单独置入扩张型椎间融合器再次修复复发性腰椎间盘突出症重建腰椎稳定性

背景：椎间融合器逐渐代替传统的椎体间自体结构植骨而广泛应用于腰椎后路椎间融合治疗中,但绝大多数报道此时均需辅以椎弓根螺钉系统内固定。目的：评估复发性腰椎间盘突出再次修复过程中单独应用扩张型椎间融合器行腰椎后路椎间融合而不需使用椎弓根螺钉辅助内固定的可行性。设计、时间及地点：回顾性病例分析,2004-10/2007-01在中山大学附属第三医院骨科进行。对象：对17例复发性腰椎间盘突出症患者采用可扩张椎间融合器行腰椎后路椎间融合再手术治疗,男7例,女10例,再次手术时年龄31-68岁,平均41岁,两次手术间隔时间9个月-8年,平均3.6年。17例均有持续或间歇性腰背痛,间歇性跛行5例、下肢反射痛9例、下肢麻木7例、下肢肌力减弱11例。方法：常规后路切口,保留棘突与棘间韧带,依次行双侧椎板减压,彻底减压,松解粘连,切除残留的椎间盘组织,撑开椎间隙,用绞刀、丝锥依次平行于终板绞孔与攻丝,自两侧旋入可扩张椎间融合器,确认位置正确后,旋拧位于融合器内的扩张螺丝、直至将椎间融合器完全扩张,于椎间融合器内置入自体松质骨碎骨块,最后将端盖轻轻拧紧。主要观察指标：手术时间、术中出血量;椎间融合器置入后与宿主的组织相容性反应;随访复查影像学表现、功能恢复情况。结果：①手术时间70-200min,平均90min,术中出血100-800mL,平均150mL。②17例均获得随访,随访时间6-32个月,平均18个月。均未发现椎间融合器移位、下沉,置入后4个月均开始出现骨性融合。无一例出现感染及置入物排斥反应。③置入后即刻下肢放射痛消失,下肢麻木症状于置入后2-6个月逐渐恢复。按Macnab法疗效评定标准随访结果为：优10例,良6例,可1例,优良率为94.1%。结论：腰椎间盘突出症再次修复过程中单独应用扩张型椎间融合器可以重建脊柱正常的生理序列。     

多孔羟基磷灰石、纤维蛋白和金葡液复合物修复骨缺损的实验研究

背景：骨缺损的修复一直是骨科治疗的难点，寻找有效修复骨缺损的骨移植替代材料是目前骨缺损治疗的研究方向。目的：探讨珊瑚多孔羟基磷灰石(coraHine hydroxyapatite porous，CHAP)、纤维蛋白(fibrin sealant，FS)及金葡液(staphylococcus aureus injection，SAI)复合物修复骨缺损的作用及其作为人工骨移植替代材料的可行性。设计：随机对照的试验研究。单位：中山大学附属第三医院骨科。材料：实验在中山大学动物实验室和解放军第一军医大学全军生物力学中心完成。羟基磷灰石，纤维蛋白，金葡液。方法：采用新西兰大白兔54只在兔双侧桡骨制备骨缺损模型后分成实验组、对照组及空白组。将CHAP-FS-SAI复合物植入骨缺损处作为实验组，以自体骨植入作为对照组，空白组不植入任何物质。在2，4，8和12周分别进行大体标本观察，组织学，X射线片观察及生物力学测试，比较各组修复骨缺损的能力。主要观察指标：动物一般情况，大体标本，X射线片，组织学，生物力学测定。结果：实验组术后2周见植入物与骨端形成紧密的纤维性连接，镜下可见CHAP周围大量成纤维细胞、软骨细胞及细胞钙化。12周实验组和对照组均见大量成熟的骨细胞及板层骨；实验组见植入物完全骨化，塑形完全，CHAP未完全降解。空白组12周骨缺损区为纤维瘢痕组织填充。镜下主要为大量成纤维细胞。X射线片：2周实验组与对照组有骨痂影。4周骨痂影增多。8周实验组骨缺损消失，CHAP分散在骨痂中；对照组骨折线消失，髓腔开始形成。12周实验组和对照组骨皮质连续，髓腔复通，塑形完全。空白对照组12周骨缺损区无骨性连接。生物力学测试最大扭矩及抗扭刚度在术后4，8，12周复合物组和自体骨组差异无显著性意义(P＞0．05)。但术后2周，最大扭距实验组为(0．140&;#177;0．032)N&;#183;m，对照组为(O．105&;#177;0．035)N&;#183;m，抗扭刚度两组分别为(O．401&;#177;0．050)．(0．311&;#177;0．050)N&;#183;m／rad，实验组高于对照组，差异有显著性意义(t=2．087O，3．600O，P＜O．05)。结论：CHAP-FS．SAI复合物具有较强的成骨能力和良好的生物相容性，能作为自体骨移植的一种替代物修复骨缺损。     

