血小板衍生生长因子C对体外培养的人卵巢透明细胞癌细胞的增殖和趋化作用

 目的 观察血小板衍生生长因子-C(platelet-derived growth factor-C,PDGF-C)对体外培养的人卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)ES-2细胞的增殖和趋化作用。方法 体外培养ES-2细胞,添加不同浓度的PDGF-C进行干预,应用CCK8试剂盒法评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果 与未加PDGF-C的对照组相比,PDGF-C能明显刺激ES-2细胞的增殖,在第4天增殖达高峰,PDGF-C促增殖最佳作用浓度是20 μg/L;经不同浓度PDGF-C的刺激,处于细胞周期G1期的ES-2细胞比例较对照组明显降低(P<0.05),处于S期的ES-2细胞比例显著升高(P<0.05),而处于G₂+M期的细胞比例则无明显变化(P＞0.05)。同时,PDGF-C提高了ES-2细胞的迁移能力。结论 PDGF-C可促进体外培养的ES-2细胞的增殖、迁移能力。     

兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(rBMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势. 方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养rBMMSCs,采用简单制备方法构建rBMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察, MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况. 结果:成功分离rBMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉. 镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的rBMMSCs;RT-PCR结果显示,与rBMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn.结论:rBMMSCs细胞膜片相比普通培养的rBMMSCs,在组织工程应用中更具优势.     

人诱导多能干细胞体外多向分化能力的方法验证

 目的 探讨人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)体外多向分化能力的方法。方法 iPSC通过形成拟胚体(embryonic body, EB)的阶段,将其诱导为间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)样细胞,倒置显微镜下观察诱导过程中细胞形态的变化,流式细胞术检测iPSC来源的MSCs(iPS-MSCs)表面标志物的表达,并进一步将iPSC-MSC诱导为成骨、软骨细胞;或直接EB接种,将其诱导成神经细胞。通过上述方法验证iPSC的多向分化能力。结果 诱导后的 iPSC-MSC 逐渐向外生长变为长梭形; CD29、CD105在 iPSC -MSCs 中表达阳性, 而 CD34、CD45则为阴性; 碱性磷酸酶、甲苯氨兰染色结果表明iPSC -MSCs 具有成骨、成软骨的能力;iPSC亦可直接从EB阶段诱导成神经细胞。结论 通过上述方法,可成功诱导iPSC 为成骨、成软骨、成神经细胞,为 iPSC进一步的研究与应用提供了技术基础。     

小鼠核心结合因子1成熟肽编码区的cDNA克隆和序列测定

目的：研究核心结合因子1（cbfal)在小鼠牙胚组织中的表达，扩增cbfal成熟肽编码区的特异性片段，构建重组质粒，为进一步的蛋白表达、抗体制备、基因转染等研究奠定基础。方法：提取新生小鼠的颅骨、牙胚、肝脏组织总RNA，反转录为cDNA后进行PCR反应，构建pGEM-cbfal重组质粒并测序。结果：从小鼠颅骨和牙胚组织中均获得了约1791bp的目的片段，牙胚来源的PCR产物的测序结果证实成功地克隆到了cbfal成熟肽编码区，酶切结果显示重组质粒构建成功。结论：新生小鼠的牙胚组织中有cbfal基因的表达。     

DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导,并对诱导后细胞进行DSP、DMP1表达的检测。结果大鼠牙髓干细胞DMP1仅个别细胞阳性表达,DSP少量细胞阳性表达,CBFA1、BMP2为阳性染色。经矿化液诱导后,大鼠牙髓干细胞DSP染色出现部分细胞强阳性,DMP1出现阳性结果。结论CBFA1、BMP2阳性表达表明大鼠牙髓干细胞具有一定的未成熟性,而经过诱导后出现牙本质特异性DSP的表达,表明大鼠牙髓干细胞可以被诱导向成牙本质细胞方向分化。     

大鼠牙髓干细胞可塑性研究

目的:研究大鼠牙髓干细胞向脂肪、神经、肌肉三个方向的横向分化能力。方法:采用地塞米松、IBMX、牛胰岛素和indomethacin对大鼠牙髓干细胞进行程序诱导,RT-PCR和油红O染色方法进行检测;采用bFGF和RDPSCs对大鼠牙髓干细胞进行诱导,RT-PCR方法进行检测;采用5-azacytidine对大鼠牙髓干细胞进行诱导,免疫组织化学染色和RT-PCR的方法进行检测。结果:经脂肪细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞出现脂肪细胞特异性PPARg阳性表达,油红O染色出现阳性脂滴颗粒;经神经细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的神经细胞特异性nestin表达;经肌细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的肌细胞特异性MHC表达,免疫组织化学染色肌动蛋白表达阴性。结论:大鼠牙髓干细胞经过一定的诱导后,可以向脂肪细胞方向分化,具有一定的可塑性;在常规诱导条件下,大鼠牙髓干细胞不能向神经、肌肉方向分化。