microRNA在肺癌诊断、治疗及预后判断中的作用

肺癌是全世界因肿瘤导致死亡的最主要原因。尽管肺癌发生的分子网络在蛋白和基因水平上已经部分得到阐明,但是其高死亡率仍没有明显改善。微小RNAs(miRNAs)是一大类小的内源性非编码RNAs,通过与靶mRNA3’端非翻译区部分互补配对,在翻译后水平调节靶基因的表达。miRNAs在肺脏的发育过程中发挥多种作用,其异常表达可能导致肺癌的发生。肺癌中miRNAs的异常表达模式,以及miRNAs在血清中的稳定存在,都使miRNAs有望成为新型的临床生物标记物用于肺癌的诊断和预后。miRNAs还可以直接作为原癌基因或抑癌基因在肺癌发生和发展过程中起重要作用,调节具有致癌或抑癌功能的miRNAs可能成为肺癌治疗的新方法。该文就miRNAs在肺癌诊断、预后和治疗中的作用进行综述。     

支气管结核经支气管镜冷冻治疗疗效及对免疫功能的影响

目的 观察支气管镜冷冻治疗支气管结核的临床疗效及对免疫功能的影响。方法 选取经支气管镜检查确诊为肉芽增殖型支气管结核的83例患者,采用在2HR（L₂）ZE（S）/10HR（L₂）E全身抗结核和异烟肼注射液雾化吸入治疗的基础上,加用支气管镜冷冻治疗,观察治疗前后的支气管镜下改变情况、临床症状及T淋巴细胞亚群变化情况。结果 经支气管镜冷冻治疗后,显效率73.4%（61/83）,有效率26.6%（22/83）,总有效率为100%;气促分级显示治疗后患者气促症状较前明显好转（P<0.01）;发热时间、咳嗽、咳痰时间以及全身乏力消失时间较对照组明显减少（P<0.01）;治疗后发现观察组CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺水平均明显高于治疗前和治疗后的对照组,而CD8⁺水平均明显低于治疗前和治疗后的对照组。结论 经支气管镜冷冻治疗支气管结核患者疗效确切,不良反应少,安全性高。     

细粒棘球蚴原头节β_4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析

目的对细粒棘球蚴原头节的β4微管蛋白(EgTub4)基因进行生物信息学预测和分析,并探索该基因在大肠埃希菌中可溶性表达的最佳诱导条件,纯化目标蛋白。方法采用ProtParam、SMART、Predictprotein和Swiss-model软件分析EgTub4蛋白的理化性质和结构,采用SignalP4.1软件进行信号肽预测。提取细粒棘球蚴原头节的总RNA,并反转录成cDNA,PCR扩增EgTub4基因,构建原核重组表达载体pET28aEgTub4、pET30a-EgTub4和pET32a-EgTub4,进行酶切鉴定,并测序。探索重组蛋白rEgTub4可溶性表达的最佳诱导条件[表达载体、诱导温度(T)、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间(t)和培养基类型]。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Westernblotting)。结果经生物信息学分析预测EgTub4蛋白理论等电点(pI)值为4.79,理论相对分子质量(M_r)为49700;EgTub4不含信号肽,含有3个结构域,分别为微管蛋白GTPase结构域、C末端结构域和卷曲螺旋区。成功构建了重组质粒pET28a-EgTub4、pET30a-EgTub4和pET32a-EgTub4,经双酶切后,均可得到与目的基因相对分子质量相符的片段,测序正确。经Westernblotting分析,在表达质粒pET28a(+)、pET30a(+)和pET32a(+)中重组蛋白分别为M_r56000、60000、68000。EgTub4基因在pET28a(+)中表达时不可溶,主要以包涵体形式存在,需要在变性条件下进行纯化。而在pET30a(+)和pET32a(+)中表达时均部分可溶,可以在非变性条件下进行纯化。综合考虑,本研究最终选择pET30a(+)作为EgTub4基因的表达载体。目标蛋白可溶性表达的优化条件为:T=25℃、[IPTG]=0.01mmol/L、t=10h、2×YT培养液。最佳洗杂咪唑浓度为150mmol/L,洗脱咪唑浓度为500mmol/L。Western blotting分析结果显示,纯化的蛋白均能与β-微管蛋白抗体及His-Tag标签抗体反应,条带大小符合预期,约M_r 60000。结论对EgTub4进行了生物信息学预测、分析和表达,得到该基因在大肠埃希菌中可溶性表达的最佳诱导条件,纯化目标蛋白。     

急性冠脉综合征应用替格瑞洛联合阿司匹林致颅内出血1例

正替格瑞洛是一种直接起效,可逆性结合的新型P2Y12受体拮抗剂,与氯吡格雷相比,具有更快速,更强效抑制血小板聚集的特点。因此被多个指南推荐用于急性冠脉综合征(ACS)的治疗~([1])。但其安全性,包括出血、呼吸困难及心动过缓均有待进一步的临床观察。本文报道ACS应用替格瑞洛和阿司匹林后出现大面积颅内出血致死1例。1病例患者男性,51岁,主因"间断胸闷、胸痛1年余,再发加重27 h"于2017-3-22入院,入院查心电图示窦性心律,     

