头孢曲松对甲基苯丙胺致大鼠伏隔核神经元和谷氨酸转运体改变的影响

目的观察头孢曲松对甲基苯丙胺(METH)急性、亚急性处理时致神经损伤情况的影响,以及对伏隔核中谷氨酸转运体1(GLT1)与囊泡型谷氨酸转运体1(VGLUT1)的变化的影响。方法建立METH急性毒性模型,同时利用谷氨酸转运体调节剂头孢曲松调控谷氨酸转运体的表达,尼氏染色实验观测神经元中尼氏小体的变化,利用Western blot实验检测其谷氨酸转运体蛋白表达的变化。结果 METH急性给药组与盐水对照组相比,刻板行为明显增加(P<0.01),尼氏小体明显减少;伏隔核中GLT1和VGLUT1的表达增加分别为53.7%和102%(P<0.05);头孢曲松预防给药组与METH组相比,大鼠刻板行为明显减少,伏隔核中GLT1的表达增加36%(P<0.05);VGLUT1的表达下调56%(P<0.05);METH亚急性处理后,与盐水对照组相比,伏隔核中GLT1的蛋白表达增加40.9%,VGLUT1蛋白表达增加52.9%;预防给予头孢曲松后,头孢曲松预防给药组与METH组相比,GLT1和VGLUT1蛋白表达差异没有显著性。结论 METH处理导致神经损伤,引起伏隔核中谷氨酸转运体的表达变化;头孢曲松能激活谷氨酸转运体的表达,缓解METH引起的神经损伤。     

感觉神经元特异性受体rMrgD基因的克隆与表达

目的克隆rMrgD基因并于HEK293细胞中表达。方法利用聚合酶链反应技术,从总RNA中扩增出目的基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,构建真核表达rMrgD载体,瞬时转染人胚肾293细胞得到重组质粒表达细胞株。通过免疫荧光和Western印迹检测对表达产物进行鉴定。结果直接和间接免疫荧光实验皆表明rMrgD主要定位于细胞膜上,Western印迹检测证实rMrgD在HEK293细胞主要以单体和二聚体形式存在。结论含有rMrgD基因的重组质粒在人胚肾293细胞中获得表达,主要定位于细胞膜上。本研究为进一步探究rMrgD受体的功能奠定了基础。     

低pH处理对阿片受体激动剂调节cAMP第二信使系统的作用

目的;研究不同的阿片类物质对ｃＡＭＰ第二信使系统不同作用的机制。方法;用低ｐＨ方法失活ＧＳ蛋白,用蛋白竞争法测ＮＧ１０８１－５细胞膜腺苷酸环化酶活性。结果;与二氢埃托啡和埃托啡不同,低ｐＨ处理明显增加吗啡和美沙酮对正常和自身慢性处理细胞的膜ＡＣ活性的抑制作用。     

β内酰胺类药物对吗啡耐受的影响

新近发现阿片类药物的长期应用必然导致胶质细胞的激活，而伴随激活所释放的细胞因子能放大神经元对谷氨酸盐的反应，继而造成阿片类耐受及戒断性痛敏的发生。2005年NATURE的一篇章证明，某些β-内酰胺抗生素（头孢曲松），能抑制谷氨酸引起的兴奋性传递，推迟ALS的发生和发展，提高存活率。也有学研究发现，在吗啡依赖的动物模型中，脊髓及部分脑区谷氨酸转运体GLT-1的表达下凋。提示，吗啡慢性处理可能抑制GLT-1的蛋白合成。而β-内酰胺如是谷氨酸转运体的激动剂，促进谷氨酸的清除，将为预防吗啡耐受及缓解神经源性痛的新药开发提供了一条新的思路。目的：考察β内酰胺类药物对吗啡耐受模型的影响。方法：用小鼠热板法和大鼠热辐射甩尾法测痛，实验分组（n=6）分别为盐水对照组、吗啡对照组、吗啡＋药物不同剂量组，皮下给药，每天三次，比较给药前后动物痛阈的变化。     

用离体兔气管平滑肌建立抗鼻病毒药物的药效学评价模型

人鼻病毒 (human rhinovirus, HRV) 是引起病毒性呼吸道感染的最常见病原体, 目前尚无有效治疗药物。由于HRVs绝大多数血清型仅对灵长类动物易感, 对常用实验动物不感染, 目前多在细胞水平对抗HRVs药物进行筛选与评价, 这对抗HRVs药物的有效性研究明显不足。本文根据HRVs对呼吸道感染的特点, 以离体气管平滑肌 (ASM) 收缩反应变化为评价指标, 建立了可模拟呼吸症状的筛选模型, 在此模型上接种鼻病毒后ASM对于激动剂引发的收缩反应显著增强150%, 舒张反应明显减弱至63%, 而预先加入已经过细胞初筛有效的化合物后, 可显著改善鼻病毒引发的收缩反应异常, 表明所建立的评价模型可用于抗鼻病毒药物的进一步筛选。     

