慢性氟中毒大鼠软骨的损害及COLIXA3蛋白、表达的实验研究

目的 探讨不同程度的氟中毒是否影响染氟大鼠软骨组织中COLIXA3蛋白的表达.方法 选用3～4周龄健康雄性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为5组,每组8只,分笼饲养,期间分别自由饮用含氟化钠0(对照)、25、50、100、150mg/L的蒸馏水,饲喂6月后建立氟中毒大鼠模型.应用光学显微镜分析实验大鼠骨组织的病理形态学变化过程.并采用免疫组织化学技术检测大鼠股骨干骺端COLIXA3蛋白的表达情况.结果 大鼠骨组织HE染色显示,各染氟组股骨干骺端出现不同程度软骨骨化,骨密度增加,具有硬化性氟骨症病变.对照组软骨组织未见明显异常.大鼠软骨细胞COLIXA3免疫组织化学染色结果为阳性,胞浆内可见有棕黄色颗粒,25、50、100 mg/L组在软骨组织中COLIXA3蛋白表达(23.3±4.5、41.2±5.6、26.4±7.5)增强.其中50、100 mg/L组表达与对照组(6.1±3.5)相比明显增加,组间比较差异有统计学意义(P均<0.05).150 mg/L组COLIXA3蛋白(13.3±4.2)较前面3组表达减弱,仍高于对照组,组问比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 动物模型中,大鼠病理学为单纯性骨硬化表现.低剂量氟促进,高剂量抑制大鼠软骨细胞的增生.随着染氟时间的延长,外环境中氟浓度过高时,对软骨细胞就表现为氟离子的直接毒性作用.氟化物影响染氟大鼠软骨组织中COLIXA3蛋白的表达,低剂量氟可以促进COLIXA3蛋白的表达,随剂量增加氟的促进作用减弱.

Abstract：

Objective To explore whether different degrees of fluorosis influence the expression of cartilage COLIXA3 protein in fluorosis model rats. Methods Forty male Wistar rats 3 to 4 weeks old were randomly divided into 5 groups according to body mass, and these rats were fed with distilled water containing sodium fluoride(NaF) of 0(control), 25, 50, 100 and 150 mg/L for 6 months, respectively, in order to establish the animal model of drinking water type fluorosis. Pathomorphologieal changes of the osseous tissues of rats were analyzed under light microscope and transmission electron microscope, and the expression of COLIXA3 protein of femur metaphysis was examined by immunohistochemistry. Results HE staining showed different degrees of femoral metaphyseal ossification of cartilage in each experimental group, bone density increased, with sclerotic lesions of skeletal fluorosis. The control group showed no abnormal cartilage. Electron microscopy showed that the experimental groups with varying degrees of cartilage cell swelling, cell matrix fades, 50 mg/L group .showed hyperplasia, and 100,150 mg/L groups were observed with organelles decreased, part of the disintegration of the cartilage cell lacunae, lmmunohistochemical staining of rat chondrocytes COLIXA3 was positive, cytoplasm with brown granules, cartilage COLIXA3 protein expression(23.3 ± 4.5, 41.2 ± 5.6, 26.4 ~ 7.5) in the 25, 50 and 100 mg/L groups enhanced. Compared to the control group (6.1 ± 3.5), the expression of 50 and 100 mg/L groups was significantly increased, and the differences were statistically significant(all P < 0.05). The expression(13.3 ± 4.2)of COLIXA3 protein in 150 mg/L group was decreased compared with the previous three, but is still higher than that of control, and the difference was not statistically significant(P > 0.05). Conclusions There has pathological changes of sclerosing skeletal fluorosis in animal model. Low-dose fluoride promotes while high-dose inhibits cartilage cell proliferation. When fluorine concentration in external environment is too high and with extended exposure to fluoride, direct toxic effects of fluoride on cartilage cells is observed. Fluorine affects and promotes the expression of COLIXA3 protein in cartilage. Low-dose fluoride can promote COLIXA3 protein expression, as the dose increases (over 100 mg/L), the effect decreases.     

