体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

汉滩病毒感染EA.hy926细胞上调固有免疫相关分子表达的研究

目的　探讨汉滩病毒（hantaan virus, HTNV）感染EA.hy926细胞诱导抗病毒固有免疫相关分子的表达,为建立HTNV感染的细胞模型提供依据。方法　将HTNV感染EA.hy926细胞,利用间接免疫荧光和实时荧光定量PCR技术于不同感染时间段,检测EA.hy926细胞中模式识别受体、细胞因子及抗病毒相关分子的mRNA表达水平。结果　HTNV感染EA.hy926细胞后,随着感染时间的持续,核蛋白mRNA相对表达倍数显著上调,且不同感染时间段差异具有统计学意义（P＜0.05）;与未处理组相比,HTNV感染EA.hy926后,Toll样受体3、RIG-I和MDA5模式识别受体mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,IL-6、IL-10、IFN-β和CCL5细胞因子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,ISG15、MxA、OAS1、IFITM1和IFITM3抗病毒相关分子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）。结论　HTNV感染EA.hy926细胞后,可上调抗病毒固有免疫相关分子的表达,该细胞可以作为体外HTNV感染的细胞模型。     

Toll样受体-4小干扰RNA预处理防治小鼠急性肝损伤

目的 观察Toll样受体(TLR)-4小干扰RNA(siRNA)对D-氨基半乳糖盐酸盐/月旨多糖(D-GalN/LPS)诱导的肝损伤小鼠的保护作用.方法 150只雄性C57BL/6小鼠均分为PBS预处理组、阴性对照质粒预处理组、TS4预处理组、TS6预处理组和TS7预处理组.腹腔内联合注射LPS(10 ng/g)及D-GalN(1 mg/g)诱导小鼠急性肝损伤.在D-GalN/LPS联合注射前24及48 h通过尾静脉高压水注射法导人siRNA质粒50 mg/L.末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记术(TUNEL)检测细胞凋亡水平,免疫组织化学法检测肝组织中TLR-4表达,RT-PCR检测TLR-4、TNF-α及巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2 mRNA水平,ELISA检测小鼠血清中MIP-2及TNF-α水平,标准自动分析仪检测血清中ALT及AST水平,苏木精-伊红染色观察肝脏组织学变化,Fisher确切概率法比较各组间小鼠存活率.结果 TLR-4 siRNA可减轻肝细胞坏死、减轻炎性反应,并可显著降低血清转氨酶水平.TS4预处理组(0.065±0.015)比PBS预处理组(0.346±0.062)的TUNEL标记指数(LI)明显降低(t=9.796,P<0.05).TLR-4 siRNA预处理下调TLR-4 mRNA及蛋白表达水平,显著降低TNF-α及MIP-2 mRNA表达及细胞因子水平,显著降低D-GalN/LPS联合诱导的急性肝损伤C57BL/6小鼠的死亡率和肝损伤.结论 TLR-4 siRNA抑制TLR-4表达在防治肝损伤方面可能具有潜在应用价值.     

TH1/TH2在慢性乙型肝炎发病机制中的作用

目的：研究Th1/Th2变化在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法：采用双抗体酶联分析法检测了20例正常人，30例慢性乙型肝炎患者血清中的IFN－γ，IL－2，IL－4和IL－6的水平。结果：慢性乙型肝炎组Th2类细胞因子（IL－4，IL－6）水平明显高于正常对照组（P＜0．05）,Th1类细胞因子IL－2水平较正常组也增高（P＜0．05），IFN－γ水平轻度增加，但无统计学差异（P＞0．05），结论:Th2类细胞因子水平增高以及由此引起的Th1/Th2比值下降可能与慢性乙型肝炎的病程持续有关。     

DNA测序与线性反向探针杂交法检测HBV P基因耐药突变的比较

目的建立和优化扩增慢性乙型肝炎患者血清HBV P基因的PCR方法,比较DNA测序法与线性反向探针杂交法检测HBV基因突变情况,并对耐药相关基因突变及其意义进行分析。方法采用巢式PCR法扩增93例慢性乙型肝炎患者血清HBV P基因反转录酶区,对PCR产物进行DNA测序,采用Bioedit6．0．5、Seqman TMⅡ、EditSeq TM和MegAlign软件分析结果;同时随机抽取40份血清进行线性反向探针杂交,比较两者的检测结果,并对11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在93份标本中DNA序列测定法检测到碱基突变113个,其中与LAM相关突变50份（53．78％）,与ADV相关突变6份（6．46％）,与LdT相关突变3份（3．23％）,与ETV相关突变3份（3．23％）;在40份血清中与线性反向探针杂交检测结果一致的突变为87．5％（35140）,氨基酸位点一致为98．0％（431／440）。此外,还检测到V84I、S85C、A181S、L229W、N238T等与耐药相关的突变位点。结论应用线性反向探针杂交检测虽然比较快捷,但其价格昂贵且只能检测已知常见的变异位点;建立在巢式PCR基础上的DNA序列测定法敏感性与线性反向探针杂交法相当,两者检测结果有较高的符合率,但似可检出更多的耐药相关突变。     

肾综合征出血热患者降钙素原、白细胞、C反应蛋白的水平及临床意义

目的 探讨降钙素原(procalcitonin,PCT)、WBC及CRP对肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)患者病情严重程度及预后的预测价值.方法 选取2016年10月-2018年7月解放军空军军医大学第二附属医院感染科收治的HFRS确诊患者为研究对象...     

连续性肾脏替代治疗与间断性血液透析在重症肾综合征出血热治疗中的应用

目的回顾性观察连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)与间断性血液透析(intermittent hemodialysis,IHD)在重症肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)患者中的应用。方法依据临床分型标准,将2008年1月—2012年8月在我中心行血液净化治疗的147例重症HFRS患者分为重型组和危重型组;参照中华医学会ICU血液净化指南,对纳入患者行CRRT或IHD治疗,比较2组行CRRT或IHD治疗的病死率、并发症发生率和急性期的实验室指标。结果重型组患者均存活;危重型组患者行CRRT与IHD后的病死率比较差异无统计学意义(P=0.124);危重型组行CRRT的比例明显高于重型组(P0.001)。病程中存在重叠期的重症患者,行CRRT初始治疗的例数明显多于行IHD的例数,但其生存率比较差异无统计学意义(P=1.000)。CRRT组患者病情较IHD组重,其疾病本身的肾外并发症也较IHD组常见。结论 CRRT可广泛应用于危重型HFRS患者的救治。CRRT可有效减轻水负荷,稳定机体的血流动力学状态,将有助于使危重患者平稳地渡过急性期。