白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

目的：探讨白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。 方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型，采用瘤旁注射的方法，用不同剂量的白藜芦醇进行治疗，并设对照，用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用； 透射电镜和TUNEL法发现白藜芦醇导致移植瘤内大量细胞发生凋亡；免疫组织化学法发现白藜芦醇注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率（3.92％±0.85％、5.70％±0.84％和11.86％±0.97％）明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组（27.56％±1.40％和29.48％±0.51％）之间无显著差异；Bax蛋白阳性细胞率（52.30％±1.54％、45.72％±0.88％和40.02％±1.20％）明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组（20.88％±0.91％和19.34％±0.35％）之间无显著差异； RT-PCR法发现白藜芦醇注射组的bcl-2 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）；bax mRNA条带强度递增，并明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）。 结论： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2 的表达和上调bax 的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。     

PKA参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

目的: 探讨环一磷酸腺苷依赖的蛋白激酶 (PKA) 在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。方法:细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C-纤维诱发电位。 结果:(1) 8-Br-cAMP诱发脊髓背角C-纤维诱发电位LTP,且8-Br-cAMP-诱导的 LTP 遮蔽强直刺激诱导的LTP。(2) PKA的选择性抑制剂Rp-CPT-cAMPS阻断C-纤维诱发电位LTP的诱导和时间依赖性翻转C-纤维诱发电位LTP。(3)蛋白质合成抑制剂茴香霉素彻底阻断8-Br-cAMP诱发的 LTP。(4)MAPK选择性抑制剂PD98059阻断8-Br-cAMP诱发的LTP。 结论:脊髓背角神经元存在PKA信号途径,并参与脊髓背角C-纤维诱发LTP的诱导和早期维持。     

Crouzon综合征基因突变检测

目的 研究1个Crouzon综合征家系及1例散发的Crouzon综合征患者的成纤维生长因子受体2(fibroblast growth factors receptor 2,FGFR2)基因突变情况.方法 在1个Crouzon综合征家系的10名成员,和另一例散发者的外周血提取基因组DNA,PCR扩增FGFR2基因的第8和10外显子(部分家族成员仅扩增第8外显子),产物纯化后直接进行DNA测序检测突变.结果 家系中3名成员及另1例散发者FGFR2基因第8外显子的833位核苷酸发生G→T的转换突变,该突变为错义突变,使该位点所编码的氨基酸由半胱氨酸变为苯丙氨酸(C278F).该突变为杂合子突变.结论 FGFR2基因突变是Crouzon综合征致病原因.     

用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析。PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65kb、1.9kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。     

69,XXY伴严重生长迟缓及眼球突出病例的产前诊断

目的分析孕中期血清筛查数据和胎儿彩色多普勒与染色体异常之间的关系。方法对一孕中期血清产前筛查18三体风险1:10,血清Free-hCGβ异常减低(值为1.29ng/ml即0.08MOM),胎儿系统结构检查提示胎儿小于孕周,头腹围比(1.63)大于正常(1.25),上唇连续性中断延至鼻底的孕妇进行羊膜腔穿刺,抽取羊水进行细胞遗传学检查。结果羊水细胞染色体核型:69,XXY。结论中孕期妇女血清Free-hCGβ异常减低和胎儿头胸围发育不同步、胎儿唇腭裂提示胎儿染色体畸变可能,血清和超声联合筛查有助于染色体疾病的检出。     

EBVTK激酶基因在原核细胞中的表达及其在NPC诊断中的意义

目的 探索以Epstein-Barr病毒（EBV）TK激酶为抗原，建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌（NPC）诊断方法。方法 构建原核表达载体pRSET-TK，在原核细胞BL21（DF3）中获得高效表达的TK激酶，以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性。以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法，检测NPC患者血清中TK／IgG抗体。结果 在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体，Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100％。结论 初步建立了ELISA TK／IgG诊断NPC方法，具有较高的敏感性和特异性。     

