H5N1型流感病毒M2蛋白全长编码基因的克隆与原核表达

目的:构建H5N1流感病毒基质蛋白M2基因的原核表达系统,为研究其在体液免疫中的作用奠定物质基础。方法:应用PCR方法从流感病毒H5N1cDNA中扩增出M2的全基因序列,插入至表达质粒载体pGEX6P-3上,构建重组原核表达质粒pGEX-6p-3/M2。重组质粒经测序分析确认后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达M2蛋白后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western Bloting分析。结果:PCR扩增的M2基因长度为297bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因与GeneBank公布的序列相似性达100%;SDS-PAGE和Westem Bloting分析显示,经IPTG诱导出分子质量为37.2 KD的目的蛋白。结论:成功构建了H5N1流感病毒基质蛋白M2原核表达载体pGEX-6p-3/M2,并在大肠杆菌中获得表达。     

心胸外科患儿术后营养状况分析及护理对策

目的分析心胸外科患儿术后营养状况,探讨其护理对策。方法将2012年2月~2013年2月共200例心胸外科手术后患儿纳入本研究。根据年龄分为0~3岁组、3~6岁组和6~12岁组。营养状况研究指标包括患儿的体重指数(BMI)、血红蛋白(Hb)、T淋巴细胞(TLC)及白蛋白(Alb)。护理对策为给患儿进行营养支持模式的个体化给予,对症支持,不同营养方式联合应用。结果0~3岁、3~6岁和6~12岁3组之间术后的BMI、Hb、TLC和Alb差异均有统计学意义(均P0.05)。Hb、TLC、Alb的数据与鼻饲、输入白蛋白均有相关性(均P0.05)。结论心胸外科患儿术后营养支持需严格遵从医嘱,及时观察患儿的生命体征、体重,以及呼吸系统、循环系统、消化系统的功能,给予个体化营养护理。     

人心肌肌钙蛋白I的原核表达及其兔抗体的制备

目的:构建人心肌肌钙蛋白I(hcTnI)基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达后,并制备兔抗hcTnI抗体。方法:以化学方法合成hcTnI基因并插入融合表达载体pET21a( )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET21a( )hcTnI。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,筛选阳性重组子,经IPTG诱导目的蛋白的表达,表达产物的免疫学活性用Westernblot进行鉴定。以表达的hcTnI蛋白免疫家兔,制备抗hcTnI的抗体并进行纯化及特性鉴定。结果:成功地合成hcTnI基因,测序证实序列正确后亚克隆于表达载体pET21a( )中,经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,序列分析表明其中的插入序列与cTnI基因完全一致。在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为24000的目的蛋白,约占菌体总蛋白的28%,Westernblot分析显示,表达的hcTnI蛋白具有良好的免疫反应性。以纯化的hcTnI免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价为3×10-4,且具有良好的特异性。结论:成功地构建hcTnI基因的原核表达载体pET21a( )hcTnI,并在大肠杆菌中获得高效表达。制备出兔抗hcTnI的抗体,且效价及特异性均较良好,为进一步建立酶联免疫吸附法检测hcTnI奠定了基础。     

1例术前自体血小板凝胶联合全血的预存应用

血小板凝胶是富含血小板的血浆被激活形成的凝胶物质.它不仅具有加速止血、封闭创面的特点,而且含有丰富的生长因子,能加速创面愈合、加快骨的生长,因而成为近年来医学研究的热点.自体输血不但可以避免输注异体血的免疫反应,还可以节约血液资源,更重要的是排除了输血性传染病的发生[1].     

