我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行病学调查

为调查我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行状况,2018年3—5月,在我国11个省份67个场点,随机采集4 792份咽喉/泄殖腔拭子样品,通过RT-PCR进行流感病毒检测。结果显示:所检测的4 792份样品中,H7N9亚型阳性率为0,H9N2亚型阳性率为25.21%;场点阳性率为80.60%,其中活禽市场场点阳性率(96.30%)显著高于其他场所(15.38%)。与历年流行病学调查数据相比,2018上半年H9N2亚型病毒阳性率显著高于往年同期检测值(P0.05),达到近年来最高点。病毒核酸序列分析显示,检出的H9N2亚型病毒属于2007年以来我国H9亚型主要流行分支,即h9.4.2.5分支。本次调查结果表明,我国实施的H7N9疫苗免疫政策有效遏制了H7N9亚型流感的蔓延,而H9N2亚型流感病毒在我国持续流行多年,感染范围广,感染率有增高趋势,需要采取新的防控策略。     

传染性皮下及造血组织坏死病毒NJ株ORF3基因的原核表达及生物信息学分析

为探究本实验室分离的传染性皮下及造血组织坏死病毒NJ株(IHHNV-NJ)ORF3基因编码蛋白的结构特征,本实验根据ORF3基因序列设计引物,利用PCR方法克隆ORF3基因序列,并构建至原核表达载体p ET-32a(+)中。对成功构建的p ET32a-ORF3重组表达载体进行原核表达,获得49 ku的融合蛋白,符合预期大小。通过生物信息学软件对ORF3基因编码蛋白序列进行分析,结果显示,ORF3基因序列长度为990 bp,编码329个氨基酸;ORF3基因编码蛋白理论分子质量为37 385.2 u,等电点为7.22,为亲水性蛋白;该编码蛋白序列不存在跨膜区、信号肽切割位点;二级结构含有55.9%的α-螺旋、52.0%的β-折叠以及13.4%的β-转角;抗原表位分布较广泛,抗原性强;该编码蛋白序列不存在潜在的N-糖基化位点,存在13个潜在的O-糖基化位点和17个潜在的磷酸化位点。进化树结果表明,NJ株的ORF3基因编码蛋白序列与6株IHHNV序列同源性均高于96%,与厄瓜多尔株同源性最高,为99.7%。研究表明,ORF3基因编码IHHNV衣壳蛋白;O-糖基化位点可参与衣壳蛋白的组装过程及细胞侵染过程,磷酸化位点可参与病毒在对虾细胞内的增殖过程;ORF3编码蛋白序列保守性强,不影响病毒毒力和个体间感染能力。     

副猪嗜血杆菌上海分离株的生物学特性与基因型分析

从培养特性、生化特性和耐药特性等多方面研究了副猪嗜血杆菌(HPS)上海分离株的生物学特性。各分离株因生存环境差异等原因表现出不同的生化和耐药特性,分离菌株对多种药物完全耐药,并且各菌株耐药性各不同。根据16SrRNA序列设计引物建立了目的条带为821bp的特异PCR快速检测方法,并对其产物进行测序鉴定与比对分析,结果表明所有分离株的PCR扩增产物序列比对结果与此前报道的HPS的同源性为97.3%～100%。运用ERIC-PCR扩增建立指纹图谱,通过聚类分析以确定其基因型特征,ERIC-PCR将20株菌分为Ⅰ和Ⅱ2个大类群,分离株均属于Ⅰ群A亚群。快速PCR检测方法的建立和基因型研究为上海地区HPS的监控提供了理论基础,并揭示各分离菌株具有一致的遗传进化背景与方向。     

大鸨羽毛微观结构研究

用扫描电子显微镜和光学显微镜对大鸨（Otis tarda)不同部位羽毛进行了微观结构观察研究，结果表明：具飞翔功能的飞羽和尾羽主要是由有钩羽小枝和无钩羽小枝构成；有钩羽小枝和无钩羽小枝相互扣搭形成坚实的羽面。有钩羽小枝的小钩数为5、6、7、8不等，背腹纤毛数为10、12对，腹齿为4枚；无钩羽小枝的腹齿为5、6枚。廓羽主要由有钩羽小枝、无钩羽小枝和节状羽小枝构成，有钩羽小枝的小钩数为6、7个，纤毛数为12、13对；无钩羽小枝的腹齿为4枚。不具飞翔功能的绒羽和头部饰羽主要是由节状羽小枝构成。研究还发现，有钩羽小枝和无钩羽小枝是由节状羽小枝演化而来。羽轴和羽枝轴的表面盖为多边形的角质花纹，髓质层由多孔的髓腔构成。     

伪狂犬病病毒TK、gE双基因缺失传代致弱株的安全性及免疫效力研究

为获得安全、有效的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)变异株弱毒疫苗，在前期研究的基础上，对PRV变异株TK、gE双基因缺失株(PRV LA1206株)进行传代致弱，在鸡胚成纤维细胞上连续传代75次，后经连续5代挑取单个病毒蚀斑克隆而得F₈₀代，毒种命名为PRV LA1206-80株，并对其进行安全性及免疫效力评价。生长动力学试验结果显示，PRV LA1206-80株与PRV LA1206株生长动力学相似。仔猪安全性试验结果显示，滴鼻接种1日龄PRV抗体阴性仔猪后所有仔猪均未出现发热及临床症状，表明该毒株对1日龄仔猪安全。攻毒保护试验结果显示，28～35日龄仔猪肌肉注射接种PRV LA1206-80株或PRV LA1206株7 d后进行变异株PRV AH02LA株滴鼻攻毒，可产生良好保护，所有仔猪均未出现体温反应、临床症状和排毒。而PRV Bartha K61株免疫猪7 d后攻毒，均出现了体温反应，其中1头发病，且鼻拭子样品均检出病毒。综上所述，相较于PRV LA1206株，在鸡胚成纤维细胞上连续传代后获得的PRV LA1206-80株已...