肿瘤细胞疫苗的研究进展

恶性肿瘤是威胁人类健康和生命的主要疾病之一,其发病率逐年增高,有效地治疗恶性肿瘤是一项长期而艰巨的任务。目前,常规的治疗恶性肿瘤的手术、放疗、化疗等手段尚不能达到满意的治疗效果,并且都伴有明显的毒副作用。因此,寻找副作用小又能有效控制肿瘤生长和转移的治疗方法     

小鼠脑动脉平滑肌钙激活钾通道基本特性和动力学调控研究

目的采用膜片钳技术记录小鼠脑动脉平滑肌细胞上的大电导钙激活钾通道(BKCa)和自发瞬时外向电流(STOCs),研究了其基本特性以及钙离子对通道动力学的调控。方法采用两步法急性酶分离小鼠脑动脉,得到单个平滑肌细胞。使用200μg/mL两性霉素B为穿孔剂进行穿孔全细胞膜片钳实验,包括全细胞宏观电流记录和STOCs记录,采用inside-out和outside-out构型进行单通道电流记录。结果 BKCa宏观电流和STOCs能够被BKCa的特异性阻断剂IbTX(200nmol)阻断。BKCa单通道具有明显电压依赖性(半数最大激活电压V1/2=78.09mV)、K+选择性和钙敏感性(Ca2+解离常数Kd=0.881μmol),能够被胞外IbTX阻断。胞内Ca2+调控通道动力学特性主要表现为减少了开放时间常数,促进了通道由关闭向开放的转变。结论 BKCa宏观电流和STOCs非常容易记录,单通道活性好,具有BKCa的电生理学特性。小鼠脑动脉平滑肌是研究BKCa功能活动和血管活性药物作用机制的良好实验标本。     

血管平滑肌钙信号研究进展

钙离子是各型细胞中普遍存在的第二信使,能调节细胞的许多生理过程,其中包括血管平滑肌的收缩过程。血管平滑肌细胞内由兰尼定受体与三磷酸肌醇受体介导产生的胞内钙释放,对胞内钙离子浓度的调节极为重要。     

一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法

目的：探讨一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法,使细胞内环境保持稳定,改善常规全细胞膜片钳破膜所造成的封接不稳定。方法：以人肠系膜动脉平滑肌细胞为研究对象,采用穿孔全细胞膜片钳技术,记录人肠系膜动脉平滑肌细胞上大电导钙激活钾通道（big-conductance Ca2＋-activated potassium channels,BKCa）宏观电流以及自发性瞬时外向电流（spontaneous transient outward currents,STOCs）。结果：采用这种穿孔全细胞膜片钳技术,能有效记录到人肠系膜动脉平滑肌细胞上BKCa和STOCs。结论：穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法,该方法的建立为今后更深入的研究提供实验基础。     

人心房组织膜蛋白SK2的提取方法

目的：优化人心房组织膜蛋白提取方法。方法：分步离心法提取心肌膜蛋白,SK2膜蛋白用western-blot检测。结果：BCA检测出蛋白浓度,western-blot检测出蛋白条带。结论：此方法能够提取人心房组织的膜蛋白SK2,该方法简单,稳定,可靠,提取的膜蛋白质量好,浓度高,并能进行下一步的western-blot的实验,以便将来检测SK2膜蛋白在窦性和房颤患者心房组织之间表达的差异。     

心脏缺血预处理及其应用研究现状

1986年Muny等发现当反复短暂的缺血和再灌注之后心脏对缺血状态产生适应,这种适应可以使心肌在后续的持续性缺血中得到保护,保护效应有能量消耗的降低和在缺血过程中细胞损伤状况的延迟,由此他们提出了“缺血预处理”这一概念,此概念的提出纠正了多年来人们一直认为反复短暂心肌缺血会造成累积性损伤,最终导致心肌梗塞的观点,从此缺血心肌的保护及其机理探讨开始了崭新的一页。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