PKC在成年大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强的诱导和维持中的作用

目的：探讨蛋白激酶C (PKC) 在大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强（LTP）的诱导和维持中的作用。方法： 细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C-纤维诱发电位。 结果：(1) PKC的选择性抑制剂chelerythrine（200 μmol/L）或G 6983（100 μmol/L）对脊髓背角C-纤维诱发电位的基础电位没有影响，但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导。(2) Chelerythrine或G 6983呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP 诱导后15 min，脊髓局部给予chelerythrine（200 μmol/L）后，LTP逐渐降低，于给药后70 min降至对照水平；而G 6983（100 μmol/L）产生同chelerythrine相似的效应，在用药后110 min，LTP降至对照水平。但同样浓度的chelerythrine或G 6983在LTP 诱导后3 h，均不能翻转业已建立的LTP。结论： PKC参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持，而不影响晚期LTP的维持。     

福辛普利、卡托普利及缬沙坦对人血单核细胞表达组织因子的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)中的福辛普利(fosinopril)、卡托普利(captopril)及I型血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)中缬沙坦(valsartan)对人血单核细胞受细菌脂多糖(LPS)刺激表达组织因子(TF)的影响。方法:从健康平产妇脐静脉取得脐血,分离单个核细胞,分组培养,以LPS(0.1 mg/L)刺激作为对照组,其它组分别再加入ACEI类药物fosinopril (20 mg/L)、captopril(20 mg/L)及valsartan(20 mg/L),孵育。冻融法收集细胞裂解液,用一期凝固法分析LPS诱导单核细胞表达的组织因子促凝活性。用RT-PCR技术,观察各组表达TFmRNA,并以GAPDH作为内参照进行半定量分析。结果和结论:Fosinopril,captopril及valsartan可下调人血单核细胞由LPS诱导的TFmRNA的表达,并显著降低促凝活性。     

血小板内皮细胞黏附分子-1在大鼠结肠癌组织及淋巴管的表达

目的 观察血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)在大鼠结肠癌组织及淋巴管的表达.探讨其与肿瘤细胞淋巴道转移之间的关系.方法 构建大鼠结肠癌动物模型,运用免疫组织化学方法检测PECAM-1在结肠癌组织及淋巴管的表达.结果 PECAM-1在正常大鼠结肠组织表达于血管和淋巴管内皮,在肿瘤组织表达于腺体、血管和淋巴管的内皮,其中在肿瘤腺体的表达早期多位于细胞膜上,中晚期则转移至细胞质内,且表达随肿瘤进展而下降.在肿瘤淋巴管内皮的表达随肿瘤进展而下降,在血管内皮表达不变.结论 PECAM-1可能介导大鼠结肠癌早期肿瘤细胞与内皮之间的黏附;PECAM-1在大鼠结肠癌淋巴管的表达降低可能与肿瘤内淋巴管新生及内皮连接开放相关.     

慢性乙型肝炎组织中肝前体细胞的免疫组化特征

目的研究肝前体细胞（hepatic progenitor cells，HPCs）、小管样反应、中间型肝细胞在慢性乙型肝炎组织中的分布特征和数量变化，以及与肝细胞再生之间的可能联系。方法对42例慢性乙型肝炎组织行常规病理HE染色，按炎症活动度（G）分为轻、中、重三度，免疫组织化学方法观察肝胆细胞标记（AFP、GST-π、CK7、CK19）和造血干细胞标记（c-kit、CD34）的表达，并以Ki-67标记增殖的肝细胞，用CK7／CK19作为标记物对符合定义的HPCs、中间型肝细胞进行计数，小管样反应程度的判定利用彩色病理图象分析系统。结果慢性乙型肝炎的早期阶段即存在HPCs的活化和小管样反应，其数量随着炎症活动度的增加而增加，均表达CK7、CK19、GST-π和AFP，肝细胞增殖指数在轻、中度肝炎中逐渐增加，重度肝炎、肝硬化患者增殖的肝细胞数下降，而中间型肝细胞数量显著增加。小管样反应面积百分比与HPCs数目正相关（r=0．739，P〈0．05），中间型肝细胞数目与HPCs数目正相关（r=0．614，P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎中不仅有成熟肝细胞增殖，也存在肝前体细胞活化和分化，可能参与肝脏损伤后的再生修复。