变化,过氧化物酶活性显示乌新Ⅰ号具有较高活性。通过分子标记简单序列重复技术(ISSR)进行多态性分析,在所使用的22条随机引物中,6条随机引物产生了不同DNA条带,表明乌新Ⅰ号甘草与对照组相比产生了基因多态性变化。结论 这些变化表明乌新Ⅰ号是一个具有前景的品种并且能在将来广泛应用。     

常春藤皂苷元生物合成解析及酵母细胞工厂的构建

常春藤皂苷元为威灵仙等药用植物的有效成分,在抗肿瘤、抗炎、抗抑郁、保肝、抑菌等方面有较好的药理活性。为获得高效生产常春藤皂苷元的酿酒酵母细胞工厂,该研究首先利用即插即用生物合成途径解析平台,在蔷薇科植物苹果Malus×domestica中成功筛选获得能催化齐墩果酸C-23位氧化的P450氧化酶基因Md MA02,其氨基酸同源性仅为已知活性的CYP72A68v2基因的32%。工程菌BY-OA-Md MA02经高密度发酵优化,其生产常春藤皂苷元产量能达到101 mg·L~(-1),是摇瓶发酵的337倍。该研究为推动齐墩果烷型五环三萜生物合成途径解析及常春藤皂苷元高效细胞工厂的创建提供了基础。     

用静息细胞培养法研究影响组织型纤溶酶原激活剂生物合成的因素

建立了基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)的静息细胞培养系统。确定静息细胞培养基的成分为：葡萄糖1．0g／L，尿素1．0g／L，K2HPO41．0g／L；静息细胞培养的条件为：选择发酵30h的菌体，10％的接种量，pH5．4，150r／min，28℃静息培养12h。并在该静息细胞培养系统中，研究了糖类、有机酸、氨基酸和金属离子等因素对里氏木霉306生物合成组织型纤溶酶原激活剂的影响。     

中国根霉12#产生的抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式

枯草芽孢杆菌等芽孢杆菌属的细菌是食品发酵工业中常见的污染菌。中国根霉12#可产生一种对芽孢杆菌属有强烈抗菌作用的抗生物质。本文利用抗生物质溶液浓度梯度培养法和透射电镜观察法研究了该抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式。抗生物质溶液浓度梯度培养法的结果表明，当抗生物质的浓度达9000U／ml时，枯草芽孢杆菌的延滞期无限变长。透射电镜的观察结果表明该抗生物质主要作用于细胞壁，使细胞内容物溢出。由此可知。该抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式为溶菌。     

结核分枝杆菌泛酸激酶的克隆表达及酶学性质

目的:获得具有生物学活性的结核分枝杆菌(Mtb)重组泛酸激酶蛋白. 方法:以结核分枝杆菌模式菌株H37Rv基因组为模板,扩增泛酸激酶基因CoaA(Rv1092c),克隆入原核表达载体pET28a中,重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达. 在优化后的诱导条件(20℃,10 h,0.5 mmol/L IPTG)下,收集细菌进行超声破碎,低温高速离心,得到的上清液经镍离子螯合型亲和层析柱纯化重组蛋白. 高效液相色谱及质谱鉴定重组蛋白. 采用酶联法测定重组蛋白的酶学性质. 结果:得到了高表达、高纯度的重组结核分枝杆菌的泛酸激酶,酶催化过程中对泛酸的kcat和Km值分别为273.81 kat/L, 35.27 μmol/L;对ATP的kcat和Km值分别为169.10 kat/L, 94.43 μmol/L. 重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得Mr约为39 168. 在5 mmol/L Tris-HCl缓冲液,pH值7.5,25℃条件下,重组CoaA的二级结构中有39.3% α螺旋,13.7% β折叠,14.3% β转角,32.5%无规则卷曲. 结论:成功克隆表达结核分枝杆菌泛酸激酶,酶学性质和二级结构鉴定表明重组泛酸激酶折叠正确,且具有生物学活性,为基于该酶筛选新型抗结核药物奠定了基础.     

结核分枝杆菌耐药株和敏感株菌体碱性蛋白的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐多药菌株与敏感菌株菌体碱性蛋白的蛋白质表达差异。方法运用双向电泳技术（2-DE）比较8株耐多药菌株与9株敏感菌株的菌体碱性蛋白表达图谱差异，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸一电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF-MS）进行质谱分析，将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果比较发现重复性较好的差异蛋白质斑点10个，获得5个明确的肽质量指纹谱，鉴定5个蛋白分别为：NADH-CoQ氧化还原酶B链（NuoB，Rv3146）、乙酰羟酸合成酶小亚基（HvN，Rv3002c）以及3个假定蛋白，分别由Rv2159c、Rv0068、Rv0992编码。结论上述蛋白的鉴定在深入研究结核分枝杆菌耐药形成机制，筛选具有潜在价值的结核药物靶位和耐多药结核病诊断的分子标志物方面具有参考价值。     

太空环境对甘草生理生化的影响

目的:探讨太空环境对甘草生理生化诱变作用分析.方法:利用返回式卫星搭载甘草,18 d后返回地球(飞行回收舱平均辐射剂量为0.102 m·d~(-1),飞行远地点距地球350 km,重力为1×10~(-6)m·s~(-2)),搭载种子返回地面后与对照组同时种植于实验田中,对太空搭载后甘草的过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD)的活性,甘草的蛋白含量以及蛋白电泳进行了考察.结果:甘草经过卫星搭载后,甘草CAT,SOD酶活性均有不同程度提高,差异明显(P<0.05),而且鄂托克前旗比杭锦旗酶活性均高.甘草经过卫星搭载后,甘草蛋白含量有一定程度提高,差异明显(P<0.05),同时甘草蛋白电泳也产生了差异,产生了微弱的新的条带.结论:太空环境对甘草蛋白类产生一定影响,这些变化对于后期选育甘草优良种质奠定基础.     

选育甘草乌新Ⅰ号的生理特性和基因多态性研究

目的对从野生甘草中选育出的新品种甘草(乌新Ⅰ号)进行种质评价。方法观察了其发芽率、可溶性蛋白量和过氧化物酶活性,并与对照组进行了基因组多态性比较。结果乌新Ⅰ号可溶性蛋白量产生了变化,过氧化物酶活性显示乌新Ⅰ号具有较高活性。通过分子标记简单序列重复技术(ISSR)进行多态性分析,在所使用的22条随机引物中,6条随机引物产生了不同DNA条带,表明乌新Ⅰ号甘草与对照组相比产生了基因多态性变化。结论这些变化表明乌新Ⅰ号是一个具有前景的品种并且能在将来广泛应用。     

四环素生产菌诱变育种与发酵性能的研究

采用紫外线对四环素生产菌金色链霉菌４－２８的原生质体进行诱变处理,选是到一株高产突变株Ｈ３２－３７。该菌在形态上与出发菌株存在明显差异;菌落小,呈图形或梅花形,表面粗糙,孢子丰富,孢子颜色深,四环素生产能力比出发菌株提高２３．９％,研究了其发酵性能,优化了培养基组成和发酵工艺条件,使四环素效价提高了４４．４％。     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.