γ-干扰素释放试验在肺外结核中的应用

<正>结核病是一种严重危害人类身体健康的传染性疾病,进入新世纪结核病依然是十分严重的公共健康问题[1-2]。全球范围内每年大约有8百万人患结核病,每年有2百万人死于结核病,我国结核病的发病率居全球范围内的第2位,本世纪初第4次结核病流行病学调查结果显示我国有5.5亿人感染结核杆菌[3]。结核分枝杆菌不但可引起肺结核,而且可引起肺外多种器官的结核感染,结核病的诊断尤其是     

siRNA沉默TAp73对骨肉瘤细胞的增殖和侵袭力的作用研究

目的　探讨通过siRNA沉默细胞TAp73蛋白表达对骨肉瘤Saos-2细胞的增殖、周期以及侵袭力的作用研究。 方法 以骨肉瘤Saos-2细胞系为研究对象,设计合成沉默TAp73的siRNA片段,转染入Saos-2细胞,用Western-blot法检测干扰后TAp73蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力。 结果 Western-blot检测显示siRNA对TAp73蛋白表达有显著下调作用;CCK-8检测实验组细胞增殖明显(P<0.05);细胞周期检测显示细胞处于DNA合成期（S期）的细胞比例上升;穿过人工基底膜的细胞数量也明显增加,由（84.17±1.35）增加为（92.67±2.80 ）(P<0.05)。 结论 抗癌基因TAp73在骨肉瘤的增殖、凋亡和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为控制肿瘤增殖和转移的关键性因素。     

李冀教授治疗不寐经验总结

李冀教授力倡"医之成,悟也;方之精,变也"之大医理念,临证强调"悟变"思维。因此在治疗此病时从整体出发,以"悟变"思维进行辨证施治,查病因,定病性,分虚实。在治疗不寐时多以"补其不足,泻其有余,调其虚实"为总的治疗大法。而在辨证施治时,强调运用"悟变"的理念思维对不寐患者进行治疗。选取李冀教授运用中医传统辨证思维选用养心汤、酸枣仁汤化裁治疗"气虚两虚"及"肝血不足"两种证候的不寐病,疗效显著。     

CD+4CD+25CDlow/-127细胞体外抑制效应T淋巴细胞增殖的影响

1995年,Sakaguchi等 [1]率先在小鼠外周血中分离获得发挥免疫抑制功能的CD+4CD+25T淋巴细胞,被称为调节性T淋巴细胞(Regulatory T cells,Treg).Treg细胞不仅具有抑制自体反应性T淋巴细胞的功能,还能阻止效应性T淋巴细胞的过度增殖和活化,甚至能影响B淋巴细胞产生免疫球蛋白 [2].因此,对Treg细胞的功能研究正成为当今国内外的研究热点.本研究以CD+4CD+25CDlow-127为膜表面标志分选Treg细胞,利用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diaeetate,succinimidyl ester,CFSE)方法 体外检测其对效应T淋巴细胞增殖的影响,从而为Treg细胞的功能研究奠定实验基础.     

氯硝柳胺在小鼠血浆中的代谢及抗日本血吸虫尾蚴侵袭作用

目的通过观察氯硝柳胺口服后血药浓度变化,了解药物在小鼠血浆中的代谢情况,并对其抗日本血吸虫尾蚴侵袭的效果进行观察。方法将24只雌性昆明小鼠随机分成8组,每组3只。每鼠灌胃给药0.2 ml/20 g,剂量为120 mg/kg体重。于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、16和24 h眼眶采血,收集血浆,采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同时间点的血药浓度,计算药峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、平均滞留时间(MRT)和消除半衰期(T1/2)等药代动力学参数。另取30只昆明小鼠,随机分成6组,每组5只,分别灌胃给药40、80、120、160和200 mg/kg,余下1组作为对照组。给药1 h后进行尾蚴攻击感染,每鼠(40±2)条。再取35只昆明小鼠,随机分成7组,每组5只,灌胃给药200 mg/kg,余下1组作为对照组。于给药后0.25、1、4、8、12和24 h进行尾蚴攻击感染,每鼠(40±2)条。各组小鼠均于感染后35 d处死,计数体内血吸虫成虫数,计算减虫率。结果 120 mg/kg氯硝柳胺灌胃给药后0.25 h,小鼠血药浓度即达到(0.40±0.28)μg/ml,1 h时达到最大值(0.91±0.34)μg/ml,到2 h时已降至(0.49±0.38)μg/ml,之后继续下降,16 h后趋近于0;MRT为(6.78±1.47)h,T1/2为(6.80±7.05)h。氯硝柳胺不同剂量组35 d后检获虫数与对照组差异均无统计学意义(P0.05)。200 mg/kg氯硝柳胺给药后0.25 h进行尾蚴攻击,35 d后检获虫数显著少于对照组(P0.05),减虫率为79.1%,其他各组与对照组间差异无统计学意义(P0.05)。结论氯硝柳胺灌胃给药后,血药浓度迅速上升,1 h可达到峰值。200 mg/kg氯硝柳胺给药后0.25 h时对尾蚴侵袭有一定抵抗效果。     

针灸治疗帕金森病取穴规律分析

【目的】通过数据分析挖掘针灸治疗帕金森病的取穴规律。【方法】计算机检索2000年1月至2020年12月中国知网期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库(VIP)、万方数据知识服务平台(WanFang)中关于针灸治疗帕金森病的临床随机对照试验文献,将数据导入Microsoft Excel 2013建立数据库,并利用IBM SPSS Statistics 25.0与IBM SPSS Modeler 18.0软件对数据进行分析。【结果】共纳入96篇文献,针灸处方152条,涉及腧穴102个,总频次1 128次。常用腧穴分别为风池(87次)、合谷(85次)、太冲(80次)等;常用经脉为足少阳胆经和督脉等。经关联规则分析,共得出67条腧穴关联规则,常用腧穴配伍为太冲-合谷、合谷-百会-太冲等。【结论】基于数据挖掘针灸治疗帕金森病取穴规律是可行的,可为临床研究提供参考依据。