早期骨关节炎软骨下骨趋化因子信号通路的表达

背景：趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。 目的：分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在骨关节炎致病机制中的重要作用提供依据。 方法：30只SD大鼠随机均分为实验组和对照组。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于造模后1,2,4周取右膝关节标本,采用全基因表达谱芯片技术研究软骨下骨全基因表达,利用差异基因分析、信号通路分析的方法分析趋化因子信号通路的表达改变情况。 结果与结论：①发现一系列与趋化因子信号通路相关的差异表达基因。②实验组与对照组相比较,趋化因子信号通路在造模后1周差异有显著性意义(P < 0.05),造模后2,4周差异无显著性意义(P > 0.05)。说明趋化因子信号通路在极早期膝关节骨关节炎的软骨下骨改变中起重要作用。     

去抗原生物型半月板移植修复羊半月板缺失

背景:同种异体半月板移植的临床疗效和预后均已获证实,但因来源和匹配问题难以推广.课题组应用已取得专利技术的去抗原处理技术,处理猪的半月板,得到了新型生物型半月板.目的:观察生物型半月板植入山羊膝关节内的组织学变化,探讨生物型半月板重建膝关节半月板的可行性及应用前景.设计、时间及地点:以山羊为对象的动物实验,于2005-06/2006-06在中山大学第三附属医院中心实验室完成.材料:选用健康山羊15只,用于半月板移植实验.取新鲜屠宰的完整猪半月板,用于制备生物型半月板.方法:切除山羊的膝关节内侧半月板,将生物型半月板塑形后原位植入羊的膝关节半月板缺失部位.主要观察指标:分别于术后1,3,6,12个月处死动物,行组织学,扫描电镜及墨汁灌注观察微循环等检测.结果:所有动物患肢切口均愈合良好,无感染,无死亡.植入半月板与周组织愈合良好,连接紧密.随着术后时间的延长,植入半月板逐渐吸收溶解,植入半月板内出现活的细胞,但术后1年仍有约1/4的组织无活细胞.术后1年墨汁灌注发现,周围组织长入并建立微循环,但仅限于周边约10%的范围(正常山羊约15%).植入半月板在术后6个月开始逐渐吸收溶解,扫描电镜下可见植入半月板表面逐渐毛糙,部分区域有破裂现象,但术后1年仍保持大体的形态.结论:生物型半月板植入山羊体内后,无明显排斥反应,植入半月板能与山羊关节囊良好愈合.植入半月板在溶解吸收过程中,宿主自体组织可以长入并建立微循环,植入半月板对山羊的软骨保护作用明显,但仍观察到轻度的软骨损伤.     