囊泡谷氨酸转运体抑制剂芝加哥天蓝6B的镇痛作用

目的 研究抑制囊泡谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporters,VGLUT)功能对动物疼痛行为的影响。方法分别观察选择性VGLUT抑制剂芝加哥天蓝6B(Chicago sky blue 6B,CSB6B)对小鼠热板潜伏期、醋酸扭体次数和福尔马林所致舔足时间的影响。结果 腹腔注射CSB6B不影响小鼠热板潜伏期。小鼠醋酸扭体实验中,与溶剂对照组相比,CSB6B 2.5mg/kg腹腔注射30 min后可使小鼠扭体次数从26.50±2.97显著下降到8.22±1.90(P<0.01),腹腔注射60 min后可使小鼠扭体次数显著下降到9.60±1.84(P<0.01)。在福尔马林实验中,与溶剂对照组相比,CSB6B不影响小鼠的Ⅰ相舔足时间,CSB6B 0.5 mg/kg腹腔注射30 min后可使小鼠的Ⅱ相舔足时间从(139.40±21.02)s显著下降到(75.10±19.45)s(P<0.05),而注射2 h后对小鼠舔足时间没有显著影响。结论 抑制VGLUT功能可显著抑制炎性疼痛,提示VGLUT参与了炎性疼痛的调控,可能成为疼痛治疗的新靶点。     

棉籽总黄酮抗抑郁活性及其对海马单胺水平的调节

目的:探讨棉籽总黄酮(total flavonoids extracted from cottonseed,CTN-T)的抗抑郁作用及可能的作用机制.方法:在大鼠获得性无助模型上评价CTN-T的抗抑郁作用;采用5-羟色氨酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP)诱导小鼠甩头实验和育亨宾小鼠毒性增强实验分别...     

Mrgs受体及配体在疼痛中的作用

近年来人们在研究伤害感受信号传递途径时,发现了一类新的与疼痛调节有关的受体-Mrgs.编码这些受体的基因与Mas原癌基因具有较高的同源性,故被称作Mrgs(Mas-related genes)~([1]).这些受体选择性地高表达在与痛觉产生和传导密切相关的脊髓背根神经节和三叉神经节的小直径伤害感受神经元上,故又被称作感觉神经元特异性受体SNSRs(sensory neuron-specific receptor)~([2]).     

小鼠源性ABIN1蛋白的抗体制备及功能验证

目的制备小鼠源性A20结合核因子κB活化抑制蛋白1（A20 binding inhibitor of NF-κB activation 1,mABIN1）的多克隆抗体并进行功能验证,利用该抗血清对大鼠脑区ABIN1的分布进行验证。方法利用mABIN1片段与钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）耦联得到的肽段为免疫原,免疫新西兰大耳白兔3次,共35 d,获得抗血清,分别用ELISA、蛋白免疫（Western）印迹和免疫组织荧光化学法对抗体的特异性进行验证;使用上述验证所得的特异性抗血清,通过Western印迹检测ABIN1在大鼠各脑区的分布;对所得到的特异性抗血清进行纯化。Western印迹证明,纯化后的抗体杂带较纯化前明显降低,但效价也有所下降。结果与结论成功制备了兔抗小鼠ABIN1抗血清并对抗血清进行纯化,经该抗血清首次验证ABIN1在大鼠嗅球、皮质、海马、纹状体、伏隔核、丘脑、下丘脑、小脑、脑干及脊髓等中枢神经系统不同部位均有广泛分布,为在动物体内进行ABIN1生物学功能研究提供了有利工具。     

阿片κ-受体和ORL1受体二聚化的初步研究

为探讨κ-受体(κ-opioid receptor,KOR)和阿片受体样受体(opioid receptor like-1 receptor,ORL1 receptor)是否能够形成异源性受体二聚体,在原代培养的大鼠神经元细胞和用带有HA(hemagglutinin,血细胞凝集素)、Myc或Flag标签的KOR和ORL1质粒共同转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾上皮(HEK293)细胞上,采用免疫荧光和免疫共沉淀的方法,研究KOR和ORL1之间的共定位以及是否存在相互作用。结果表明:在原代培养的海马和皮质神经元上,KOR和ORL1的免疫荧光在细胞膜上有重叠。同样,在HA-KOR和Myc-ORL1共同瞬时转染的CHO和HEK293细胞上也有类似的发现。另外,在共同表达Flag-KOR和Myc-ORL1的CHO细胞裂解液中,KOR与ORL1的受体蛋白能够被相互免疫共沉淀。这些研究结果提示,作为阿片受体不同亚型的KOR和ORL1受体之间有可能存在着异源二聚体,这也为进一步解释阿片受体结构的多样性和功能的复杂性提供了新的实验依据。