砷致小鼠肝肾脂质过氧化的实验研究

目的:探讨砷对小鼠肝肾脂质过氧化的影响及维生素 E的拮抗作用。 方法 :采用亚慢性毒性实验方法 ,实验结束后分别测定小鼠肝肾组织中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的活力 ,同时观察维生素 E(Vit E)干预后对染砷小鼠体内抗氧化水平的影响。结果 :随着砷染毒剂量的增加 ,小鼠肝肾组织中 MDA含量显著增加 ,SOD、GSH- Px活性显著降低 ,且呈剂量 -效应关系。Vit E能显著抑制 MDA生成量 ,提高 SOD、GSH- Px活性。结论:砷可致机体脂质过氧化 ,Vit E可拮抗其脂质过氧化作用     

氟对成骨细胞和破骨细胞影响的研究进展

氟是机体必需的微量元素之一，氟与人体生命活动及牙齿、骨骼组织代谢密切相关。但过量氟会引起骨骼的损伤，其病变较复杂，既有骨硬化、骨周化骨，又有骨软化、骨质疏松。为什么会引起形态多样，性质不同，甚至方向相反的病变，目前还缺乏氟对骨转换影响的透彻了解。近年来随着研究手段和研究方法的不断改进和提高，国内外诸多学者对氟引起骨转换改变所涉及的成骨细胞、破骨细胞，进行了广泛的研究。     

砷诱导Jurkat T淋巴细胞铁蛋白重链的表达

目的了解三氧化二砷诱导人Juikat T淋巴细胞的差异表达基因，探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法在体外用三氧化二砷(5μmol／L．24h)处理人Jurkat T淋巴细胞后．应用抑制性消减杂交技术(ssH)和基因克隆技术构建差异表达的cDNA文库，用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的人Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析结果显示，铁蛋白重链在正向消减cDNA文库中有2个阳性克隆。结论三氧化二砷可诱导铁蛋白重链的表达，铁蛋白重链在淋巴细胞抗砷损伤机制中可能起着一定的作用。     

砷与细胞凋亡

细胞凋亡（Apoptosis）又称程序性细胞死亡（Programmedcelldeath，PCD）是受基因调控的一种主动细胞自杀过程。在一定程度上，细胞凋亡与细胞增生和分化同样重要。细胞凋亡对多细胞生物体维持自身稳定具有重要作用。细胞凋亡失常（凋亡不足或凋亡过度）参与多种疾病的发生与发展[1]。近年研究发现砷（Arsenic，一种细胞原浆毒）对机体的损伤与细胞凋亡有密切的关系。现将细胞凋亡相关基因及砷对细胞凋亡的影响综述如下。1细胞凋亡与细胞坏死1972年Kerr等人[2]首先提出了细胞凋亡的概念，根据细胞的死亡模式，细胞死亡可分为两类：细胞凋…     

氟对人牙乳头间充质细胞及分泌碱性磷酸酶活性的影响

为了明确氟对人牙乳头间充质细胞和分泌碱性磷酸酶活性的影响 ,体外培养人牙乳头间充质细胞 ,给予不同浓度氟处理 :0 μmol,10 μmol(0 .2× 10 - 6 g/ L) ,5 2 μmol (1.0× 10 - 6 g/ L) ,2 6 3μmol(5 .0× 10 - 6 g/ L) ,1315 μmol (2 5×10 - 6 g/ L) ,2 6 30 μmol(5 0× 10 - 6 g/ L) ,用四唑盐比色法 (MTT法 )测定细胞活力 ,酶联免疫法检测碱性磷酸酶活性 ,结果显示 ,当氟浓度为 2 6 3μmol时 ,培养 2 4 h后 ,细胞活性明显抑制 ,AL P活性无明显改变 ;当氟浓度为 1315 μmol和2 6 30 μmol时 ,培养 12 h细胞活性明显抑制 ,分泌的 AL P活性升高 ,培养 72 h时 2 6 30 μmol氟浓度组几乎无活细胞 ,而AL P活性仍较对照组高 ,由此提示 ,氟作用于人牙乳头细胞时 ,细胞活性与 AL P活性升高不一致     

