我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157：H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的 探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7菌株的分布，流行以及分型情况。方法 用脉冲电场凝胶电泳（PFGE）方法进行分型，辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株进行研究。结果 根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱，可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株分成8个PFGE型别（PFGE1-PFGE8），宁夏菌株为PFGE1型和2型，徐州菌株有6个PFGE型，1986-1988年的分离菌株属于PFGE7型，1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型，1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE5型，从家畜家禽的粪便，食品，蔬菜等标本分离的19株菌，可以分为PFGE3-6等4个型别，其中，PFGE5型占优势（10株菌）。结论 爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品，蔬菜等有关，从我国部分地区分离的EHECO157：H7菌株的PFGE型别有地区性差异。     

副溶血弧菌分子分型数据库建立与分析

目的 对我国8个省（直辖市）分离的副溶血弧菌使用脉冲场凝胶电泳（PFGE）开展分子分型工作进行回顾性分析;建立副溶血弧菌PFGE分型数据库,分析其特征。方法 对2005-2014年期间分离自8个省（直辖市）的617株副溶血弧菌使用SfiⅠ酶切后进行PFGE实验,使用BioNumerics 5.01软件分析菌株的PFGE图谱并建立副溶血弧菌分子分型数据库。结果 本研究所建立的副溶血弧菌分子分型数据库共包含617条副溶血弧菌的分子分型信息。这些副溶血弧菌的PFGE图谱可以分为360个PFGE型别,按照PulseNet China的规则对这些PFGE型别进行编码。不同PFGE型别的相似系数介于35.8%~99.6%。237株外环境和食品分离菌株有221个PFGE型别,345株患者分离株有127个PFGE型别。相同血清型的副溶血弧菌具有相同或者非常相似的PFGE型别,而不同血清型之间的副溶血弧菌的PFGE型别差异则较大。大流行血清型（如O3:K6和O4:K8）具有多个优势PFGE型别,对于某些血清型,地理位置相近省份分离菌株的PFGE图谱相似性更高。结论 分离自患者菌株的PFGE图谱克隆化程度高,而分离自食品和外环境的菌株,PFGE图谱多态性较大。PFGE在发现病例成簇中能够发挥作用;对于患者相关PFGE图谱成簇的菌株应加强流行病学调查和溯源工作。     

对流行地区的E.coli O157∶H7病原学分析及研究

目的对流行地区O157∶H7进行病原学分析.方法 PCR方法对O157∶H7菌株毒力基因谱检测比较,同时用PFGE和RAPD方法对O157∶H7菌株的同源性分析比较.结果流行地区分离的O157∶H7菌株,100%携带Hly、eaeA基因,95.35%携带SLT2基因,11.63%携带SLT1基因.PFGE图谱表明流行地区分离的O157∶H7菌株与日本分离的O157∶H7菌株有明显差异,为不相关菌株;与国内标准菌株882364为近似型(相似,但不相同).流行地区病人分离菌株与外环境家畜家禽类便及昆虫肠道分离菌株的PFGE图谱完全相同.结论携带O157∶H7菌株的家畜家禽可能是导致疫情发生的传染源.PFGE用于O157∶H7病原学分析,对流行病学研究有重要意义,但不适宜基层.RAPD方法用于O157∶H7病原学分析,技术简便、省时.     