唑来膦酸对女性骨质疏松症的疗效及其对骨标志物的影响

目的探讨唑来膦酸注射液(密固达)对女性不同原因所致骨质疏松的临床疗效及其对骨代谢标志物的影响。方法回顾性分析2012年4月至2016年7月在长海医院风湿免疫科接受唑来膦酸治疗的119例女性骨质疏松症患者,根据病情分为原发性骨质疏松组和继发性骨质疏松组,其中原发性骨质疏松组66例,年龄52~87岁,平均69.8±9.6岁;继发性骨质疏松组53例,年龄51~82岁,平均66.1±8.4岁;原发性骨质疏松组患者发病年龄高于继发性骨质疏松组患者(P0.05),两组患者在陈旧性骨折史、血钙、血磷、BUN、Cr、骨代谢标志物、骨密度等方面差异均无统计学意义。所有患者均接受每年1次5mg唑来膦酸,联合骨化三醇0.25μg/日和600 mg碳酸钙D3片/日治疗1年。比较两组患者治疗前和治疗1年后腰椎和髋部骨密度及骨代谢相关指标,观察患者药物不良反应和新发骨折情况。结果与治疗前比较,原发性骨质疏松组患者治疗1年后腰椎和髋部骨密度值均明显增加(P0.05或0.01);骨代谢标志物P1NP、β-CTX、N-MID水平均明显下降(P0.01),25羟基维生素D水平明显升高(P0.01)。继发性骨质疏松组患者治疗1年后腰椎(L_2、L_3、L_4、L_(1-4))、髋部大粗隆和髋部平均骨密度值均明显增加(P0.05或0.01),骨代谢标志物P1NP、β-CTX、N-MID水平均明显下降(P0.01)。治疗1年后,继发性骨质疏松组患者N-MID明显低于原发性骨质疏松组(P0.01),两组间腰椎、髋部骨密度值及骨代谢标志物P1NP、β-CTX、25羟基维生素D、PTH水平无明显差异。两组患者治疗前后的血钙、血磷、BUN、Cr水平均无明显变化。治疗期间两组均无新发骨折。原发性骨质疏松组患者出现2例发热,继发性骨质疏松组3例发热,两组患者不良反应发生率无差异。结论唑来膦酸治疗不同原因导致的女性骨质疏松患者能够有效改善骨代谢标志物水平,降低骨吸收,显著提高腰椎、髋部的骨密度,降低骨折风险,不良反应少。     

治疗脾虚泄泻验案一则分析

泄泻是指排便次数增多、粪便稀溏或完谷不化,甚至泻出如水样的一种病症,病机基础为脾虚湿盛,病位在肠,主病之脏为脾,与肝、肾密切相关。脾主运化水湿,运化失常则生湿,湿盛则濡泻;脾主升清,清阳不升,清气在下则发为泄泻,本文介绍根植于脾虚,从健脾除湿、疏肝理脾、升阳举陷角度治疗脾虚泄泻验案一则的心得体会。     

多功能子宫腔探测喷灌器制作与临床应用的研究

目的探讨多功能子宫腔探测喷灌器的研制及临床应用效果。方法采用随机分组方法将600例研究对象分为三组,每组200例,应用多功能子宫腔探测喷灌器喷灌麻醉药物为I组;宫旁注射浸润麻醉为Ⅱ组;术前不用任何药物直接行人工流产术为Ⅲ组。比较三组手术时扩张子宫颈的疼痛程度、吸刮子宫腔时的疼痛程度、术中的出血量、术中无阻力通过宫颈口扩张器的号数。结果术中扩张子宫颈的疼痛程度I组、Ⅱ组均轻于Ⅲ组（P均〈0．01）,I组、Ⅱ组间差异无统计学意义（P〉0．05）;吸宫时的疼痛程度I组轻于Ⅱ组、Ⅲ组（P均〈0．05）,Ⅱ组与Ⅲ组间差异无统计学意义（P〉0．05）;术时出血量三组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;术中无阻力通过宫颈口扩张器的号数I组、Ⅱ组少于Ⅲ组（均P〈0．05）,I组与Ⅱ组间差异无统计学意义（P〉0、05）。结论临床应用多功能子宫腔探测喷灌器喷灌麻醉药物,具有麻醉作用快、镇痛作用强、术中用药、经济、实用、安全、有效等优点。是值得临床推广的新器械。     

声脉冲辐射力成像技术联合肝纤维化指标评估肝硬化程度的诊断价值

目的:探讨声脉冲辐射力成像技术(ARFI)联合肝纤维化指标评估肝硬化程度的诊断价值.方法:选取本院90例肝硬化患者作为观察组,按照Child-Pugh(CP)评分对患者肝硬化程度进行分级;选取45例健康体检者作为对照组.检测所有研究对象的肝纤维化4项指标:透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),并行ARFI技术检测,测得肝实质硬度值(LS).观察不同CP评分分级的LS值与肝纤维化4项指标(HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C),采用受试者操作特征(ROC)曲线分析LS值与血清肝纤维化4项指标单用或联用对肝硬化的诊断价值.结果:观察组CP评分A、B、C三级患者的LS值和血清肝纤维化4项指标水平均明显高于对照组,且C级＞B级＞A级,差异均具有统计学意义(P＜0.05).CP评分与LS值、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C均呈正相关(r=0.782,P＜0.01;r=0.147,P＜0.05;r=0.485,P＜0.01;r=0.421,P＜0.01;r=0.262,P＜0.05).ROC曲线显示:不同CP等级的LS值的AUC均高于血清肝纤维化4项指标;而LS值与血清肝纤维化4项指标联用对不同CP等级肝硬化诊断的AUC、敏感性及特异性均高于其单用.结论:ARFI检测的LS值联合血清肝纤维化4项指标对肝硬化程度的诊断效能较高,具有重要的临床应用价值.