目的　了解致痫剂马桑内酯 (CL)对培养的大鼠海马锥体神经元细胞膜钙激活钾通道 (KCa)的调节作用及癫痫的发病机理。方法　采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果　 1在内面向外式膜片下 ,KCa(12 0 .34± 2 5 .12 ) p S表现出钙离子浓度依赖性 (n=6 )、电压依赖性 (n=17)和四乙基胺 (TEA)阻断特点 ;2在细胞贴附式膜片下 ,浴液中加入 CL 可明显激活 KCa(P<0 .0 1) ;3在对称性高钾溶液中 ,使浴液 [Ca2 + ]i 为 10 - 8m ol/L,维持神经元膜电位为 2 0 m V,当 CL 为 0 μl/ m l和 1.0 μl/ m l时 ,可分别使 KCa开放概率从 0 .0 2 5增加到 0 .5 5 3(P<0 .0 1) ,通道活动的平均开放时间 (ms)从 1.875± 0 .4 12增加到 6 .82 9± 0 .136 ,平均关闭时间 (m s)从 179.342±13.831降低到 6 .4 12± 1.383(n=2 5 ,P<0 .0 1)。结论　在 CL 诱导的癫痫发病中 ,钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

“五心烦热”客观表达的临床探索

目的:探索五心烦热症的客观表达方法。方法:采用临床观察方法,选取临床阴虚证有五心烦热与非阴虚证有五心烦热患者为研究观察对象,设正常人为对照组,测试其手心温度改变,观察患者五心烦热与手心温度变化之间的关系,从而探索五心烦热症的客观表达方法。结果显示:阴虚证有五心烦热组和非阴虚证有五心烦热组分别与对照组比较均存在显著差异(P<0.01),表明:手心温度的变化与五心烦热症之间具有一定的相关性,可作为"五心烦热"客观表达的方法之一。     

重组蛋白酶切方法的比较与分析

目的探讨制备纯化重组蛋白的酶切方法,比较不同蛋白纯化方法的差异。方法在大肠杆菌BL-21中分别诱导表达p GEX-6p-3/CT1,p GEX-6p-3/CT3,p GEX-6p-3/Ca M,p GEX-6p-3/Ca MKⅡ。采用超声破碎、B-per试剂以及B-per试剂加变性复性试剂盒等方法制备带GST标签的融合蛋白,进一步在不同条件下使用蛋白酶进行酶切获得相应蛋白。将制备得到的蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定,同时,使用pull-down方法对蛋白活性进行鉴定。结果采用B-per试剂以及变性再复性试剂盒,同时酶切时加入DTT,能得到较高浓度与纯度的CT1蛋白。而无论采用B-per试剂或超声破碎,只要酶切时加入DTT均能获得CT3蛋白。采用简单的超声破碎,酶切时不需加入任何试剂即可得到高浓度与高纯度的胞浆蛋白Ca M,而目前仍没找到纯化Ca MKⅡ蛋白的理想方法,需进一步的实验研究。结论重组蛋白酶切纯化方法存在差异,DTT可能在酶切纯化蛋白时起到关键作用。     

高频心电图及高速扩大心电图对冠心病诊断价值的评价

应用高频心电图（ＨＦＥｃＧ）和高速扩大心电图（ＨｓＭＥＣＧ）技术，对２３４例冠心病患者和２２２例正常人进行了对比研究。结果：ＨＦＥＣＧ六导切迹数正常值范围上限为３个，频率正常值范围上限为、７８．５Ｈｚ，ＨｓＭＥｃＧ的ＰｔｆＶ１正常值范围下限为－０．０２５８ｍｍ·ｓ；冠心病组的六导切迹数为５．１７±１．９９个，最高频率为１１４．６±６７．４Ｈｚ。ＰｔｆＶ１为－０．０３７±０．０１７ｍｍ·ｓ，均明显高于正常人（ｐ＜０．００１）；③对冠心病的诊断，若以六导切迹数＞４个为标准则敏感性、特异性、正确性分别为８１．９％、９８．２％、９１．２％，若以最高频率＞８０Ｈｚ为标准则敏感性、特异性、正确性分别为６６．３％、９４．６％、８２．４％，若以ＰｔｆＶ１＜－０．０２６ｍｍ·８为标准则敏感性、特异性、正确性分别为６９．５％、９５．５％、８０．１％；④不同ＥＣＧ检测技术对冠心病诊断的敏感性排序为ＨＦＥＣＧ切迹计数法＞ＨＦＥＣＧ频谱分析法＞ＨＳＭＥＣＧ的ＰｔｆＶ１法＞常规ＥＣＧ的ＰｔｆＶ１法。结果提示，ＨＦＥＣＧ和ＨｓＭＥＣＧ是诊断冠心病敏感性、特异性高的无创伤性检测技术。