短片段一步法RT-PCR方法的建立

0　引言　传统 RT- PCR方法需要用反转录酶将 RNA先反转录成 c DNA,然后用 Taq酶对 c DNA进行 PCR扩增 ,而且往往需要巢式 PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度 ,操作比较麻烦 .有人发现 Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性 [1 ] ,可以实现只用 Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法 RT- PCR扩增 .但是我们在实验过程中发现 ,利用Taq DNA聚合酶进行一步法 RT- PCR反应成功率往往不高 ,这可能是因为 Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的 .为此 ,我们重新设计了实验方法 ,以提高用 Taq DNA聚合酶进行 RT- PC…     

外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的相关基因克隆

目的 克隆外源核酸促电脑辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的相关基因。方法,建立BALB／c小鼠电脑辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的6,12,及24h,4和8d的模型,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD－PCR技术,获取与受照小鼠肠腺损伤修复相关的基因克隆,对其进行全自动测序与GeneBank检索,新基因递交给基因库,结果获取了90个与肠腺修复相关的基因,杂交证实在核酸治疗组与生理盐水治疗组之间呈差异表达,其中18个是新基因,GeneBank接受员为AF240164－240181。结论克隆了18个外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺修复相关基因。     

胶体金免疫层析试验快速检测HBsAg

0　引言　胶体金免疫层析试验是 2 0世纪 90年代初在免疫渗滤技术[1 ] 的基础上建立的一种快速简便的免疫检测技术 .我国有 40 %左右的人感染过乙型肝炎病毒 ,其中约有 1 0 %的人携带 HBs Ag,因而快速准确地检测和普查 HBs Ag,对于乙型肝炎的预防、诊断和治疗 ,具有极大的实用价值 .为此 ,我们研究建立了快速检测 HBs Ag的胶体金免疫层析试验 (GI-CA) ,取得了较为满意的结果 .1　材料和方法1 .1　材料　氯金酸购于上海试剂一厂 ;免疫层析的材料由吸水玻璃纤维、吸附胶体金的玻璃纤维纸、硝酸纤维素薄膜和塑料支持物四部分构成 ;抗 - H…     

药物基因组学与个体化医药专业人才教育探讨

通过探讨药物基因组学与个体化药物研发、临床用药以及遗传信息咨询、基因检测与分析等的关系,阐明药物基因组学相关知识与技能培养在个体化医药人才教育中的重要意义。进而分析国内外现状与差距,总结教研室实践经验,强调加强药物基因组学教育对促进我国个体化医药发展与专业人才教育,深化我国医学教育改革的重要意义。     

解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

目的 从新鲜培养的解脲支原体（URA）I型培养液获得其MB抗原主蛋白N端1／3保守区的基因，并体外表达，获得具有抗原活性的原核表达蛋白，为研制广谱、低廉及方便准确的URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础。方法 从新鲜培养的URA标准株I型培养液提取DNA模板，采用特异引物及聚合酶链方法获得其MB抗原主蛋白N端1／3保守区的基因，经克隆入测序载体验证DNA大小及序列后，将MB抗原主蛋白N端1／3保守区的基因克隆入高效原核表达载体，并在大肠杆菌中表达，初步以Western-blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性。结果 以笔者设计的特异引物，能得到预期大小的PCR产物，并能插入预定的克隆载体中测序，所得基因的序列符合目的基因的序列，其插入原核表达载体能获得表达，且表达产物具有抗原活性，能与感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论 所得到的MB抗原主蛋白N端1／3保守区片段的基因，与GENE BANK检索序列一致。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物，有抗原活性，有望用于URA抗体检测及疫苗研制。     

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ,将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果　用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体,本方法的特异性为９５－８ ％ ,敏感性为９７－３ ％ ,两法符合率为９６－６ ％ ．结论　ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值．