三维适形放疗同步联合卡培他滨治疗直肠癌的疗效观察

目的观察三维适形放疗同步联合卡培他滨治疗直肠癌的临床疗效。方法选取2010年1月~2011年1月我院治疗的晚期直肠癌患者60例,将入选的60例患者中应用三维适形放疗同步联合卡培他滨治疗治疗的32例患者设立为观察组,将其与28例单纯进行放疗治疗患者设立为对照组,比较两组的临床总有效率、疾病控制率、局部复发率、远处转移率、毒副反应发生率。结果治疗4个周期后,观察组的临床总有效率为53.1%,对照组为28.6%,两组疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的疾病控制率为90.6%,对照组为67.9%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的局部复发率、远处转移率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三维适形放疗同步联合卡培他滨治疗直肠癌疗效确切,安全性好,可以降低复发率及远处转移率,值得广泛推广和应用。     

氟中毒患者COLIXA3基因多态性观察

目的 观察氟中毒患者COLIXA3基因多态性,探讨COLIXA3基因在地方性氟中毒发病机制中的作用.方法 在山西省忻州市,选取51例饮水型氟中毒患者作为病例组,28例健康居民作为对照组,用Dean法检测氟斑牙,X线拍片检测氟骨症,PCR法扩增血清COLIXA3第5外显子103位点基因产物,测序后分析该基因位点的基因型.结果 病例组51例患者中检出轻度氟斑牙10例,中度氟斑牙14例,重度氟斑牙15例,对照组无氟斑牙检出.病例组51例患者均有不同程度氟骨症表现,以骨质硬化型损害为主,占86.27％(44/51),且轻度氟骨症患者均为骨质硬化型损害,而中度和重度氟骨症患者表现为骨质硬化型和混合型损害;对照组未见氟骨症发生.病例组COLIXA3基因第5外显子103位点AA、Aa、aa 基因型分布频率[96.08％( 49/51)、3.92％(2/51)、0.00％(0/51)]与对照组[96.43％(27/28)、3.57％(1/28)、0.00％(0/28)]比较,差异无统计学意义(x2=0.94,P＞ 0.05).结论 COLIXA3基因第5外显子基因多态性与氟中毒的发生未见明显关联.     

高氟区改水后氟骨症患者肺功能调查

目的了解高氟区改水后不同程度氟骨症患者的肺功能的损害。方法选新疆氟病区轻、中、重不同病情的氟骨症患者65例和非病区正常对照组23名,对所有调查对象的肺功能进行检测。结果病例组 MMEF%、MEF75%、MEF25%、FEV_1/FVC 等指标与对照组相比均有不同程度降低,且有统计学差异(P<0.05);对各组进行两两比较,轻度和重度组 MMEF%、MEF50%有统计学差异(P<0.05),重度组的 FEV_1/FVC 低于其他3组且有统计学差异(P<0.05),重度组和中度组的 MEF75%低于轻度组且差异有统计学意义(P<0.05)。结论氟骨症患者的肺功能在改水降氟18年后仍然出现一定程度的损伤,其程度随氟骨症病情的加重而加重。建议可将 MMEF%、MEF75%、MEF25%、FEV_1/FVC 等指标列为氟骨症患者肺功能监测的首选指标。     

地方性氟中毒患者外周血淋巴细胞细胞周期的实验研究

目的运用流式细胞术研究氟对人体外周血淋巴细胞细胞周期分布的影响。方法从病情程度不同的氟中毒患者和正常对照者外周血中分离淋巴细胞,用缓冲液和溶血素清洗和去除杂质后,调整细胞数约3×1012细胞/L,PI染色使细胞核发射出荧光,用FACSCaliburTM流式细胞分析仪检测淋巴细胞细胞周期分布、DNA相对含量和细胞增殖力。结果氟中毒患者与正常对照者相比,外周血淋巴细胞细胞周期分布差异无统计学意义(FG0/G1=0.84,P=0.4755;HS=4.06,P=0.2550;HG2/M=4.47,P=0.1881),并且淋巴细胞增殖指数和DNA相对含量差异亦无统计学意义(FPI=0.8369,P=0.4776;FDNA=0.3867,P=0.7629)。结论地方性氟中毒患者体液中的含氟量,尚不足以引起外周血淋巴细胞细胞周期的改变。提示氟对细胞周期的影响可能既存在周期依赖性,又有种属特异性以及剂量效应关系存在。