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目的探讨纯化的结核杆菌Ag85A重组蛋白激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型结核疫苗的设计打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的重组表达Ag85A蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定Ag85A重组蛋白的免疫原性。结果以刺激系数(SI)>3为界,Ag85A重组蛋白(10μΜ)能刺激全部12例HL-A*0201阳性(A2 )结核菌素阳性(PPD )健康个体的PBMC发生增殖(平均SI为56.2±3.6);增殖反应明显高于PPD(平均SI为13.7±3.5)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在Ag85A重组蛋白诱导的CTL细胞毒活性分析中以负载抗原肽(10μΜ)的T2细胞作为靶细胞,Ag85A重组蛋白诱导的CTL作为效应细胞,Ag85A重组蛋白能诱导全部的12例A2 PPD( )健康个体中CTL杀伤活性,平均活性分别为(85.2±8.5%),显著高于PPD〔(平均为(21.6±1.7%)〕(P<0.01)诱导的CTL杀伤活性。结论本研究得到的重组优化Ag85A蛋白具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性,为进一步开发有效的结核疫苗打下了基础。 相似文献
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目的构建细胞外基质蛋白1基因(ECM1)的真核表达载体ECM1-pEGFP-N2,检测其在人乳腺癌细胞系MCF-7中表达。方法采用PCR方法,以ECMleDNA为模板,扩增出ECM1基因,用Bg1 Ⅱ和KpnⅠ双酶切ECM1基因和pEGFP-N2载体,连接酶切目的片段,转化大肠杆菌DH5,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定;利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达。结果利用PCR克隆出约1.6kb的ECM1基因;PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果证实成功构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体;转染MCF-7细胞后,可在细胞内观察到报告基因产生的绿色荧光,用免疫组化方法可检测到ECM1蛋白。结论成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7细胞中表达,为进一步研究ECM1的功能奠定了基础。 相似文献
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目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8 CTL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据.方法:应用SYFPEITHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,利用T2细胞株分析各预测的抗原肽与HLA-A*0201分子的亲合力,选取高亲合力肽诱导特异性CTL细胞,检测各高亲合力肽刺激其特异性CTL细胞分泌的IFN-γ水平、在体外的CTL增殖反应以及细胞杀伤毒性,逐步鉴定出Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8 CTL表位.结果:SYFPEITHI数据库从Ag85C序列中预测到14条能够结合HLA-A*0201分子的抗原肽,其中3个抗原肽(170~178 aa、317~325 aa和144~153 aa)显示与T2细胞上HLA-A*0201分子有高结合力,而抗原肽FLTREMPAWL(144~153 aa)能够诱导大多数HLA-A*0201阳性结核患者及PPD( )健康志愿者产生特异性CTL细胞,并分泌大量的IFN-γ,能够诱导CTL体外发生增殖,能够产生特异性杀伤活性.结论:成功鉴定出抗原肽FLTREMPAWL(144~153 aa)结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8 CTL表位,可作为结核疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型有效的抗结核疫苗奠定了基础. 相似文献
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目的:克隆表达HLA-A*0201 α链胞外区与BirA酶底物肽(Bir A substrate peptide,BSP)的融合蛋白.方法:采用PCR技术从人HLA-A*0201 α链cDNA库中克隆基因的胞外区,拼接可生物素化的BSP片段序列后,经双酶切插入载体pET28a( )后在E.coli BL21(DE3)诱导高效表达,并对表达产物进行纯化与复性.结果:成功地扩增出HLA-A*0201/BSP基因并测序证实,构建了融合表达载体pET-HLA-A*0201,并获表达与纯化.结论:成功构建了HLA-A*0201/BSP融合基因,为进一步体外构建特定的HLA-A*0201四聚体,标记相应特异性CD8 T细胞提供物质基础. 相似文献
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正细胞间的交流对于生命活动来说至关重要。近期研究揭示了细胞间交流的第三种方式,即通过细胞分泌的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs),来进行相邻或远距离细胞间的交流~([1])。根据其来源和释放途径的不同,可对EVs进行分类~([2])。外泌体是一类可由多种细胞分泌的纳米级分泌小囊泡,根据来源细胞不同,它们可以进行不同细胞间的交流,并介导多种生物学效应。外泌体在大部分细胞中由多 相似文献
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蛋白芯片检测肿瘤标志物及其与其他方法的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C-12)检测肿瘤标志物的性能及其与国外检测系统的比较。方法分别选用湖州数康生物科技有限公司C-12、Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott 120004种检测系统对甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)、游离PSA(f-PSA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原242(CA242)、人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)和糖类抗原199(CA199)临床常见肿瘤标志物进行检测,所测得的数据进行统计学分析。结果C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I20004种检测系统在肿瘤标志物的检测中符合率呈显著正相关,而且敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值等均有很高的一致性。结论C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I2000在检测肿瘤标志物中具有较高的一致性,对肿瘤标志物的检测具有较高的实用价值。 相似文献
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目的研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C-12)检测肿瘤标志物的性能及其与国外检测系统的比较。方法分别选用湖州数康生物科技有限公司C-12、Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I2000 4种检测系统对甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)、游离PSA(f-PSA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原242(CA242)、人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)和糖类抗原199(CA199)临床常见肿瘤标志物进行检测,所测得的数据进行统计学分析。结果C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I2000 4种检测系统在肿瘤标志物的检测中符合率呈显著正相关,而且敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值等均有很高的一致性。结论C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I2000在检测肿瘤标志物中具有较高的一致性,对肿瘤标志物的检测具有较高的实用价值。 相似文献
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目的:探讨miR-93/Eph受体A4(EphA4)分子轴通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460 和H1299 细胞增殖和迁移的影响。方法:用qPCR 检测H460 和H1299 细胞中miR-93 表达水平。分别在H460 细胞中转染miR-93 模拟物(mimics)和EphA4 过表达质粒、在H1299 细胞中转染miR-93 抑制剂(inhibitor)后,用MTT、Transwell 实验检测miR-93 对转染细胞增殖和迁移的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93 与EphA4 之间的靶向调控关系。用Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、EphA4、ERK和p-ERK 蛋白的表达水平,用MTT、Transwell 实验检测同时过表达miR-93 和EphA4 对H460 细胞增殖和迁移的影响。结果:miR-93 在H1299 细胞中表达水平高于H460 细胞(P<0.01)。过表达miR-93 促进H460 细胞增殖和迁移(均P<0.01),敲低miR-93 抑制H1299 细胞增殖和迁移(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-93靶向调控EphA4,过表达miR-93明显下调H460细胞中EphA4 mRNA和蛋白表达水平(均P<0.05),过表达miR-93 通过靶向EphA4 并激活ERK通路促进H460 细胞的增殖和迁移(均P<0.01)。结论:miR-93 促进NSCLC细胞增殖和迁移,其机制可能与靶向调控EphA4 并激活ERK通路有关。 相似文献
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引起恶性肿瘤患者死亡的最主要原因是转移和复发,研究发现,循环肿瘤细胞(CTCs)在肿瘤转移和复发的过程中起重要的作用,并且在肿瘤的早期诊断、预后评估、检测肿瘤复发以及个体化治疗方案的选择等方面有着重要的意义。随着的研究不断深入,发现与原发灶肿瘤细胞相比,CTCs细胞表面分子以及相关基因的表达等生物学特性均发生改变,该文针对CTCs的生物学特性的研究进展作一综述。 相似文献