变性高效液相色谱法在肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用

目的：目的对4个肾上腺脑白质营养不良（ALD）家系进行基因突变分析。方法：应用变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测了4个ALD家系的A／3091基因，并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果：所有患儿的母亲，患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的PCR产物混合物。均出现DHPLC洗脱双峰。而正常对照均为单峰，提示相应基因片段存在突变位点。上述出现异源双峰的PCR产物经直接测序．证实了相关突变的存在：患儿1母亲为fs Glu 471突变携带者；患儿2存在S108X突变；患儿3存在R617C突变；患儿4弟弟和表弟均存在A141T突变。结论：DHPLC能有效地检测ABCD1基因突变。并为进—步地基因突变筛查与产前诊断提供依据。     

NADH-细胞色素b5还原酶突变型的原核表达及产物纯化

遗传性高铁血红蛋白血症（RCM）是一种常染色体隐性遗传性疾病。通常是由患者的NADH-细胞色素b5还原酶（b5R）缺陷所致。近年来通过对该病的患者进行生物化学、免疫学及分子生物学研究。共发现6种新的突变基因型（R57Q，L72P、C203Y、R60H、M176T和P264L）。为了探讨b5R基因突变引起RCM的分子病理机制，研究突变型b5R蛋白结构和功能的关系，我们构建了野生型pGST-b5R和突变型pGST—b5RL72P表达载体，并在大肠杆菌中表达，获得了纯化的GST—b5R和GST—b5RL72P蛋白，为研究该突变对b5R酶的影响打下了基础。     

肾上腺脑白质营养不良的产前分子诊断

肾上腺随白质营养不良（adrenoleukodystmphy，ALD）是一种主要侵犯大脑白质、肾上腺等器官的X-连锁隐性遗传病。根据临床表现和发病时间，可将ALD分成儿童随型、肾上腺脊髓神经病型等7种表型。各型的共同特征是极长链饱和脂肪酸（very long chain fatty acids,VLCFA）在体内蓄积，引起大脑白质脱髓鞘、肾上腺功能不全等病理改变。其致病基因定位于染色体xq28，称ABCD1基因。ALD的病程呈进行性发展，预后不良，尤以儿童大脑型为甚，患者发病后的平均生存时间仅为3年左右。到目前为止，对ALD尚无效果确切的治疗手段，也无法逆转中枢神经系统损害。因此，对ALD携带者所怀胎儿进行产前诊断。防止携带ABCD1突变的婴儿出生，提高人口素质，有重要的意义。我们于2003年和2004年分别对2个ALD家系实施了产前分子诊断。     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症患者中一个新的突变基因型的鉴定

目的：报道一例遗传性高铁血红蛋白血症患者还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素b5还原酶（b5R）基因突变情况.方法：采用逆转录-聚合酶链反应产物直接测序法,分析遗传性高铁血红蛋白血症患者b5R基因的 cDNA 全部编码序列;PCR 结合限制性内切酶（PvuⅠ和AfaⅠ）酶切,分析患者和她的家庭成员b5R基因组DNA扩增片段.结果：两个b5R等位基因中,一个存在M176T（ATG→ACG）突变,另一个存在C203Y（TGC→TAC）突变,其中M176T（ATG→ACG）为新发现的b5R基因突变.结论：本研究鉴定的M176T/C203Y复合杂合子突变是该遗传性高铁血红蛋白血症患者的致病基础.     

三个肾上腺脑白质营养不良家系的产前分子诊断

目的对3名来自不同家系的肾上腺脑白质营养不良(ALD)携带者所怀胎儿进行产前分子诊断。方法在采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,分别应用变性高效液相色谱和DNA测序方法对3个胎儿的羊水基因组DNA进行分析。结果胎儿1和携带者1的分析结果完全一样,均出现洗脱双峰,并经DNA测序证实,该胎儿为S108X突变携带者；胎儿2、胎儿3和正常对照一致,均为洗脱单峰,经DNA测序证实,这两个胎儿的基因组DNA上均不存在基因突变(R617C突变和1801．02del AG突变)。结论胎儿1带S108X突变,为ALD携带者；胎儿2不带R617C突变,为正常纯合子；胎儿3不带1801—02del AG突变,为正常半合子。     

中国肾上腺脑白质营养不良患者中一个新的ABCD1基因突变的鉴定

目的鉴定并分析1个新的肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变类型和位点.方法采用长链RT-PCR技术,从外周血提取总RNA并合成cDNA,以cDNA为模板,分4个片段扩增致病基因编码区,将纯化后的PCR产物直接测序,找出基因突变的位点.同时应用限制性酶切分析的方法,分析发病家系所有成员的基因组DNA,以证实所发现的突变.结果患者肾上腺脑白质营养不良基因外显子2上的第343位密码子发生了GGC→GTC改变,使原来编码的甘氨酸被缬氨酸(G343V)取代;患者母亲为G343V突变携带者,患者哥哥的基因型和患者完全相同,其父亲为正常基因型.结论在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现一个新的ABCD1基因突变,即G343V突变.     