富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞成骨诱导的影响

背景:富血小板血浆足经过特殊方法提取的血小板含量丰富的血浆,相较普通血清含有更丰富的细胞因子,如血小板衍生因子、转化生长因子β、血管内皮生长因子等.目的:观察富血小板血浆对成骨诱导人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响,拟探讨促进人骨髓间充质干细胞的增殖与诱导成骨细胞的培养方法.设计、时间及地点:配对样本对比观察,于2007-03/2008-03在中山大学组织工程实验室完成.对象:18名健康志愿者,男12名,女6名,平均年龄27.5岁.随机分为3组:富血小板血浆组、胎生血清组、无血清对照组,每组6人.方法:抽取18名健康志愿者自体外周静脉血获取富血小板血浆.采用密度梯度离心法获取健康志愿者骨髓间充质干细胞,常规原代培养,传代诱导培养时根据分组情况,分别采用10%AB型血清、10%自体富血小板血浆与无血清,配比高糖DMEM培养基、50mg/L抗坏血酸、1008mol/L地塞米松、103mol/L-β甘油磷酸钠.主要观察指标:倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞彤态,MTT法检测细胞增殖情况,细胞碱性磷酸酶活性、骨钙素水平.结果:3组细胞均存接种后12～24 h开始贴壁,并由圆形逐步变化为梭型、多角形、有多个突起的不规则形状等.细胞传代诱导培养后,富血小板血浆组与胎生血清组细胞生长迅速,明显快于无血清对照组(P<0.05).从传代培养第2、4、6代的细胞生长看,随着培养时间的延长富血小板血浆组细胞增殖明显快于胎生血清组.3组细胞碱性磷酸酶活性与骨钙素随诱导时间的延长而增高,培养第3,6,9,12天胎生血清组碱性磷酸酶活性较富血小板血浆组低,培养第15天两组无明显差异.培养第3,6,9天富血小板血浆组细胞内骨钙素含量与胎生血清组无明显差别,12 d后明显高于胎生血清组.无血清对照组碱性磷酸酶活性及骨钙索含量较富血小板血浆组变化程度明显减小.并且各时间点碱性磷酸酶活性与骨钙素含量均低于富血小板血浆组(P<0.01).结论:自体富血小板血浆能够有效加快人骨髓间充质干细胞的增殖,并能有效促进诱导培养的人骨髓间充质干细胞成骨特性表达.     

四肢血管损伤的治疗

四肢血管损伤多见于车祸、骨折损伤、挤压伤等及某些锐器直接损伤。伤口可以是开放性或闭合性。除血管损伤外,一般都伴有受损肢体血运障碍。能否及时正确处理,不仅关系到患者的生命安危,而且涉及到受损肢体的存活和功能的恢复问题。因此,必须争分夺秒进行治疗。我院自1993～1998年共收治21例,修复受损血管30条,疗效满意,现报道如下。临床资料本组21例,其中男性20例,女性1例。年龄19～70岁。血管损伤原因:车祸骨折损伤8例,机器挤压伤5例,刀伤及其它锐器伤5例,枪弹伤2例,跨栏伤1例。血管损伤部位:股动脉4例,股静脉5例,动脉2例,动静脉复合…     

Study on chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells induced by Type 2 recombinant adeno-associated viral mediated transfer of hTGF-β1

Objective To investigate the potential application of human transforming growth factor-beta-1 (hTGF-β1) gene mediated by type 2 recombinant adeno-associated virus (rAAV2) vector inducing chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods Canine MSCs from bone marrow were isolated and cultured in vitro by density gradient centrifngation and adherence screening methods. The morphology of MSCs was observed by inverted phase contrast microscope and Giemsa stain. Flow eytometry was used to detect surface antigens of MSCs, The third generation of MSCs were transfected by rAAV2-hTGF-β1 with or without MOI of 1 ×105 v.g./cell or 5×105 v.g./cell. The expression of hTGF-β1 was detected by Western blot after 10 days, and TGF-β1 synthesis was determined by ELISA at 3, 6 and 9 day, respectively. After 2 weeks of culturing, mRNA expressions of type Ⅱ collagen and aggrecan were determined by RT-PCR and the collagen Ⅱ protein was detected by immunocytochemistry. Results The MSCs appeared to be morphologically spindle-shaped and showed active capability of proliferation both in primary and passage generations. Flow cytometry analysis indicated that MSCs were universally positive for CD29, CD44 and CD105, but negative for CD34 and CD45. TGF-β1 expression can be observed by Western blot after 10 days in two transfection groups, MOI of 5 × 105 group and MOI of 1× 105 group. With the extension of time, the contents of hTGF-β1 increased in the two groups detected by ELISA, while there was a significant difference between them two (P < 0.01). After 2 weeks of transfection of MSCs by rAAV2-hTGF-β1, the expression of collagen Ⅱ and Aggreacan mRNAs were positive. It also showed positive of collagen Ⅱ detected by immunocytochemistry. Conclusion Canine MSCs show chondrogenesis differentiation after induction by Type 2 rAAV mediated transfer of TGF-β1 gene. The process is a potential application for cartilage tissue engineering.     