副溶血性弧菌耐药检测和分子生物学分型

目的 了解福州市副溶血性弧菌耐药情况及PFGE分型,为副溶血性弧菌污染引起的食物中毒防控提供科学依据。方法 收集福州市2018—2020年分离自福州市超市的海产品、养殖场所的水产品、养殖水、闽江水及食源性疾病暴发事件病例的副溶血性弧菌150株,采用Not I限制性内切酶对进行副溶血性弧菌酶切,以脉冲场凝胶电泳进行PFGE分型,并对对其中128株副溶血性弧菌进行耐药检测。结果 128株副溶血性弧菌对氨苄西林和头孢唑啉耐药率分别为82.6%和3.1%,对大部分抗生素敏感。150株副溶血性弧菌经酶切电泳后形成分子量在20~1 100 kb不同的12~18个条带,显示明显的遗传多样性,以85%相似度为标准,共分成120种PFGE型别。5起食源性疾病暴发事件菌株之间相似率在84.8%~97.2%,1起找到中毒食品,4起未找到。分离自同一养殖场同一池塘白鲢鱼和养殖场水2株副溶血性弧菌同源性达97.8%。结论 福州市副溶血性弧菌对于氨苄西林耐药率高,对大部分抗生素敏感,显示福州市沿海及江河湖抗生素污染可能较低。福州市同一起暴发病例菌株间具有同源性,不同海产品和海产品和闽江水之间环境分离菌株相似率低,亲缘关系相对较远, 可能和样品采集数量和质量有关,提示在暴发事件流行病学调查中应采集更多的环境样本,以准确找到病原菌污染源头。     

基于基因组序列的副溶血弧菌两种分型方法比较研究

  目的  比较基于全基因组测序（WGS）SNP的分型方案和多位点串联重复序列分析（MLVA）分型方案用于我国副溶血弧菌分子分型的能力,并分析两种方法的优缺点及适用情况。  方法  选取我国分离的56株副溶血弧菌,使用6个数目可变串联重复序列（VNTR）位点的MLVA方案和基于全基因组序列SNP的方案对这些菌株进行分子分型分析,通过量化指标评价这两种方法对我国分离的副溶血弧菌的分型能力。  结果  56株副溶血弧菌经MLVA分型,获得31种MLVA型,D值为0.949。 对56株副溶血弧菌进行全基因组测序,获得33个差异明显的基因型,D值为0.967。 两种分型方法对菌株的分辨能力十分接近,分型结果高度一致。  结论  6位点的MLVA分型方案与基于全基因组测序SNP的分型方案具有相似的分型能力,其分型能力稍弱。     

一起食源性疾病暴发事件分离的2种血清型沙门菌的病原学分析

目的 对一起食源性疾病暴发事件中分离的2种血清型沙门菌进行病原学分析。方法 采集2022年9月8日某学校暴发事件中病例肛拭子11件、可疑污染食品13件和环境样本10件；对病例肛拭子分别使用亚硒酸盐煌绿增菌液和脑心浸液肉汤（BHI）进行增菌培养，在完成常见肠道病原菌荧光PCR检测后，根据结果开展相应致病菌的分离培养；对可疑污染食品参照食品安全国家标准进行检测；每份肛拭子样本和食品样本均挑取多个疑似沙门菌菌落进行血清学凝集和全基因组测序；根据全基因组测序结果确定沙门菌血清型，基于菌株核心基因组单核苷酸多态性（SNP）进行聚类分析。结果 病例肛拭子和可疑污染食品沙门菌检出率分别为9/11和5/13，其中4例病例肛拭子和4件可疑污染食品样本均分离到2种血清型沙门菌（乌干达沙门菌和伊迪坎沙门菌），其余阳性样本分离沙门菌均为单一乌干达沙门菌血清型或单一伊迪坎沙门菌血清型。11件病例肛拭子样本接种BHI增菌液后12 h和24 h沙门菌荧光PCR检出率均为9/11，与分离培养结果一致。2种血清型沙门菌在基于核心基因组SNP构建的聚类树中形成2个相互独立且遗传距离较远的分支，而每一种血清型沙门菌也表现出基因组多态性，乌干达沙门菌之间SNP差异个数介于0~14个，伊迪坎沙门菌之间SNP差异个数介于0~23个。结论 本次事件为乌干达沙门菌和伊迪坎沙门菌共同导致食源性疾病暴发事件，基于BHI对病例肛拭子增菌并进行沙门菌荧光PCR检测的方案可在暴发中应用。