山奈酚对HepG2细胞增殖的影响及诱导其凋亡的机制研究

目的研究山奈酚对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖与凋亡的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为空白组和实验组,实验组以CCK-8法检测10个不同浓度的(10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1)山奈酚处理HepG2细胞24 h后的存活率。最终以3个浓度(20,40,50μmol·L^-1)山奈酚作为低、中、高3个浓度实验组。以免疫印迹法检测核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)和死骨片-1(P62)蛋白表达水平(灰度值)。结果山奈酚处理HepG2细胞24 h后,空白组与低、中、高3个浓度实验组HepG2细胞的存活率分别为(100.00±0.00)%,(87.92±3.13)%,(77.92±4.40)%和(70.53±4.19)%;上述这4组的NLRP3表达水平分别为0.27±0.05,0.50±0.03,0.71±0.08和0.93±0.10;上述这4组的P62表达水平分别为0.54±0.06,0.76±0.05, 0.87±0.04和1.09±0.10。上述指标:3个浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论山奈酚可有效抑制HepG2细胞增殖、抑制其自噬并诱导其凋亡,其机制可能为有效促进P62的沉积,同时能诱导凋亡经典途径中NLRP3的合成,从而抑制HepG2细胞自噬并促进其凋亡。     

肝硬化合并巨大脐疝与右腹股沟斜疝的肝移植手术一例

合并巨大脐疝与腹股沟斜疝的肝移植手术的患者少见,因合并肝硬化的腹外疝患者病情复杂,肝移植术后并发症多,可诱发肝功能衰竭,严重者会危及生命.本研究回顾性分析2014年2月我院移植中心收治的1例乙肝肝硬化合并巨大脐疝与右腹股沟斜疝的的临床资料,探讨其肝移植手术的技巧和疗效.     

牛磺熊去氧胆酸对脂肪肝缺血再灌注损伤影响的实验研究

目的：探讨牛磺熊去氧胆酸（ TUDCA）对自体肝移植大鼠脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和TUDCA组,用脂肪肝大鼠自体肝移植诱导缺血再灌注损伤模型,缺血后分别给予蛋白液和含10 mmol· L－1 TUDCA的蛋白液,以1.5 mL· min－1的速度灌洗45 mL,于6,24 h后检测血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）与血清天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）含量;肝组织中超氧化物歧化酶（ SOD）含量;取肝组织做病理组织学检测;免疫组化方法检测肝组织中核因子活化B细胞κ轻链增强子（ NF－κB）的活化程度。结果 TUDCA能降低大鼠血清中ALT、AST含量,并提高SOD的含量（ P＜0.05）;TUDCA组中的肝细胞水肿及汇管区炎性细胞浸润轻于模型组;TUDCA组比模型组NF－κB表达明显减少（ P＜0.05）。结论 TUDCA通过减轻内质网应激和减少NF－κB表达,对脂肪肝大鼠IRI起到保护作用。     

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC50)。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷（25 μmol/L）组和α-常春藤皂苷（50 μmol/L）组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC50为40.32 μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。     

胎儿全身动脉铸型标本的制作改良

目的为制作胎儿全身动脉铸型标本提供改良方法。方法选用男性胎儿新鲜尸体,采用逆流冲洗法、多位点插管分步灌注法分别从脐静脉、双侧脐动脉和主动脉升段上下插管,并采用过氯乙烯、ABS等材料作为填充剂进行灌注,以制作出胎儿全身动脉铸型。结果制作的胎儿全身动脉铸型标本整体效果好,三维立体感强,构型美观,既能观察局部,又能体现整体。结论逆流冲洗法、多位点插管分步灌注法是解决冲洗胎儿全身血管和灌注填充剂过程中血管极易破裂难题的改良方法。     

