胃癌及癌前组织中端粒酶活性及端粒限制性片段长度的检测及其临床意义

采用ＴＲＡＰ法检测了１７６例不同病变胃粘膜组织端粒酶活性（ＴＡ）,同时采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术检测了３５例胃癌及其相应的１９例癌旁和１３例手术切缘组织端粒限制性片段（ＴＲＦ）长度。结果显示：①１７６例不同胃粘膜病变中,慢性萎缩性胃炎（ＣＡＧ）、肠上皮化生（ＩＭ）、异型增生（Ｄｙｓ）及胃癌（ＧＣ）ＴＡ阳性检出 率分别为２４．６％、３８．５％、３７．５％及９２．３％,而正常组织（Ｎ）未检出ＴＡ,明     

用BC2单抗检测胃癌及癌前病变组织中MUC1基因表达及其意义

 目的　揭示胃癌及肠化组织中MUC1基因的表达与其临床病理行为之间的联系。方法　用BC2抗体和免疫组化SP法检测人正常胃肠道粘膜、肠化粘膜以及胃癌组织中MUC1基因核心肽的表达。结果　人正常胃粘膜组织中广泛分布MUC1基因产物(100%),抗原主要位于上皮层和胃腺的中下部;肠化和胃癌组织中的表达阳性率分别为79.3%和82.6%;胃癌组织中MUC1基因表达与患者的性别、部位、大小、淋巴结转移、分化类型、浸润深度、临床分期和Lauren氏分型之间无关(P>0.05);但MUC1基因强阳性者与中弱阳性者之间的临床分期存在明显的差别(P<0.05),表达越强,Ⅰ～Ⅱ期的可能性越小;不同类型肠化中MUC1基因的表达无差异(P>0.05)。结论　上述结果提示用BC2抗体检测的MUC1基因可能是胃癌进展的有用标志,可能与胃癌患者的临床病理行为之间有关,而与肠化分型无关。     

负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。     

细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染HepG2细胞,采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C（cyt C）的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少,Bax和胞质cyt C表达明显增加;未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带,转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带。结论RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质,激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡。