TGFβ1对照射的人肺成纤维细胞细胞周期的影响及其信号转导机制

目的 :检测转化生长因子β1(TGFβ1)对正常及γ射线照射的人肺成纤维细胞 (HLF)的增殖活力及细胞周期的影响 ,并初步探讨其信号转导机制。方法 :培养HLF ,经 3Gyγ射线照射后 ,应用 0 .0 1、0 .1、1和 10 μg/L的TGFβ1处理。采用MTT比色法、DNA倍体分析、免疫酶 /荧光细胞化学及流式细胞仪蛋白质分析等方法 ,检测细胞增殖活力、细胞周期的变化 ,以及信号蛋白Smad3和Smad4表达的变化。结果 :γ射线照射的HLF经 10 μg/L的TGFβ1处理后 ,其增殖活力增强 ,处于S期的细胞增多 ,信号蛋白Smad4发生核转位 ,同时信号蛋白Smad3表达增加。结论 :一定剂量的TGFβ1可通过调控γ射线照射的HLF的细胞周期促进其增殖 ,这可能与其Smad通路的活化相关     

离体灌流大鼠心脏的pH反常

心肌缺血-再灌注损伤的发病机理迄今尚未完全阐明,近年发现再灌注时迅速纠正缺血组织的酸中毒是促进心肌损伤加重的重要因素之一,称为pH反常,因而缺血组织能量代谢障碍与再灌注损伤之间     

大鼠放射性肺损伤进程中PAI-1、P21WAF1/CIP1、α-SMA和PCNA表达的变化及意义

目的探讨I型组织纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、P21WAF1/CIP1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及细胞增殖核抗原(PCNA)在大鼠放射性肺损伤中表达的变化及意义。方法采用25Gy60Coγ射线全胸照射二级雄性Wistar大鼠60只,复制大鼠放射性肺损伤动物模型,分别于照射后1d,1w,1m和3m活杀取材,采用免疫组化SP法检测PAI-1、P21WAF1/CIP1、α-SMA和PCNA在该病进展过程中表达的变化并对前三者的积分光密度和PCNA胞核阳性细胞数定量分析。结果 PAI-1表达于支气管上皮细胞和平滑肌细胞、血管壁平滑肌细胞、成纤维/纤维细胞等间质细胞胞浆,照射后1m和3m表达显著增强,除上述部位外,还见于渗出区巨噬细胞胞浆。P21WAF1/CIP1表达于支气管上皮细胞和平滑肌细胞、血管平滑肌细胞、成纤维/纤维细胞等间质细胞、巨噬细胞胞浆,照射后1w、1m和3m阳性细胞减少,表达减弱。正常肺组织中α-SMA表达于支气管壁和血管壁平滑肌细胞胞浆,照射后1w和3m,除上述表达部位外,肺间隔内可见大量强阳性细胞。PCNA阳性细胞数(主要为成纤维细胞、巨噬细胞等)于照射后1m显著增加,照后3m增加至正常的6倍。结论 PAI-1、PCNA和α-SMA的表达随着放射性肺损伤病变进展而增强,表明成纤维细胞等细胞成分的增殖和活化在放射性肺损伤过程中发挥重要作用,提示上述指标有可能作为放射性肺损伤进程的标志物。     

吸入一氧化氮防治放射性间质肺炎疗效观察

目的　观察吸入一氧化氮对放射性间质性肺炎的防治效果 ,以期探索防治放射性肺炎的新措施。方法　建立放射性肺纤维化动物模型 ,分别在照前 1d(B和C组 )及照后 1个月 (D和E组 )开始吸入NO ,每种方式均持续治疗 1个月 ,NO吸入浓度为 2 0× 10 - 6 (B和D组 )和 10× 10 - 6 (C和E组 )两个剂量 ,单纯照射组 (A组 )和正常对照组 (F组 )不加任何处理。分别于照射后 1d、1周、1个月、3个月和 6个月取材观察。结果　动物死亡率B组 (10 % )和C组 (5 % )低于其他各组 ;照射后1个月 ,肺重与体重之比B组和C组低于A组 (P <0 0 5 ) ;照后 6个月 ,A组呈现局灶性纤维化 ;B和C组主要在肺叶顶部可见局灶性增生和轻度纤维化病变 ;D和E组可见有较大面积的增生灶 ,主要集中在肺叶顶部。结论　照射前吸入NO明显减轻放射性急性间质肺炎的发生及其病变程度 ,降低动物死亡率 ,延缓和减轻肺纤维化发生的时间和程度 ,而照射后吸入NO此种作用较弱     

CTGF表达在大鼠放射性肺纤维化中的作用

目的本研究结合体内外实验探讨CTGF在放射性肺纤维化(RPF)发生过程中的作用及与α-SMA之间的相互关系。方法应用MTT比色法检测^60Coγ射线照射对人肺成纤维细胞(HLF)的促增殖作用，用Western blot法观察CTGF和α-SMA在HLF中的表达，苦味酸-天狼星红偏振光显微镜法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增减变化，免疫组织化学图像分析观察CTGF和α-SMA在RPF过程中的表达变化。结果体外实验显示，5Gy^60Coγ射线照射能促进HLF增殖，并转化成肌成纤维细胞(MFb)；CTGF蛋白合成增加，12h达高峰；α-SMA蛋白合成增加，48h处于高峰状态。体内实验显示，照射后1-3个月大鼠肺组织有少量胶原产生，以Ⅲ型胶原为主；6个月肺组织大量胶原产生。以Ⅰ型胶原为主；CTGF于照后1周在增生的大鼠肺Fb中开始合成，随照后时间延长而逐渐增强．3个月时最明显。照后1周可见增生的MFb中有α-SMA表达，随照后时间延长逐渐增多，3个月时达高峰。结论照射能诱导CTGF表达增高，后者能促进肺Fb向MFb转化，增强合成和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原的能力，参与了放射性肺纤维化的发生发展。     

离体灌流大鼠心脏的pH反常损伤

心肌缺血-再灌注(I-R)损伤的发病机理迄今尚未完全阐明,近年发现再灌注时迅速纠正缺血组织的酸中毒是促进心肌损伤加重的重要因素之一,称为pH反常。本实验在离体灌流的大鼠心脏模型上观察低pH液灌流后用不同pH液再灌注对心脏的影响。     

电磁脉冲对大鼠海马突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)照射后大鼠海马组织中突触可塑性相关蛋白的表达情况。方法以EMP 6×104V.m-1照射Wistar大鼠,用Western blot蛋白印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经细胞黏附分子(neural celladhesion molecule,NCAM)的表达。结果EMP照射后6 h,海马BDNF的表达与对照组相比增长了25.8%(P<0.05),之后呈缓慢回降趋势;照射后7 d再度升高,与对照组相比增长了32.2%,(P<0.05)。EMP照射后6~12 h,海马NCAM的表达与对照组相比增长了8.1%(P<0.05),3 d后回降,与对照组相比减少了10.8%(P<0.05),照射后7 d再度升高,与对照组相比增长了14.1%,(P<0.05)。结论EMP照射后早期,海马BDNF和NCAM的上调,可能介导了突触可塑性的正向改变。