过表达CCAAT增强子结合蛋白α对HepG2细胞代谢能力的影响

HepG2细胞系具有较强的稳定性、增殖力、并且能分泌多种血浆蛋白等优点,而它的某些合成代谢功能远不能满足生物人工肝的要求.     

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达

目的：探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法：用１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞素ＭＣＦ－７。处理后,在不同时间点,采用普通光镜、电子显微观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比,用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达情况进行检测。结果：经１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理１２ｈ后,可观察到ＭＣＦ－７细胞变形、出泡,从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集,且随着药物作用时间的延长,凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比,凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达降低。结论：诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。     

CD70在肝细胞癌转移侵袭中作用的研究

【立论依据及设计思路】 CD70属于肿瘤坏死因子超家族成员,为II型跨膜蛋白,与淋巴细胞上CD27结合后发挥作用。其在包括肾癌在内的多种肿瘤中表达异常,与免疫逃离有关。但CD70在肝细胞癌中的表达及其作用目前尚不清楚,本课题组在前期实验中意外地获得了具有很强迁移侵袭能力的肝癌细胞,而在这种细胞中CD70表达显著下降,随后我们又分析了40例巴塞罗那(BCLC)不同分级肝癌患者肿瘤组织和癌旁组织中CD70的表达,发现肿瘤出现转移后,CD70的表达明显下调,说明肝癌发生转移时CD70的表达确实出现改变。因此本实验旨在研究CD70表达变化与肝癌细胞转移侵袭间的关系,为肝癌病程提供新的潜在的转移标志物. 【实验内容】 (1)选择HepG2、Huh7、Hep3B和BEL-7402不同肝癌细胞系,利用流式细胞分选技术,分选CD70阳性和CD70阴性的细胞进行培养。(2)运用相差显微镜、扫描电镜及透射电镜观察CD70表达情况不同的细胞形态;应用MTT的方法检测不同细胞的细胞活力;利用transwell实验检测不同的细胞迁移和侵袭能力;最后根据实验结果,查询与迁移有关的蛋白质并利用蛋白质印迹的方法进行检测。(3)分别采用裸鼠尾静脉注射观察肺部转移瘤和脾脏注射观察肝转移瘤的方法,评价CD70表达变化与肿瘤转移及注射后裸鼠生存率的关系;通过皮下注射检测不同细胞的成瘤性并保留照片和组织,进行免疫组化以及蛋白检测。(4)选择新鲜人肝癌组织,用流式细胞技术对这些组织进行CD70表达的检测并分选,再将分选好的新鲜人肝癌细胞异体移植到裸鼠体内以检测其细胞特性是否与体外培养的细胞一致。 【材料】 HepG2、Huh7、Hep3B、及BEL-7402细胞系,流式分选仪,CD70的流式抗体BD Pharmingen 555834,BD Pharmingen 555835,裸鼠,新鲜人肝癌组织 【可行性】 前期工作已证实CD70在肝癌细胞转移后表达下调,提示CD70可能参与肝癌的转移;能熟练操作课题中所需的方法;所属实验室为“肝脏保护与再生调节北京市重点实验室”,与北京佑安医院具有合作关系,能获得新鲜人肝癌组织。 【创新性】 首次发现CD70在肝癌转移过程中表达下调,同时本课题首次提出CD70表达下调可能促进肝癌转移。     

重组人肝刺激因子的促增殖和抗损伤作用

目的 探讨重组人肝刺激因子（hHSS)的生物学特性并观察其抗损伤能力。方法 以MTT法、细胞计数、细胞周期分析和MAPK活性观察hHSS促细胞增殖作用。以H2O2损伤细胞，观察hHSS保护细胞的作用。结果 重组hHSS能刺激BEL-7402肝癌细胞增殖，促进增殖信号分子MAPK的磷酸化。hHSS可增强细胞对抗H2O2损伤的能力，促进受损细胞DNA合成。结论 HSS为一种新的生物活性蛋白，参与细胞增殖调节。     

十年建设,五年腾飞——回顾细胞生物学系暨“肝脏保护与再生调节”北京市重点实验室建设情况

首都医科大学细胞生物学系成立于1995年,是国内较早成立细胞生物学科的医科院校之一。随后十年相继获批成为北京市重点学科和北京市重点实验室。学科及实验室的发展始终坚持走转化医学之路,以细胞分子生物学为切入点,以肝病的基因诊断和治疗为核心开展研究,汇聚基础临床结合这一优势,形成了独具特色的学科发展方向,在科研、教学、人才建设方面都取得了良好的成绩。     

几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响

目的比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白浓度及活性的影响。方法采用蔗糖密度梯度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同样数量的细胞采用普利莱法提取得到的线粒体蛋白浓度高于其他2种方法所提取的线粒体蛋白浓度(P<0.05);采用Westernblotting的方法测定提取的线粒体发现采用普利莱法提取得到的线粒体中胞质蛋白污染较其他2种方法提取得到的线粒体少,线粒体纯度高;测定线粒体中细胞色素C和ATP含量后发现同样采用普利莱法提取得到的线粒体活性最高。结论普利莱法提取线粒体的方法优于蔗糖密度梯度离心法和Pierce线粒体提取试剂盒方法。     

三明治构型原代大鼠肝细胞培养细胞极性重建及功能的研究

目的 研究三明治构型培养大鼠原代肝细胞的形态学变化、极性重建过程并对其功能进行测定.方法 改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,三明治构型培养肝细胞,观察肝细胞的形态学变化,测定特异性膜区域蛋白的重新分布,检测白蛋白mRNA及肝细胞功能.结果 平均每个鼠肝可获取(2～3)×108个肝细胞,活率在93%±3%,纯度在96%±3%.培养6～8 h后,肝细胞排列成肝索样结构.3 d后,白蛋白mRNA表达明显增强.4 d后,DPPIV几乎完全集中在胆小管膜区.5 d后,胆小管完全连接成网络.形态维持达49 d以上.结论 三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境.肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能.     

加强科研项目中期管理是提高项目完成质量的关键环节

随着高校承担科研项目数量的日益增多,对项目的管理提出了越来越高的要求.为了保证取得高质量的成果,必须切实加强项目的中间环节管理.针对现时期科研项目中期管理不到位的普遍问题,文章从执行年度考核制度、加强协调保障职能、建立健全奖惩机制和完善成果评价体系四个方面对如何使过程管理落到实处,推动科研项目管理工作向制度化、规范化、科学化发展进行了探讨.