结核杆菌抗原Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位的预测及鉴定

目的 鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Rv0173中的HLA-A*0201限制性CTL表位.方法 应用数据库SYFPETTHI预测结核杆菌Rv0173中可能存在的HLA-A*0201限制性CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位.结果 位于Rv0173氨基酸序列肽3(21-30aa)和抗原肽7(161-170aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMCs增殖,并诱导产生特异性杀伤活性.结论 肽3(RLSQSADQYL)(21-30aa)和肽7(LLRGGGLVNL)(161-170aa)是抗原Rv0173上HLA-A*0201限制性CTL的优势表位,可作为结核疫苗设计的候选表位.     

血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒的性能评价

目的自建血管紧张素转化酶检测系统的性能评价。方法依据临床和实验室标准化协会(CLSI)标准中EP5-A2,EP9-A文件的要求,采用全自动生化分析仪对九强公司的ACE试剂盒的精密度、线性、与比对试剂的相关性以及可报告范围等一些性能进行评价。结果自建系统血清ACE高低值的批内CV分别为6.87%和2.39%,批间CV分别为6.09%和1.81%,日间CV分别为8.00%和2.8%均在厂家提供的小于10%的范围内;线性结果R2=0.99;与比对试剂相关系数r=0.990 56,且平均偏倚为8.55%有良好的相关性;血清ACE检测试剂盒可报告范围为9.0U/L-600U/L。结论自建ACE检测系统各项性能可以满足临床应用的要求。     

脓毒症实验室诊断的若干进展

脓毒症是目前急诊和重症监护病房（intensive care unit，ICU）所面临的一个棘手难题，特别是由其诱发的脓毒性休克和多器官功能障碍综合征（MODS），已成为ICU危重患者主要死亡原因。我国尚无确切的统计学数据，但毋庸讳言其也是临床上面临的一个重要问题。     

结核分枝杆菌Rv0309抗原的重组表达、纯化和鉴定

目的重组表达结核分枝杆菌Rv0309蛋白,以进一步探讨其免疫效应。方法将结核分枝杆菌抗原Rv0309的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0309重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0309重组子,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达重组Rv0309蛋白,其条带大小约23000,与预期结果相符。结论成功地进行了结核分枝杆菌抗原Rv0309的基因克隆与重组表达,为进一步研制新型结核病疫苗打下了基础。     

可溶性肝抗原的克隆、表达及初步临床应用

为克隆、表达可溶性肝抗原 (SLA ) ,本文采用RT PCR技术从人肝组织基因中扩增SLA全长cDNA ,经双酶切插入载体PQE 30并在大肠杆菌M15中表达。对表达载体PQE 30 /SLA中的SLA进行序列分析 ,表达产物用SDS PAGE、免疫印迹方法鉴定并初步临床应用。结果显示SLAcDNA序列与报道一致 ,表达产物在相对分子质量略大于 4 7× 10 4处有一条明显的蛋白带 ,该蛋白带能特异性与抗SLA阳性血清反应。表明构建的表达载体PQE 30 /SLA能表达具有抗原活性的可溶性肝抗原。以SLA融合蛋白为抗原检测 18例临床诊断为自身免疫肝炎患者 ,4例SLA抗体阳性。重组SLA融合蛋白的制备为自身免疫性肝炎的诊断及其发病机制研究提供物质基础     

甲氨喋呤治疗类风湿性关节炎起效时间观察

甲氨喋呤 (ＭＴＸ)治疗类风湿性关节炎(ＲＡ)具有肯定的疗效。为观察投药后ＲＡ患者临床改善与免疫学指标缓解所需时间 ,我们以自身为对照 ,观察了ＭＴＸ治疗有效的３２例ＲＡ患者在用药后其临床与免疫学指标改善状况及起效时间 ,现报告如下。１．对象按ＡＲＡ(１９８７年 )标准入选病例。功能分级为Ⅳ级、病情分期为Ⅳ期、近期用过病情缓解药、有严重内科并发症、外周血象异常、肝肾功能异常者均不予入选。所选皆为典型或确诊的ＲＡ患者 ,并处于活动阶段。其中女性２５例 ,男性７例 ,年龄１１～８０岁 ,平均(４８．１８±１７．１０)岁 ,病…     

两组中药复方对肝纤维化小鼠一氧化氮和白细胞介素2的影响

目的：研究防治肝纤维化中药复方对小鼠免疫调节作用。方法：将小鼠分成不同组别,采用不同剂量的二参泽术汤和丹参桃芎汤喂养20d后取血,用硝酸还原法测一氧化氮（Nitric Oxide,NO);用ELISA法测定白细胞介素2（IL－2）。结果：不同剂量的二参泽术汤和丹参桃芎汤组NO、IL－2值明显高于对照组,结果差异显著（P＜0．001）。结论：提示二参泽术汤和丹参桃芎汤对小鼠的免疫调节具有积极作用,为防治肝纤维化过程中中药扶正提供了理论依据。     

血清微小RNA在肺癌诊断及预后评估中的作用

肺癌是世界范围内引起癌症相关死亡的首要原因.寻找能够进行早期检测、预测转移和预后以及侵入性小的方法对于提高肺癌患者生存率有重要作用.微小RNA(miRNA)是一类非编码小RNA分子,通过与目标mRNA序列互补配对导致翻译抑制和(或)mRNA降解.miRNA在肿瘤的发生和发展过程中起着重要作用,包括肺癌在内的很多恶性肿瘤中都可以发现miRNA的表达失调.最近研究表明,miRNA不仅可以在石蜡包埋组织和体液中保持稳定,而且在血清和血浆中也可以稳定存在,这个特性使循环miRNA有望成为一种新型分子标志物,为肺癌的早期分子诊断、预测转移及预后开辟了一个新的研究领域.     

腺苷脱氨酶和癌胚抗原联合检测在结核性与恶性肿瘤胸腔积液鉴别诊断上的价值

目的为鉴别结核性和恶性肿瘤胸腔积液提供一种比较快速及有实用价值的检测方法。方法采用速率法和化学发光法分别检测65例结核性胸腔积液患者和60例恶性肿瘤胸腔积液患者胸腔积液的腺苷脱氨酶(ADA)活性和癌胚抗原(CEA)含量。结果结核组及恶性肿瘤组胸腔积液ADA活性分别为(52.9±22.8)U/L和(13.8±5.7)U/L,二者比较差异有统计学意义(P0.01)。恶性肿瘤组胸腔积液CEA含量为(37.8±17.6)ng/mL,明显高于结核组[(7.9±2.8)ng/mL](P0.01)。结论胸腔积液ADA与CEA对结核性和恶性肿瘤胸腔积液具有鉴别诊断价值。     

人外周血单个核细胞BLyS127-285的克隆、表达和纯化

目的:从人外周血单个核细胞中克隆出B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)胞外区片段BLyS127-285,并进行表达和纯化.方法:采用RT-PCR技术,从人外周血单个核细胞中扩增BLyS127-285,测序后构建原核表达载体,经IPTG诱导表达及Ni-NTA纯化,以SDS-PAGE和Western印迹法进行鉴定.结果:RT-PCR扩增出一个480 bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的人BLyS127-285的cDNA序列一致,该胞外区片段在大肠杆菌中得到高效表达,表达量可达菌体总蛋白的49.8%,纯化后纯度可达97.0%.结论:成功地从人外周血单个核细胞中扩增出人BLyS127-285,并获得高效表达,其纯化产物为进一步研究其功能、开发与临床应用奠定了基础.