An improved method of mitochondrial DNA isolation for XL-PCR

Objective： To obtain high quality of mitochondrial DNA （mtDNA） and carry out extra-long PCR （XL-PCR）. Methods： Mitochondria were isolated by differential centrifugation, and membranes were disrupted using 10%SDS （pH 7.0）. mtDNA was then extracted using phenol and chloroform. Resuits： The mtDNA obtained by using our improved method can be used as effective template for XL-PCR, and total mtDNA （16 kb） can be amplified easily. Conclusion： Our improved method is effective in preparing high quality of mtDNA, which can be used as template for XL-PCR.     

P-BG显示神经髓鞘和结缔组织纤维组合染色法

在神经组织染色中,为了更好的区别神经纤维髓鞘和结缔组织纤维成分,我们进行了实验方法学研究,选用 Phloxine(萤光桃红)和 Brillant green(亮绿)染色试剂,反复染色对照,结果发现能够较好地显示脊髓组织中的神经纤维髓鞘(呈红色)结缔组织纤维(呈绿色),本文所建立     

p75NGFR对胰腺癌细胞株SW1990生物学行为的影响

目的通过体内和体外实验，探讨p75NGFR在胰腺癌SW1990细胞生长、分化以及侵袭中的作用。方法采用脂质体转染法将含p75NGFR的真核表达质粒转染人胰腺癌细胞株SW1990，建立稳定表达p75NGFR的细胞模型；应用MTT法、平板克隆形成实验以及流式细胞技术分别检测细胞的生长曲线、克隆形成能力以及细胞周期变化；建立胰腺癌的裸鼠皮下移植瘤和胰腺原位移植瘤模型，观察p75NGFR对SW1990细胞裸鼠成瘤能力、肿瘤组织学分化、细胞侵袭和转移的影响。结果与对照组相比较，转染p75NGFR的SW1990细胞其生长速度缓慢（P〈0.01），克隆形成能力降低（P〈0.05）；转染细胞的细胞周期改变表现为G1期细胞明显增多和S期细胞明显减少（均为P〈0.01）。与对照组相比较，转染组裸鼠皮下以及胰腺原位的成瘤率以及肿瘤体积减小（P〈0.01），肿瘤的生长缓慢，组织学分化差，浸润性生长趋势不明显，未见肿瘤卫星现象。结论体外实验均发现p75NGFR通过阻滞细胞周期进程而显著抑制胰腺癌细胞株的生长，体内研究发现p75NGFR可抑制裸鼠皮下及胰腺原位移植瘤的形成、分化和侵袭，提示p75NGFR与胰腺癌的生物学行为密切相关。     

P27、P53和增殖细胞核抗原在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨P27、P53和增殖细胞核抗原（PCNA）在胃癌组织中的表达及其与临床病理指标及预后的相关性。方法：应用免疫组织化学SP法,检测62例人胃癌组织中P27、P53、PCNA的表达。结果：胃癌组织中,P27、P53、PCNA表达的阳性率分别为37．1％、40．4％、83．9％。P27的表达与Bormann分型,肿瘤浸润深度、淋巴结及远处转移,临床分期有关,P53表达与患性别、远处转移、临床分期有关;而PCNA仅与患年龄、肿瘤分化程度有关,P27阳性组5年生存率高于阳性组,P27与PCNA表达呈负相关。结论：胃癌组织中P27、P53、PCNA的表达可作为判断肿瘤恶性程度、有无转移及预后的重要参考指标。     

HBx蛋白羧基端30个氨基酸缺失对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨羧基端缺失了30个氨基酸的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)突变体ΔHBx和野生型HBx对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响。方法:脂质体介导pcDNA3ΔHBx和pcDNA3HBx重组体转染人HBV(-)的肝癌细胞Huh7。PCR扩增Neo基因及Western blot检测转染重组体。运用细胞生长曲线绘制、平板克隆形成、流式细胞仪和裸鼠成瘤实验对转染pcDNA3ΔHBx、pcDNA3HBx和pcDNA3的细胞生物学活性进行检测。结果:pcDNA3ΔHBx组细胞生长速度较pcDNA3HBx组和pcDNA3组减慢,其倍增时间延长;pcDNA3ΔHBx组克隆形成率较pcDNA3HBx组和pcDNA3组下降;细胞周期检测显示pcDNA3ΔHBx表达使Huh7细胞G0/G1期→S期的进程明显减慢。结论:HBx羧基端缺失了30个氨基酸的突变体比野生型HBx具有明显抑制细胞增殖的能力,提示该区域对于HBx功能发挥起着至关重要的作用。     

胃癌中p27、p53蛋白及TGF—βRⅡ的关系和预后意义

目的：探讨p27、p53蛋白及TβRⅡ在胃癌中的表达关系和预后意义。方法：用免疫组化法同步检测人胃癌组织中27,p53,TβRⅡ的表达。结果：62例胃癌中p27蛋白失表达率为58．1％，高于胃癌旁组织20.0%;p53和TβRⅡ阳性率在胃癌中分别为43．5％和17．7％，而癌旁组织分别为0和50％。p27阳性组的p53,TβRⅡ阳性率（分别为65.4%,31.0%)显著高于p27阴性组（P＜0．05),p27与p53及TβRⅡ呈正相关；而p53与TβRⅡ差异无显著性（P＞0．05）。Kaplan-Meier曲线显示p27,TβRⅡ阴性组及p53阳性组患者的预后较对照组差（P＜0．05），Cox回归模型分析显示，p27与预后弱相关（P=0.0561),p53和TβRⅡ与预后密切相关（P＜0．05）。结论：p27,p53,TβRⅡ相互作用，对胃癌发生发展起重要作用；p27和TβRⅡ表达愈强,p53表达愈弱，说明预后较好，反之则差。联合检测p27,p53，TβRⅡ，可辅助胃癌诊断，估计预后，选择治疗方案。     

C-erbB-2, p53在乳腺癌中的共表达及其预后意义

目的：探讨ｃ－ｅｒｂＢ２，ｐ５３基因的共同表达在乳腺癌预后中的价值。方法：应用免疫组化技术对５５例具有临床随访资料的人乳腺癌组织进行两种蛋白的表达研究。结果：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｐ５３共表达虽与肿瘤大小、组织学类型及分级无明显关联，但与患者预后呈明显负相关。结论：ｃ－ｅｒｂＢ、ｐ５３蛋白共表达比它们的分别表达具有更大的预后价值。     

部队海训中常见"日照疾病"的防治

随着军事斗争准备逐步深入,部队每年在海上进行游泳训练的时间将会延长,训练的强度也不断加大。在海训过程中,官兵因“日照”而导致以皮肤紫外线灼伤为主的疾病也伴随大量发生,在一定程度上影响了部队训练质量和训练任务的完成。结合我院几年来在海训中卫勤保障的做法,现就如何防治“日照疾病”介绍如下:     

Preparation of CSA system and its application in IHC and ISH

CatalyZed st~ amplification(CSA) system was successfully ugh in ilnmunoaSSay by BobIDw et alll] and Adams et allzj reported that they aPPlied CSA system to immUnohistOChendstw (IHC ) and in situ hybridization(ISH), ~tively. The core reagent of CSA system is~de crass--linking a kind of ~er molecule such asbiotin, digokin, fluorescein or heaVy mend ion, etc. ThePrinciple of foe system is: twide is catalyZed by horseedsn pemtibe(ar) with HZOz to fonn covatent conjugation siteS in 15 …