射频治疗Ⅰ、Ⅱ期内痔712例报告

内痔是一种常见病 ,目前临床上有多种治疗方法。其中 ,射频治疗内痔的机制是通过电磁波作用使肛垫内组织形成内生热效应 ,引起痔区无菌性炎症反应 ,使血管变性狭窄、闭塞 ,痔核供血减少而达到止血 ;同时使血管周围组织纤维增生 ,肛垫与直肠壁组织粘连固定 ,从而达到消除内痔脱出的目的。我院从 1999年 2月至 2 0 0 0年 8月用该法治疗了 1113例内痔病人 ,取得了令人满意的疗效。本文重点对 712例Ⅰ、Ⅱ期内痔采用射频治疗的结果进行评估。1　资料和方法本组男 4 85例 ,女 2 2 7例 ,年龄 16～ 82岁 ,平均 4 4 7岁。Ⅰ期 32 7例 ,Ⅱ期 385例。…     

沉默CHOP基因降低衣霉素诱导的小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡

目的构建有效针对小鼠C/EBP同源蛋白(CHOP)的shRNA真核表达载体,基因沉默后对Hepa 1-6细胞凋亡的影响。方法设计合成针对CHOP的shRNA靶序列及无同源性的shRNA序列作为阴性对照,退火后重组入p LKO.1-TRC载体,转化扩增后进行快速双酶切鉴定;慢病毒包装法转染293T细胞获得的病毒上清转染Hepa 1-6细胞,用含嘌呤霉素的培养基连续筛选10获得稳定株,Western blot检测Caspase9和c-PARP蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期。结果各shRNA载体构建成功;与阴性对照组相比,sh CHOP组能显著抑制CHOP蛋白的表达(P0.05);且CHOP基因沉默后明显降低了衣霉素诱导的细胞凋亡(P0.05)。结论 CHOP基因沉默能减缓衣霉素诱导内质网应激产生的Hepa 1-6细胞凋亡。     

肠杆菌科136株细菌对4种β内酰胺酶抑制剂复方制剂的敏感性

目的：检测肠杆菌科细菌对4种加酶抑制剂抗生素的敏感性，并与青霉素类、第三代头孢菌素类、头霉素类、单环β内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类药物作比较；同时检测肠杆菌科细菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs)的情况。方法：采用K－B琼脂扩散法对136株肠杆菌科临床分离菌株作药敏试验，同时用美国临床实验室标准委员会（NCCLS）所推荐的ESBLs确证试验对其进行ESBLs检测。结果：4种β内酰胺类抗生素加入酶抑制剂后对肠杆菌科细菌的抗菌作用明显提高，肠杆菌科细菌对头孢哌酮－舒巴坦的敏感率最高，对其余3种复合抗生素敏感率高低不一；17种抗菌药中对肠杆菌科细菌具有较高抗菌作用的5种为亚胺培南、头孢哌酮－舒巴坦、阿米卡星、头孢西丁、哌拉西林－三唑巴坦；大肠埃希菌产ESBLs率为34．3％，肺炎克雷伯菌产ESBLs率为35．1％。结论：4种加β内酰胺酶抑制剂的抗生素中，以头孢哌酮－舒巴坦对肠杆菌科细菌的抗菌作用最强，肠杆菌科细菌对其的敏感性高于头霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类等药物，但低于亚胺培南。     

变性HPLC法在肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用

目的 对4个肾上腺脑白质营养不良（ALD）家系进行基因突变分析。方法 应用变性HPLC技术检测了4个ALD家系的ABCD1基因，并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果所有患儿的母亲，患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的PCR产物混合物，均出现变性HPLC洗脱双峰，而正常对照均为单峰，提示相应基因片段存在突变位点。上述出现异源双峰的PCR产物经直接测序，证实了相关突变的存在：患儿1母亲为fs Glu471突变携带者；患儿2存在S108X突变；患儿3存在R617C突变；患儿4弟弟和表弟均存在A141T突变。结论 变性HPLC能有效地检测ABCD1基因突变，并为进一步地基因突变筛查与产前诊断提供依据。