利用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）测定细胞活力的方法与应用

目的：利用细胞内脱氢酶对2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）的催化作用建立比目前常用的3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四氮唑（噻唑蓝,MTT）法更可靠的测定细胞活力的方法。方法使用不同浓度的TTC溶液测定细胞活力,并确定TTC的有效浓度范围。在计算所测定值与细胞数量函数关系的基础上,通过与传统测定细胞活力的MTT法进行比较,分析该方法的可行性。结果0．5％～1．0％浓度范围内的TTC溶液可用来测定细胞活力,测定值与细胞数量之间存在线性关系,与MTT法得到的结果基本一致,可避免MTT法测定过程中来自于细胞培养体系中其他抗氧化物质的非特异性干扰。结论 TTC可用于测定细胞活力,可替代常规的MTT法,具有操作简便,费用经济,结果可靠等优点。     

秀丽线虫野生株系和缺氧敏感株系的差异蛋白质组学研究

目的 研究秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)野生株系N2和缺氧敏感株系(ia04)的差异蛋白质,为进行线虫在缺氧环境下的应答机制研究奠定基础.方法 同步化培养2种株系的线虫,培养至L4期时,常规方法提取总蛋白,采用双向电泳分离和串联质谱分析,搜索Swiss-Prot线虫数据库,鉴定蛋白种类并根据基因本体论(gene ontology,GO)进行分析.结果 质谱成功鉴定了其中的25个差异显著蛋白(ratio＞ 2.0,P＜0.05),其中N2株系检测到的表达量比ia04株系高的主要是热休克蛋白(HSP-70,HSP-60)、GTP结合蛋白(TAG-210)、乙酰辅酶A脱氢酶中链(GN=T);ia04株系检测到的表达量比N2高的是延伸因子(EFT-3)和铁硫蛋白-1 (ISP-1),在ia04株系中,HSP的含量明显低于N2株系,说明这可能是ia04株系对缺氧敏感的原因之一.根据GO注释结果发现,鉴定到的这些差异蛋白与线虫的DNA合成及生长发育的相关性较大.结论 蛋白质组学的方法为线虫缺氧的研究提供了有参考价值的数据,不同株系差异蛋白的发现可促进对缺氧应答机制的了解,且可从蛋白质水平揭示重要表型的基因表达机制.     

人源胞红蛋白转基因秀丽线虫的制备与鉴定

目的：为了以秀丽线虫为模式生物研究人源胞红蛋白（human cytoglobin,hCGB）的生理功能,构建hCGB的秀丽线虫表达载体,并通过显微注射的方法制备转基因线虫。方法：将通过RT-PCR获得的hCGB的cDNA序列亚克隆到pFX-unc-119表达载体中,通过显微注射的方法获取染色体外转基因线虫,采用紫外线（UV）照射的方法,筛选获得整合到染色体中的株系,并采取Western印迹和免疫组织化学法鉴定外源基因的表达。结果与结论：成功地构建了hCGB基因的表达载体并获得了3个hCGB的转基因线虫株系,同时获得了3个作为功能对照研究的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）转基因线虫株系,为深入开展胞红蛋白的功能研究奠定了基础。     

N-甲基-D-天冬氨酸致(癎)乳鼠行为学与脑内脑红蛋白表达的研究

本文利用未成熟大脑对N-甲基-D-天冬氨酸(N-meth-yl-D-aspartate,NMDA)高度敏感,诱导大鼠乳鼠出现特异的屈曲样痉挛的癫癎发作,建立婴儿痉挛的动物模型,运用免疫组化(IHC)技术及Image J图象分析软件,半定量分析致癎乳鼠大脑额叶皮层组织癫癎发作时脑红蛋白(NGB)的表达规律。1材料和方法实验动物:Wistar雄性乳鼠(生后18d)49只,由军事医学科学院动物中心提供。主要试剂:N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)(美国Sigma公司),小鼠抗大鼠NGB单克隆抗体(军事医学科学院制备)[2],免疫组织化学染色ABC-SPTM试剂盒(美国ZYMED公司)。NMDA致癎乳…     

脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区脑红蛋白的表达变化

目的研究脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白（NGB）在大脑皮质和海马区的表达变化。方法采用双侧颈总动脉夹闭法制备沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型，在缺血20min后分别再灌注2、8、16、24、48、72h，处死动物并取脑，采用免疫组化染色结合阳性细胞计数的方法，检测脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区NGB的表达变化。结果沙鼠脑缺血再灌注损伤后，大脑皮质的NGB蛋白表达于损伤后16～48h上调，而海马区NGB表达则呈持续减少的趋势。病理学检测显示海马区神经细胞损伤程度较大脑皮质区严重。结论不同脑区对缺血性损伤的耐受性差异可能与NGB表达水平有关。NGB表达上调可能对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究

目的建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法，使低丰度蛋白得到富集，为通过蛋白质组学技术发现母乳中的重要活性蛋白奠定基础。方法将母乳作为混合蛋白抗原免疫动物制备多克隆抗体，随后用此多克隆抗体通过免疫亲和层析技术去除母乳中的高丰度蛋白，采用免疫印迹法对免疫亲和层析的效果进行验证。结果母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除，建立了去除母乳中高丰度蛋白的新方法。结论通过混合抗原所制备的多克隆抗体可有效去除其中的高丰度抗原，并可使低丰度蛋白得到富集。这一方法也可用于提高血浆等样品中低丰度蛋白的检出效率。     

用免疫组织化学方法研究NOV原癌基因在大鼠中枢神经系统中的表达

用免疫组织化学方法研究ＮＯＶ原癌基因在大鼠中枢神经系统中的表达张成岗蔡文琴苏炳银Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ＊（第三军医大学组胚教研室＊ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅＰａｒｉｓＶＩ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）肾母细胞瘤过度表达基因（ＮｅｐｈｒｏｂｌａｓｔｏｍａＯｖｅｒｅｘ...     

指数和几何曲线中k值的线性寻优算法

本文根据指数曲线和几何曲线经对数直线化后回归平方和SSR与k值的函数关系，通过对SSR求导和用迭代算法解出使SSR达到极大值的k值，并编制了通用的计算程序。该方法应用简单，其拟合优度不亚于其他曲线拟合的寻优算法。     

神经突起生长导向因子（netrin）受体家族研究进展

神经突起生长导向因子netrin是一种分泌蛋白 ,在神经发育所需的轴突导向及细胞迁移中发挥双重导向功能———吸引或排斥 ,主要依赖于生长锥所表达的不同受体结肠癌缺失蛋白 (DCC)或UNC5同源物 (UNC5H) ,从而传递不同信息。同时 ,dcc和unc5h也是肿瘤抑制基因 ,近年来的研究显示这种双重导向功能可能归因于它们属于配体依赖性受体家族。依赖性受体的重要特征是缺乏相应配体时将诱导细胞凋亡 ,因此推测DCC和UNC5H不仅为神经元传递信号所必需 ,同时也是细胞生存因子 ,与细胞存活及正常功能的发挥密切相关。     

用图像分析作交点计数的尝试

目的;探讨如何利用图像分析仪定量测量血管表面神经纤维密度。方法：对相同视野中的神经纤维分别采用灰度法和交点计数法进行测量,然后分析二者之间的函数关系,为进行统计学分析。结果：建立了测量血管表面神经纤维密度的灰度法和交点计数法之间的对数关系进行验证。结论：在图像分析仪上可以利用灰度法测量进行神经纤维密度的定量分析。