Stat3 mRNA靶向MicroRNA重组质粒的构建及其在HepG2肝癌细胞系中的表达

目的构建并筛选靶向信号转导和转录激活因子3（Stat3mRNA）的微小RNA（MicroRNA）表达质粒。观察其在肝癌细胞系HepG2中对Stat3表达的影响。方法针对人Stat3mRNA设计3条MicroRNA序列,经退火成互补双链,将双链DNA插入线性质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒中,分别构建重组表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3等3组质粒,并测序鉴定。脂质体法转染重组质粒至人肝癌HepG2细胞中,观察转染效果。RT-PCR和Western blot分别检测Stat3mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功构建靶向Stat3的MicroRNA重组质粒,经测序证实插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致,转染人肝癌HepG2细胞后,荧光显微镜下可观察到带有绿色荧光的HepG2细胞。流式细胞仪检测3组质粒的转染效率分别为：76%、73%和63%。RT-PCR分析pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3的抑制率分别为：73.5%、47.2%和39.6%,下调Stat3蛋白的比例分别为：89.1%、71.6%、67.3%。其中pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1的下调效应最明显。MiR-1质粒转染组的细胞凋亡率升高,增殖受抑制,与阴性对照质粒组和未转染组比较,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论成功构建了靶向Stat3的MicroRNA表达质粒,其对肝癌HepG2细胞Stat3的表达及增殖有显著抑制。     

胃癌患者内皮细胞微颗粒的检测及其意义

目的比较胃癌患者与正常对照组血浆中内皮细胞微颗粒（EMPs）、血管性血友病因子（vWF）水平的变化,探讨EMPs检测在胃癌中的意义。方法采用流式细胞术及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测68例胃癌患者和20例正常对照者血浆中EMPs、vWF的水平,分析这些指标与临床特征的关系。结果胃癌患者血浆vWF及EMPs水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,血浆vWF及EMPs水平Ⅲ、Ⅳ期患者高于Ⅰ、Ⅱ患者（P〈0.01）,有淋巴结及肝转移者高于无淋巴结及肝转移者（P〈0.01）,有静脉浸润者高于无静脉浸润者（P〈0.01）,浸润至肌层、浆膜层者高于浸润至黏膜或黏膜下层者（P〈0.01）。结论血浆EMPs可准确反映内皮功能,内皮功能紊乱参与胃癌的转移过程,EMPs可作为判断胃癌的病情、预后、疗效的指标之一。     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景：有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。 目的：观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。 方法：以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组：对照组(未进行药物治疗)、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein+小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。 结果与结论：与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein+小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低 (P < 0.05);并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

p53正向凋亡调节因子重组腺病毒载体的构建及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 构建p53正向凋亡调节因子重组腺病毒(Ad-PUMA)载体,探讨Ad-PUMA对人体内外胰腺癌的治疗作用.方法 利用Ad-Easy系统在大肠杆菌同源重组,构建Ad-PUMA腺病毒载体,在293细胞内成功包装并鉴定后,以Ad-PUMA转染人转移胰腺癌细胞株AsPC-1.用MTT法检测转染前后存活细胞,观察Ad-PUMA的体外抑瘤作用;用Western blot方法鉴定转染前后AsPC-1细胞内PUMA蛋白表达.通过裸鼠皮下胰腺癌移植瘤模型观察Ad-PUMA的体内抑瘤效果;Westem blot方法鉴定Ad-PUMA转染后肿瘤组织内PUMA蛋白表达,TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling)法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 在体外,随着Ad-PUMA感染剂量增加,细胞内PUMA蛋白表达逐渐增加,细胞存活率逐渐下降;在体内,Ad-PUMA可显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,其抑瘤率为44.2%,瘤体组织PUMA表达水平及凋亡指数明显升高.结论 PUMA抑制体内外胰腺癌细胞增殖,可能是一种潜在的肿瘤生物治疗手段.     

X线下放置鼻空肠营养管在危重症早期肠内营养中的应用

目的:探讨X线下放置鼻空肠营养管,在危重症病人早期肠内营养中的临床应用价值.方法:在X线监视下,将带有金属导丝的营养管自鼻腔经胃、十二指肠,置入空肠,拔出导丝,注入造影剂,确认营养管前端已进入Treitz韧带后30 cm以远.结果:X线下可将营养管放置至Treitz韧带30 cm以远的空肠部位,置管成功率为100%,置管时间为10～40(平均20)min.置管后营养管在位良好,喂养过程顺利.结论:X线下放置鼻空肠营养管,是一种操作简便快捷、安全可靠的置管技术,为危重症病人早期肠内营养支持提供了一条更有效的营养途径.