儿童DCD供肝肝移植术后胆道并发症高危因素研究

目的 分析儿童心脏死亡器官捐献(DCD)肝移植受者术后胆道并发症发生的高危因素.方法 收集天津市第一中心医院2013年3月至2015年3月施行的48例儿童DCD肝移植手术的临床资料,回顾性分析临床因素对受者胆道并发症的影响.结果 48例儿童DCD肝移植受者术后共11例发生胆道并发症,发生率为22.9％.单因素分析显示胆道并发症组与对照组间的热缺血时间(P=0.003)差异有统计学意义(P＜0.05),受体年龄(P--0.998)、受体性别(P=0.094)、MELD评分(P=0.159)、PELD评分(P=0.740)、Child-Pugh评分(P=0.159)、冷缺血时间(P=0.990)、受体ICU逗留时间(P=0.105)、是否发生感染(P=0.930)、有无其他并发症(门静脉狭窄/血栓形成、肝动脉栓塞、DGF)(P=0.268)以及A3O血型是否相容(P=1.106)差异无统计学意义(P＞0.05).多因素分析显示热缺血时间(P=0.020,OR=10.367,95％可信区间为1.451～74.089)是术后胆道并发症的独立危险因素.结论 胆道并发症仍然是儿童DCD肝移植术后的重要难题,热缺血时间是受者术后胆道并发症的独立危险因素.因此选择更短热缺血时间的CDC供肝可以降低儿童肝移植受者胆道并发症的发生率.     

食管癌中NF-κB、CD133表达与肿瘤转移的关系

目的:探讨NF-κB、CD133在食管癌中的表达及其与肿瘤转移的关系。方法:采用免疫组织化学法检测28例食管癌组织和21例正常食管组织中NF-κB、CD133的表达。结果:在食管癌组织中NF-κB、CD133表达率分别为64.29%、46.40%,而正常食管组织中NF-κB、CD133表达率为9.52%、4.76%,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ-Ⅳ期和有淋巴结转移的食管癌组织中CD133的表达水平均比Ⅰ-Ⅱ期和无淋巴结转移的高;且CD133与NF-κB表达呈显著正相关(r=0.544,P<0.05)。结论:NF-κB、CD133在食管癌组织中明显阳性表达,与食管癌的恶性程度、淋巴转移等密切相关,对促进食管癌的发展发挥有重要作用。     

lncRNA HULC对肝癌细胞miRNA差异表达谱及ceRNA调控网络的影响

［摘要］　目的　探究长链非编码RNA（lncRNA）肝癌高表达转录本（HULC）对肝癌细胞微小RNA（miRNA）差异表达谱及竞争内源性RNA（ceRNA）调控网络的影响。方法　选取人肝癌细胞系BEL-7402,瞬时转染HULC siRNA以降低lncRNA HULC的表达。通过高通量测序选取表达具有差异的miRNA,并通过实时荧光定量PCR进行验证。基于参考基因组,预测新miRNA。通过基因富集分析及ceRNA调控网络,研究这些基因的潜在功能。结果　经敲低lncRNA HULC表达后,通过高通量测序挑选出了9个表达差异显著的miRNA。5个miRNA表达下调,4个miRNA表达上调。通过miRDeep2打分,挑选出了15个分值较高的新miRNA。基因富集分析结果显示,表达下调的miRNA的靶基因的分子功能与丝氨酸tRNA连接酶活性、蛋白激酶活性、阳离子通道活性、钙转运ATP酶活性等有关;表达上调的miRNA的靶基因与硒代半胱氨酸裂解酶活性、过氧化物酶体机制靶向信号1结合、过氧化物酶体靶向序列结合、蛋白质N-末端结合、肿瘤坏死因子受体超家族结合等有关。miRNA-靶基因互作网络、显著富集功能-功能互作网络揭示靶基因与miRNA的关联性以及功能间的相关性。结论　在肝癌细胞系BEL-7402中lncRNA HULC具有调节多个表达差异的miRNA的作用,通过ceRNA调控网络模式,影响肝癌的发生、发展。     

栀子苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨栀子苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响。方法 32只SD雄性大鼠等分成空白组、模型组、栀子苷高剂量组、栀子苷低剂量组。采用AlCl3建立AD模型,药物组大鼠用不同剂量栀子苷溶液腹腔注射。Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力和HE检测大鼠海马细胞的形态学变化。结果栀子苷组大鼠学习记忆能力高于模型组(P<0.05);栀子苷组大鼠海马细胞的形态对比AD模型的改善而接近正常组。结论栀子苷可以改善AD模型大鼠学习记忆能力,并对AD模型大鼠海马细胞的病理学变化有抑制作用。     

蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。