骨髓基质细胞移植修复半月板无血运区损伤的实验研究

目的比较自体与同种异体骨髓基质细胞移植对半月板无血运区损伤修复的影响。方法 40只成年新西兰大白兔随机平均分为 A、 B两组。 A组兔的骨髓基质细胞 (MSC)经体外培养后与纤维蛋白凝胶 (FG)混合,自体移植于其一侧的膝关节半月板缺损区,即 FG＋自体 MSC（自体移植组）;另一侧单纯植入 FG(FG植入组 )。于 B组兔的一侧膝关节半月板缺损区移植 FG＋同种异体 MSC(异体移植组 ),另一侧缺损不予修复 (空白对照组 )。分别于术后第 1、 2、 3个月取材,观察半月板损伤部位的组织形态学变化。结果 (1)自体移植组 :术后 1个月缺损区可见纤维组织,内有大量成纤维细胞;术后 2个月见大量软骨细胞并有胶原纤维形成;术后 3个月损伤区呈纤维软骨愈合。 (2)空白对照组 :术后 1～ 3个月缺损区始终未愈合。 (3)单纯 FG植入组 :术后 1～ 3个月缺损区可见纤维组织,内有少量成纤维细胞,没有软骨细胞生长,呈瘢痕样愈合。 (4)同种异体移植组 :与自体移植组所见大致相同,但有 3侧缺损区可见大量淋巴细胞浸润,胶原纤维少。结论骨髓基质细胞移植可促进半月板无血运区损伤的愈合,同种异体骨髓基质细胞移植修复半月板无血运区损伤发生免疫排斥反应的机率较低。     

肱骨内上髁炎治疗的临床分析

目的 探讨肱骨内上髁炎的病因和治疗方法。方法 采用保守治疗和手术治疗二种方法。结果 33例平均随访21.6月,根据Stahl S评分标准,优良率为82％。结论 肱骨内上髁炎经过正规的保守治疗和手术治疗可取得满意的临床效果。     

Study on chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells induced by Type 2 recombinant adeno-associated viral mediated transfer of hTGF-β1

Objective To investigate the potential application of human transforming growth factor-beta-1 (hTGF-β1) gene mediated by type 2 recombinant adeno-associated virus (rAAV2) vector inducing chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods Canine MSCs from bone marrow were isolated and cultured in vitro by density gradient centrifngation and adherence screening methods. The morphology of MSCs was observed by inverted phase contrast microscope and Giemsa stain. Flow eytometry was used to detect surface antigens of MSCs, The third generation of MSCs were transfected by rAAV2-hTGF-β1 with or without MOI of 1 ×105 v.g./cell or 5×105 v.g./cell. The expression of hTGF-β1 was detected by Western blot after 10 days, and TGF-β1 synthesis was determined by ELISA at 3, 6 and 9 day, respectively. After 2 weeks of culturing, mRNA expressions of type Ⅱ collagen and aggrecan were determined by RT-PCR and the collagen Ⅱ protein was detected by immunocytochemistry. Results The MSCs appeared to be morphologically spindle-shaped and showed active capability of proliferation both in primary and passage generations. Flow cytometry analysis indicated that MSCs were universally positive for CD29, CD44 and CD105, but negative for CD34 and CD45. TGF-β1 expression can be observed by Western blot after 10 days in two transfection groups, MOI of 5 × 105 group and MOI of 1× 105 group. With the extension of time, the contents of hTGF-β1 increased in the two groups detected by ELISA, while there was a significant difference between them two (P < 0.01). After 2 weeks of transfection of MSCs by rAAV2-hTGF-β1, the expression of collagen Ⅱ and Aggreacan mRNAs were positive. It also showed positive of collagen Ⅱ detected by immunocytochemistry. Conclusion Canine MSCs show chondrogenesis differentiation after induction by Type 2 rAAV mediated transfer of TGF-β1 gene. The process is a potential application for cartilage tissue engineering.